Midkine和Caspase-3在胰腺癌中的表达与细胞凋亡的关系

目的:研究人胰腺癌组织中Midkine(MK)和Caspase-3蛋白的表达特点,探讨其表达与胰腺癌细胞凋亡的关系.方法:收集人胰腺癌组织标本49例,免疫组织化学SP法检测MK和Caspase-3蛋白的表达,原位凋亡检测试剂盒辣根过氧化物酶(TUNEL)检测细胞凋亡指数.以同期15例正常胰腺组织标本为对照.结果:MK蛋白、Caspase-3蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率高于正常胰腺组织(71.4%vs0,P<0.01;77.6%vs46.7%,P<0.05),MK蛋白表达与胰腺癌组织学分化、临床分期和淋巴转移相关(P<0.05),Caspase-3蛋白表达仅与组织学分化有关;胰腺癌组织标本中,MK阳性表达组凋亡指数显著低于MK阴性表达组(5.13±2.69vs7.93±6.65,P<0.05);胰腺癌组织中MK与Caspase-3蛋白的表达呈负相关(r=-0.34,P<0.05).结论:MK和Caspase-3参与了胰腺癌的发生发展,MK在胰腺癌组织中的高表达具有抑制细胞凋亡的生物学功能,其作用机制可能是通过抑制Caspase-3的活性.

人Midkine基因启动子片段的克隆

目的克隆人M idk ine(M K)启动子基因2 335bp片段。方法自健康人血中提取人类基因组DNA作为模板,聚合酶链式反应(PCR)技术克隆人M K启动子基因2 335bp片段。琼脂糖凝胶电泳初步鉴定PCR产物,切取目的条带纯化并将其克隆入p GEM T载体中。选取阳性克隆进行DNA测序。结果电泳结果显示PCR产物包含有大小约为2 300 bp和1 400 bp的条带各1条;较大片段的测序结果显示,其与G enbank中的人M K启动子片段吻合。结论本研究成功克隆了人M K启动子基因2 335 bp片段。

维甲酸诱导肝癌细胞株凋亡及其与midkine基因表达关系的研究

探讨在肝癌细胞凋亡过程中维甲酸 (retinoicacid ,RA )与midkine基因 (MK )的关系。笔者采用肝癌细胞株HepG2 ,用含不同浓度的全反式维甲酸 (ATRA )的培养基处理。以Annexin V FITC双标记流式细胞仪 (FCM )法测定凋亡率 ,逆转录 -多聚酶链反应 (RT PCR)法检测MKmRNA的表达变化。结果示经ATRA作用的肝癌细胞凋亡率较对照组升高 ,MKmRNA表达增加 ,且随培养基中外源性RA的浓度递升而增加 ,肿瘤细胞凋亡率及MKmRNA的表达也逐渐增高。

Midkine在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨Midkine在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化EliVisionTMPlus法检测70例手术切除的原发性胰腺癌组织及15例癌旁胰腺组织中Midkine的表达。结果 Midkine在70例原发性胰腺癌组织中的阳性率为71.4%(50/70),而在癌旁胰腺组织中未见表达;Midkine表达与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、淋巴结转移显著相关(P<0.05)。Midkine表达阴性组累积总体生存率高于阳性组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Midkine的表达与胰腺癌的临床病理指标密切相关,其高表达提示患者预后不良。

原发性胆囊癌组织中Midkine的表达及其临床意义

目的观察Midine(MK)在原发性胆囊癌中的表达情况,并探讨其与原发性胆囊癌临床病理指标之间的关系。方法选择1995年1月～2003年6月胆囊癌53例、腹腔转移灶12例、淋巴结转移灶12例和正常胆囊20例、胆囊腺瘤14例,均采用免疫组织化学方法检测MK在其中的表达情况;结合53例胆囊癌患者临床病理资料分析MK表达指数与组织学类型、分化程度、临床分期、局部淋巴结转移、肝脏浸润及腹腔广泛转移的关系。结果正常胆囊、胆囊腺瘤与原发性胆囊癌的MK表达标记指数(LI)中位数分别为0%、17%(5%,29%)、72%(41%,98%),三者比较差异有高度统计学意义(P<0.01);胆囊淋巴结转移灶及腹腔转移灶Midkine表达LI的中位数分别为90%(76%,100%)、88%(65%,100%),二者Midkine表达LI与原发灶比较,差异有统计学意义(P<0.05);结合临床病理资料统计分析发现,胆囊癌的分化程度越低,Midkine表达LI越高,差异有统计学意义(P<0.05);Midkine在晚期胆囊癌中表达LI水平高于早中期,差异有统计学意义(P<0.05);Midkine在伴有肝脏浸润灶中表达LI水平高于不伴肝脏浸润,差异有统计学意义(P<0.05);Midkine在伴有广泛腹腔转移中表达LI水平高于不伴腹腔广泛转移,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Midkine可作为胆囊癌新的标记物;Midkine表达与胆囊癌发生、发展有关,对胆囊癌的临床分期、浸润转移的估计和病人预后的判断有一定意义。

血清midkine对甲状腺球蛋白抗体阳性甲状腺癌患者转移病灶的预测价值

目的研究midkine在甲状腺球蛋白抗体(TgAb)阳性的分化型甲状腺癌患者首次131I治疗前,对甲状腺癌是否有转移病灶的预测价值。方法根据严格的纳入和排除标准,入选151例分化型甲状腺癌患者,运用酶联免疫吸附法测定midkine(MK)水平。最终有转移病灶的TgAb阳性的分化型甲状腺癌患者28例,无转移病灶者123例。用受试者工作特征(ROC)曲线评估患者^(131)I治疗前MK预测转移病灶的价值。结果有转移病灶的分化型甲状腺癌患者的MK水平高于无转移的患者。MK显示出良好的诊断价值,最佳截断值为550 ng/L时,诊断准确率为83%,ROC曲线下面积为0.856(P<0.001)。结论当TgAb阳性而不适合用甲状腺球蛋白做标志物时,MK可以作为预测分化型甲状腺癌转移的标志物。

胃肿瘤组织中缺失型Midkine基因的克隆和表达

目的对人胃肿瘤组织中缺失型Midkine(tMK)基因进行克隆并在大肠杆菌中表达。方法根据Genbank报道的序列,设计一对引物,通过RTPCR从胃肿瘤患者肿瘤组织中获得了tMK成熟肽DNA编码序列,与pMD18Tvector连接测序后,将该片段克隆入大肠杆菌高效表达载体pBV222中,转化大肠杆菌DH5α,在42℃进行诱导表达。结果在胃肿瘤组织中克隆到tMK表达基因,并获得高效表达tMK重组蛋白的工程菌株DH5αpBV222tMK。SDSPAGE结果表明,pBV222tMK表达的重组蛋白与预计分子量一致。结论在中国胃肿瘤患者的肿瘤组织中也有tMK的表达,经克隆重组实现了在大肠杆菌中的高效表达。

细胞因子Midkine融合蛋白的表达及其单克隆抗体的制备与应用

目的:克隆细胞因子midkine(MK)基因,表达其融合蛋白,制备抗MK单克隆抗体(mAb)并检测MK在肿瘤细胞中的表达。方法:利用MK基因的特异性引物,通过RT-PCR从人肾癌组织mRNA中扩增人MKcDNA分子。将其定向克隆于原核表达载体中,在大肠杆菌中表达MS2-MK融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,用传统的杂交瘤技术,进行细胞融合、筛选、克隆化并制备mAb腹水。用ELISA法分析其Ig亚类,用免疫细胞化学染色法检测MK在肿瘤细胞中的表达。结果:成功地克隆出MK基因并表达了MS2-MK融合蛋白。通过免疫和筛选,获得2株分泌小鼠抗人MKmAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb的Ig亚类分别为IgG1和IgG2a。免疫细胞化学染色显示,2株mAb与人胃癌细胞株MGC803和胃癌组织呈强阳性反应。结论:在原核细胞中获得MS2-MK融合蛋白的表达,并制备出抗MK的mAb,为研究MK的生物学活性提供了条件。

胰腺癌组织中Midkine的表达与细胞增殖及凋亡的关系

目的研究Midkine(MK)蛋白在人胰腺癌组织中的表达与肿瘤细胞增殖和凋亡之间的关系及意义。方法收集人胰腺癌组织标本49例,免疫组化SP法检测MK蛋白和增殖细胞核抗原Ki67的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数,另取同期15例正常胰腺组织作对照。结果15例正常胰腺组织中均未发现MK和Ki67阳性表达,细胞凋亡较少(0.63±0.21);77.1%(35/49)的胰腺癌组织中有MK阳性表达,其表达与肿瘤组织学分级、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05);49例胰腺癌组织中Ki67平均标记指数(LI)为(31.67±15.41),平均凋亡指数(AI)为(5.93±4.18);MK表达阳性组Ki67平均标记指数为(35.27±16.03),显著高于阴性组的(22.67±13.66)(P<0.05);MK表达阳性组凋亡指数为(5.13±2.69),显著低于阴性组的(7.93±6.65)(P<0.05)。结论MK蛋白可作为反映胰腺癌生物学行为的指标之一,其在胰腺癌中的表达可能起到促进肿瘤细胞增殖和抑制凋亡的作用,MK基因可能成为胰腺癌治疗的新靶点。

新型肝素结合细胞因子midkine的心血管作用

Midkine (MK),a newly discovered heparin-binding growth factor,promotes growth,survival,and migration in various cells. Meanwhile,MK stimulates statistically significant forms in new arterioles and capillaries,causes vascular remodeling,prevents ischemia myocardial cells from injury via inhibiting apoptosis. MK also regulates the level of blood-fat. In general,MK plays key roles in cardiovascular diseases.

Midkine在局灶性脑缺血中的表达及意义

目的 探讨Midkine（MK）在局灶性脑缺血中的表达及意义。方法 采用腔内线栓法制成大鼠局灶性脑缺血模型LMCAO。应用RT-PCR检测缺血后1d组、2d组、14d组及对照组的MK表达情况。结果 在局灶性脑缺血后1d即有MK的表达,14d无MK表达,对照组呈阴性。结论 MK是一种即时表达因子,参与脑缺血急性期的修复。

Midkine基因在肿瘤治疗中的研究进展

中期因子(midkine,MK)是一种肝素结合生长因子,在多种肿瘤中存在过表达,与肿瘤发生、发展、转移和预后密切相关。目前针对Mikdine检测的试剂盒已经开发,针对Midkine的反义核苷酸、RNA干扰和小分子抑制剂的研究已经广泛开展,同时鉴于其在肿瘤内高表达,人们正在研究利用其启动子进行肿瘤治疗,并对其作为肿瘤标志物进行评估。本文就MK在肿瘤治疗中的研究进展做一综述。

Midkine特异的shRNA对胃肿瘤细胞BGC823增殖及凋亡的影响

目的研究shRNA干扰midkine对胃肿瘤细胞BGC823增殖能力及凋亡的影响。方法构建midkine基因的特异性小RNA干扰质粒,采用脂质体2000转染BGC823细胞,运用CCK-8检测细胞的增殖能力,PI染色检测细胞凋亡情况。结果成功转染重组体的BGC823细胞增殖明显受到抑制(P<0.01)细胞形成克隆数明显降低(P<0.01),并且有明显的亚二倍体峰出现(P<0.05)。结论针对midkine基因的特异性小RNA干扰质粒在体外能有效抑制人胃癌细胞BGC823 midkine表达,细胞增殖能力减弱,细胞凋亡增加,为midkine基因靶向治疗提供一定的实验依据。

Midkine shRNA对胃癌SGC7901细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究shRNA干扰midkine对胃肿瘤细胞SGC7901生物学特性的影响。方法:构建midkine基因的特异性小RNA干扰质粒,采用脂质体2000转染SGC7901细胞,检测细胞的增殖和克隆形成能力以及细胞凋亡情况。结果:与对照组相比,转染重质粒后1-5天,SGC7901细胞增殖明显受到抑制(P<0.01),细胞形成克隆数明显降低(P<0.01),并且有明显的亚二倍体峰出现(P<0.05)。结论:针对midkine基因的特异性小RNA干扰质粒在体外能有效抑制人胃癌细胞SGC7901 midkine表达,细胞增殖及克隆形成能力减弱,细胞凋亡增加,为midkine基因靶向治疗提供一定的实验依据。

乳腺癌组织中Midkine、Survivin、MMP2基因用于预测预后

目的:探讨Midkine、Survivin、MMP2表达与乳腺癌预后的关系。方法:通过免疫组化方法检测临床随访病例的乳腺癌组织中Midkine、Survivin、MMP2的表达,并分析与临床随访资料的关系。结果:62例乳腺癌病例中23例(37.1%)3项表达均阳性,18例(29.0%)2项表达阳性,21例(33.9%)仅1项表达阳性或均阴性。随肿瘤分期上升,表达阳性率增加。以阳性率作为危险度,显示阳性率与远处转移发生(P<0.001),及5年存活率下降相关(P<0.01)。结论:联合检测乳腺癌组织中的Midkine、Survivin、MMP2有助于判断预后。

Midkine在胰腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨人胰腺癌组织中Midkine(MK)的表达及其与肿瘤细胞增殖的关系和意义。方法免疫组织化学SP法检测49例胰腺癌、13例慢性胰腺炎及15例正常胰腺组织中MK和Ki67蛋白的表达。结果胰腺癌组织中MK和Ki67均高表达,阳性率分别为77.1%(35/49)、81.6%(40/49),二者的表达都与肿瘤组织学分级、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。胰腺癌组织中Ki67表达显著高于慢性胰腺炎(3/13,P<0.01)和正常胰腺组织(0/15,P<0.01)。慢性胰腺炎和正常胰腺组织中未见MK阳性表达。胰腺癌组织中MK蛋白的表达与Ki67的表达呈正相关(r=0.4,P<0.05)。结论检测MK蛋白对于胰腺癌的诊断及与慢性胰腺炎的鉴别诊断具有参考价值。MK在胰腺癌中高表达可能与肿瘤的发生发展及细胞增殖密切相关。

甲状腺结节患者血清Midkine检测及其临床意义

目的分析中期生长因子(MK)在甲状腺良性和恶性结节患者血清中的水平,探讨MK对诊断甲状腺结节良恶性的临床意义。方法收集因"甲状腺结节"入院行切除术171例患者的血清,收集健康体检各项指标均正常的22例正常人血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MK的浓度。结果良性结节患者122例,MK的浓度为(1.54±0.57)ng/ml,恶性结节患者49例,MK的浓度为(3.46±1.44)ng/ml,正常对照组MK的浓度为(1.44±0.45)ng/ml。甲状腺恶性结节组血清中MK浓度明显高于良性结节组,两组间有显著性差异(P<0.05),而甲状腺良性结节组与正常对照组的血清MK浓度接近,组间差异无统计学意义(P>0.05);采用ROC曲线分析,以2.25ng/ml为阈值,对诊断甲状腺恶性结节有较高的诊断效能。结论甲状腺恶性结节患者血清中MK浓度明显高于良性结节患者和正常人群,血清MK对甲状腺良恶性结节的诊断具有一定的临床意义。

细胞因子midkine基因的克隆及其转化甲醇酵母Pichia pastoris

目的克隆细胞因子midkine(MK)基因,并转化甲醇酵母Pichia pastoris。方法利用RT-PCR方法从人胃癌MGC803细胞总RNA中扩增MK cDNA,构建分泌表达载体pPic9k-MK,然后转入宿主菌GS115中,提取GS115的基因组DNA,用PCR法扩增鉴定阳性克隆。结果成功构建了分泌表达载体pPic9k-MK,并转入GS115中,筛选到抗4.0 mg/mlG418的重组菌株,鉴定出5个阳性克隆。结论MK基因可以转入甲醇酵母Pichia pastoris中,为今后在Pichia pastoris中表达有活性的MK蛋白,并进一步研究其生物学功能和作用机制奠定了实验基础。

Midkine基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的 :构建妊娠中肾细胞因子 (Midkine ,MK)的原核表达载体并诱导其表达。方法 :利用RT PCR技术从人胎儿肾组织总RNA扩增MK成熟肽的DNA的编码序列 ,将扩增产物插入至温控表达载体pBV2 2 0中并转化E .coliDH 5α温度诱导表达。结果 :琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物的长度与目的片段相符。对重组质粒分析表明 ,插入片段的序列与GeneBank发表的人MK基因编码序列一致。SDS PAGE电泳显示 ,重组菌高效表达出一个相对分子质量约为 13× 10 3 的蛋白产物。结论 :人MK编码序列已被克隆至表达载体pBV2 2 0中并在大肠杆菌诱导表达。