基于生物信息学分析Midkine在胆管癌中的表达及其对预后的预测价值

目的研究中期因子(MDK)在胆管癌(CCA)中的表达及其对患者预后的预测价值,探索MDK可能影响CCA进展的机制。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库获取CCA样本数据信息,分析MDK在癌与癌旁组织中的表达差异及其与临床特征的相关性,使用基因表达综合数据库(GEO)和解放军总医院第五医学中心2018年6月—2021年9月经手术切除的11例CCA患者的临床资料进行相关验证。通过STRING和Cytoscape构建蛋白互作网络,使用基因本体(GO)和京都基因与基因组数据库(KEGG)进行富集分析,探讨MDK相关基因所参与的生物学过程和肿瘤相关通路。此外,应用TIMER和TISIDB数据库分析CCA肿瘤组织中MDK的表达与免疫细胞浸润的相关性。计量资料两组间比较采用成组t检验或MannWhitney U检验。计数资料组间比较采用Fisher精确概率法。应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,并采用Log-rank检验进行组间比较。两变量间的相关性采用Spearman相关性分析。结果比较TCGA数据库中CCA患者肿瘤组织及癌旁组织中MDK的表达水平,非配对分析结果和配对分析结果均显示,MDK在CCA肿瘤组织中的表达水平高于癌旁组织(P值均<0.001);对纳入的11例CCA患者肿瘤组织及其配对癌旁组织标本进行转录组测序,结果显示,MDK在CCA肿瘤组织中的表达水平显著高于其配对癌旁组织(P<0.01)。MDK高表达与淋巴结转移(P=0.045)和血管侵犯(P=0.044)有关。生存分析显示,MDK高表达的CCA患者总生存期(χ^(2)=5.30,P=0.028)及疾病特异性生存期(χ^(2)=6.25,P=0.019)均明显短于MDK低表达的患者。GO和KEGG富集分析显示,MDK表达相关的30个基因与泛素介导的蛋白质水解过程密切相关,并影响CCA患者预后;TIMER分析结果显示,MDK表达与B淋巴细胞(r=0.356,P=0.0356)和树突状细胞(r=0.409,P=0.0147)在肿瘤组织微环境中的浸润呈正相关;TISIDB分析结果显示,MDK表达水平与CXCL16(r=0.465,P=0.00467)呈正相关,与CXCL12(r=-0.389,P=0.0197)及CXCR5(r=-0.393,P=0.0185)呈负相关;与免疫检查点调节剂VTCN1(r=-0.393,P=0.0183)、LTA(r=-0.380,P=0.0227)和PVR(r=-0.350,P=0.0373)呈负相关。结论MDK高表达提示CCA患者预后不佳,MDK有潜力成为预测CCA患者预后的分子标志物,其可能通过调控泛素介导的蛋白质水解过程及调控B淋巴细胞和树突状细胞的浸润促进CCA的发生发展。

中期因子Midkine水平与儿童过敏性紫癜关系的Meta分析

目的 评价中期因子(Midkine)水平与儿童过敏性紫癜(Henoch Schonlein purpura,HSP)的关系。方法 检索CNKI、CBM、CAJD、维普VIP、WangFang Data、PubMed、EMBase、Cochrane等数据库(检索时限截止至2021年10月),选择符合标准的临床试验,用Newcastle-Ottawa scale法对纳入研究的文献进行评估,用RevMan5.4软件进行Meta分析。结果 共纳入6篇文献,分3个亚组进行Meta分析,结果显示儿童血清中的MK水平,过敏性紫癜组(HSP)明显高于健康对照组(HC)、过敏性紫癜合并肾损害组(HSPN)明显高于健康对照组(HC)、HSPN组明显高于HSP组,且差异均有统计学意义(P <0.0001)。结论 HSP患儿及HSPN患儿的MK水平显著高于健康儿童,且HSPN患儿的MK水平显著高于HSP患儿,提示可以通过血清MK水平的变化,诊断儿童过敏性紫癜并预测患儿是否出现肾损害。但由于本研究纳入文献量有限,质量一般,因此仍有待开展多样本、多区域联合的临床试验进一步验证。

柴金解郁安神片调控CaMKII和Cofilin双信号通路改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑

目的探讨柴金解郁安神片调控钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)和Cofilin双信号通路,改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑的分子机制。方法皮质酮联合脂多糖建立抑郁症体外细胞模型,实验设正常组、模型组、GR阻断剂组、GR激动剂组、CX3CR1阻断剂组、CX3CR1激动剂组、柴金解郁安神片组、柴金解郁安神片联合GR激动剂组、柴金解郁安神片联合CX3CR1激动剂组,观察星形胶质细胞、小胶质细胞、前扣带皮层(anterior cingulate cortex,ACC)和海马神经元形态结构变化;检测ACC和海马谷氨酸能神经元激活及突触重塑情况;免疫荧光、Western blot分别检测海马谷氨酸能神经元内突触重塑相关谷氨酸受体2A(GRIN2A)、GRIN2B、CaMKII、MK2、Cofilin蛋白表达水平。结果柴金解郁安神片能明显改善胶质细胞、ACC和海马神经元损伤,并抑制ACC和海马谷氨酸能神经元异常激活,同时下调GRIN2A、GRIN2B、MK2蛋白,上调CaMKII、Cofilin蛋白,继而改善海马谷氨酸能神经元突触可塑性损伤和突触重塑。结论柴金解郁安神片能有效改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑,其分子机制与调节突触重塑相关NR/CaMKII、MK2/Cofilin信号通路有关。

MK8719激活STAT6并促进抗炎型小胶质细胞活化在缺血性脑损伤大鼠中发挥保护作用的研究

目的:观察氧连接N-乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)水解酶抑制剂MK8719在脑缺血损伤大鼠中的作用。方法:建立大鼠大脑中动脉梗塞模型模拟脑缺血再灌注损伤,通过2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色评估脑梗死体积,并通过改良的神经损伤评分量表评估大鼠的神经运动障碍减轻,HE和尼式染色用于评估脑损伤后组织改变,组织免疫荧光染色用于评估抗炎型小胶质细胞活化情况。体外培养BV2小胶质细胞并建立氧糖剥夺/复糖复氧模型模拟缺血缺氧再灌注损伤,Western blotting检测总蛋白及核蛋白中的信号转导及转录激活蛋白6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)、磷酸化STAT6及O-GlcNAc糖基化STAT6表达。酶联免疫吸附检测(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)评估小胶质细胞释放的炎性因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)量。结果:MK8719给药组大鼠梗死灶体积减小,神经运动障碍,抗炎型小胶质细胞比例增加;在体外培养的小胶质细胞中,MK8719组的O-GlcNAc糖基化STAT6、磷酸化STAT6及核STAT6表达增加(P<0.001),促炎因子(IL-6及IL-1β)释放减少(P<0.001),抗炎因子(IL-10及TGF-β)释放增加(P<0.001)。结论:MK8719对脑缺血损伤大鼠有保护作用,其作用机制可能与STAT6激活诱导的抗炎型小胶质细胞活化有关。

MK886和celecoxib对结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的 探讨通过5-脂氧合酶(LOX)抑制剂MK886及环氧合酶(COX)-2抑制剂celecoxib阻断花生四烯酸途径对结肠癌HT-29细胞增殖的影响。方法 CCK-8及EdU法分别检测不同浓度的MK886(200.0、100.0、50.0、25.0、12.5μmol/L)和celecoxib(200.0、100.0、50.0、25.0、12.5μmol/L)对体外培养的结肠癌细胞HT-29细胞的增殖抑制情况;采用细胞平板集落形成及细胞迁移能力实验检测经过MK886(25.0μmol/L)处理后的细胞克隆形成及迁移能力。结果 CCK-8结果显示,MK886及celecoxib均对HT-29细胞生长的增殖抑制率呈明显剂量和时间依赖性增加(P<0.05);EdU结果显示,MK886和celecoxib均能明显抑制结肠癌HT-29细胞DNA合成,且呈明显剂量依赖性(P<0.05);MK886对HT-29细胞克隆形成及迁移能力均有明显抑制作用(P<0.05)。结论 阻断花生四烯酸途径对结肠癌HT-29细胞增殖有明显抑制作用,但具体机制仍需进一步研究。

基于MK检验和小波谱分析的赣江上游旱涝变化特征研究

近年来在全球碳排放转型的大背景下,气候变化成为相关学者研究的热点问题。其中全球变暖带来的区域降水变率的不稳定性对社会可持续发展产生了重要影响。因此,为研究长时间尺度下的赣江上游地区环境变化规律,在相关气候要素中,选择旱涝变化作为衡量指标,利用MK检验和小波谱分析方法对近五百年旱涝变化趋势以及周期性特征进行研究。结果表明,赣江上游地区明清以来的近五百年旱涝变化趋势较为明显,总体上涝灾处于增加态势;通过小波谱分析得出,赣江上游地区旱涝演变具有一定的周期性,尤其是不同尺度下的演变周期具有异质性。本研究可以为区域可持续发展研究提供长时间尺度的气候演变规律历史相似型,并为旱涝灾害研究提供基础数据。

艺术之旅 MK&G博物馆大厅翻新项目

经过四个半月的翻新工作,汉堡FürKunst und Gewerbe博物馆(MK&G)全新的接待大厅终于落成。该接待厅由本土工作室Besau Marguerre设计完成,为游客打造清晰的寻路系统与快速的空间定位是设计理念中的核心,而全新的配色方案与改善后的音响效果,更为空间创造了宜人的氛围。项目的落成为提升博物馆的游客体验和安全做出了巨大的贡献,同时也使博物馆的服务达到了一个新的水平。

基于MK-SVM算法的大坝位移快速预测模型研究

大坝的位移趋势对其安全运行十分重要,而在非常规条件下快速得到大坝的预测模型的研究则相对较少。为使管理人员可以高效地掌握大坝位移的变化性态,基于多核支持向量机(Multiple-kernels support vector machine,MK-SVM)算法构建了一种快速实现大坝位移预测的模型,并讨论该模型参数的范围,利用相关评价指标计算度量模型的精度。由工程案例可知,该模型预测大坝变形的变化趋势与实测变形基本一致,模型预测精度可以满足工程运行需要。结论可为大坝管理人员提供有益借鉴。

The expression of midkine (MK) in pancreatic carcinoma and its clinical significance

Objective To investigate the expression of midkine (MK) and its relation with angiogenesis, biological features and prognosis of pancreatic carcinoma (PC). Methods MK expression and microvessel density (MVD) were determined in 52 cases of human PC with immunohistochemistry and results were compared with pathology. Results Mean MVD of PC was 64 ± 18 and positive expression of MK was detected in 38 cases (73%). The positive rate of MK was significantly lower in cases of without metastasis and at early clinical stage (stage Ⅰ - Ⅱ) than that with metastasis and at stage Ⅲ - Ⅳ. MVD was significantly higher in MK-positive PC than in MK-negative PC (P 【 0. 01). Follow-up showed that postoperative survival time was shorter in patients with positive expression of MK. Conclusion MK is closely related to angiogenesis PC. MK expression is one of the predictors for the biological behavior of PC. 4 refs, 1fig.

CYFRA21-1、miRNA-21、MK与非小细胞肺癌病理特征的关系及其诊断价值

目的探讨细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、微小核糖核酸21(miRNA-21)、中期因子(MK)与非小细胞肺癌病理特征的关系及其诊断价值。方法选取南乐中兴医院2022年2月至2023年2月收治的80例非小细胞肺癌患者作为观察组,另选取80例健康志愿者作为对照组。比较观察组与对照组CYFRA21-1、miRNA-21、MK水平,分析CYFRA21-1、miRNA-21、MK水平与非小细胞肺癌病理特征的关系,分析CYFRA21-1、miRNA-21、MK单独及三者联合检测诊断非小细胞肺癌的价值并绘制受试者工作特征(ROC)曲线。结果观察组CYFRA21-1、miRNA-21、MK水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);鳞状细胞癌患者CYFRA21-1、miRNA-21、MK水平高于腺癌患者,差异均有统计学意义(P<0.05),美国联合肿瘤委员会TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者CYFRA21-1、miRNA-21、MK水平高于Ⅰ+Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05),有淋巴结转移患者CYFRA21-1、miRNA-21、MK水平高于无淋巴结转移患者,差异均有统计学意义(P<0.05);CYFRA21-1、miRNA-21、MK三者联合检测诊断非小细胞肺癌的曲线下面积(AUC)值高于单项检测,具有统计学意义(P<0.05)。结论CYFRA21-1、miRNA-21、MK水平与非小细胞肺癌病理类型、肿瘤分期及淋巴结转移有关,联合上述指标可提高非小细胞肺癌的诊断效能。

Midkine和Caspase-3在胰腺癌中的表达与细胞凋亡的关系

目的:研究人胰腺癌组织中Midkine(MK)和Caspase-3蛋白的表达特点,探讨其表达与胰腺癌细胞凋亡的关系.方法:收集人胰腺癌组织标本49例,免疫组织化学SP法检测MK和Caspase-3蛋白的表达,原位凋亡检测试剂盒辣根过氧化物酶(TUNEL)检测细胞凋亡指数.以同期15例正常胰腺组织标本为对照.结果:MK蛋白、Caspase-3蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率高于正常胰腺组织(71.4%vs0,P<0.01;77.6%vs46.7%,P<0.05),MK蛋白表达与胰腺癌组织学分化、临床分期和淋巴转移相关(P<0.05),Caspase-3蛋白表达仅与组织学分化有关;胰腺癌组织标本中,MK阳性表达组凋亡指数显著低于MK阴性表达组(5.13±2.69vs7.93±6.65,P<0.05);胰腺癌组织中MK与Caspase-3蛋白的表达呈负相关(r=-0.34,P<0.05).结论:MK和Caspase-3参与了胰腺癌的发生发展,MK在胰腺癌组织中的高表达具有抑制细胞凋亡的生物学功能,其作用机制可能是通过抑制Caspase-3的活性.

Midkine在食管鳞癌中的表达及其与微血管密度的关系

目的研究MK在食管鳞癌中的表达及与肿瘤血管形成的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测45例食管鳞癌组织中MK的表达,同时以CD34标记微血管内皮细胞测定微血管密度(mi-crovessel density,MVD)。结果45例食管鳞癌组织中MK阳性表达率为77.8%,MK阳性的食管鳞癌组织MVD为40.43±6.27,MK阴性的食管鳞癌组织MVD为31.34±3.89,两者有显著性差异(P<0.01)。结论MK在食管鳞癌中高表达并与血管形成有关。

人Midkine基因启动子片段的克隆

目的克隆人M idk ine(M K)启动子基因2 335bp片段。方法自健康人血中提取人类基因组DNA作为模板,聚合酶链式反应(PCR)技术克隆人M K启动子基因2 335bp片段。琼脂糖凝胶电泳初步鉴定PCR产物,切取目的条带纯化并将其克隆入p GEM T载体中。选取阳性克隆进行DNA测序。结果电泳结果显示PCR产物包含有大小约为2 300 bp和1 400 bp的条带各1条;较大片段的测序结果显示,其与G enbank中的人M K启动子片段吻合。结论本研究成功克隆了人M K启动子基因2 335 bp片段。

Midkine在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨Midkine在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化EliVisionTMPlus法检测70例手术切除的原发性胰腺癌组织及15例癌旁胰腺组织中Midkine的表达。结果 Midkine在70例原发性胰腺癌组织中的阳性率为71.4%(50/70),而在癌旁胰腺组织中未见表达;Midkine表达与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、淋巴结转移显著相关(P<0.05)。Midkine表达阴性组累积总体生存率高于阳性组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Midkine的表达与胰腺癌的临床病理指标密切相关,其高表达提示患者预后不良。

原发性胆囊癌组织中Midkine的表达及其临床意义

目的观察Midine(MK)在原发性胆囊癌中的表达情况,并探讨其与原发性胆囊癌临床病理指标之间的关系。方法选择1995年1月～2003年6月胆囊癌53例、腹腔转移灶12例、淋巴结转移灶12例和正常胆囊20例、胆囊腺瘤14例,均采用免疫组织化学方法检测MK在其中的表达情况;结合53例胆囊癌患者临床病理资料分析MK表达指数与组织学类型、分化程度、临床分期、局部淋巴结转移、肝脏浸润及腹腔广泛转移的关系。结果正常胆囊、胆囊腺瘤与原发性胆囊癌的MK表达标记指数(LI)中位数分别为0%、17%(5%,29%)、72%(41%,98%),三者比较差异有高度统计学意义(P<0.01);胆囊淋巴结转移灶及腹腔转移灶Midkine表达LI的中位数分别为90%(76%,100%)、88%(65%,100%),二者Midkine表达LI与原发灶比较,差异有统计学意义(P<0.05);结合临床病理资料统计分析发现,胆囊癌的分化程度越低,Midkine表达LI越高,差异有统计学意义(P<0.05);Midkine在晚期胆囊癌中表达LI水平高于早中期,差异有统计学意义(P<0.05);Midkine在伴有肝脏浸润灶中表达LI水平高于不伴肝脏浸润,差异有统计学意义(P<0.05);Midkine在伴有广泛腹腔转移中表达LI水平高于不伴腹腔广泛转移,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Midkine可作为胆囊癌新的标记物;Midkine表达与胆囊癌发生、发展有关,对胆囊癌的临床分期、浸润转移的估计和病人预后的判断有一定意义。

胃肿瘤组织中缺失型Midkine基因的克隆和表达

目的对人胃肿瘤组织中缺失型Midkine(tMK)基因进行克隆并在大肠杆菌中表达。方法根据Genbank报道的序列,设计一对引物,通过RTPCR从胃肿瘤患者肿瘤组织中获得了tMK成熟肽DNA编码序列,与pMD18Tvector连接测序后,将该片段克隆入大肠杆菌高效表达载体pBV222中,转化大肠杆菌DH5α,在42℃进行诱导表达。结果在胃肿瘤组织中克隆到tMK表达基因,并获得高效表达tMK重组蛋白的工程菌株DH5αpBV222tMK。SDSPAGE结果表明,pBV222tMK表达的重组蛋白与预计分子量一致。结论在中国胃肿瘤患者的肿瘤组织中也有tMK的表达,经克隆重组实现了在大肠杆菌中的高效表达。

细胞因子Midkine融合蛋白的表达及其单克隆抗体的制备与应用

目的:克隆细胞因子midkine(MK)基因,表达其融合蛋白,制备抗MK单克隆抗体(mAb)并检测MK在肿瘤细胞中的表达。方法:利用MK基因的特异性引物,通过RT-PCR从人肾癌组织mRNA中扩增人MKcDNA分子。将其定向克隆于原核表达载体中,在大肠杆菌中表达MS2-MK融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,用传统的杂交瘤技术,进行细胞融合、筛选、克隆化并制备mAb腹水。用ELISA法分析其Ig亚类,用免疫细胞化学染色法检测MK在肿瘤细胞中的表达。结果:成功地克隆出MK基因并表达了MS2-MK融合蛋白。通过免疫和筛选,获得2株分泌小鼠抗人MKmAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb的Ig亚类分别为IgG1和IgG2a。免疫细胞化学染色显示,2株mAb与人胃癌细胞株MGC803和胃癌组织呈强阳性反应。结论:在原核细胞中获得MS2-MK融合蛋白的表达,并制备出抗MK的mAb,为研究MK的生物学活性提供了条件。

胰腺癌组织中Midkine的表达与细胞增殖及凋亡的关系

目的研究Midkine(MK)蛋白在人胰腺癌组织中的表达与肿瘤细胞增殖和凋亡之间的关系及意义。方法收集人胰腺癌组织标本49例,免疫组化SP法检测MK蛋白和增殖细胞核抗原Ki67的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数,另取同期15例正常胰腺组织作对照。结果15例正常胰腺组织中均未发现MK和Ki67阳性表达,细胞凋亡较少(0.63±0.21);77.1%(35/49)的胰腺癌组织中有MK阳性表达,其表达与肿瘤组织学分级、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05);49例胰腺癌组织中Ki67平均标记指数(LI)为(31.67±15.41),平均凋亡指数(AI)为(5.93±4.18);MK表达阳性组Ki67平均标记指数为(35.27±16.03),显著高于阴性组的(22.67±13.66)(P<0.05);MK表达阳性组凋亡指数为(5.13±2.69),显著低于阴性组的(7.93±6.65)(P<0.05)。结论MK蛋白可作为反映胰腺癌生物学行为的指标之一,其在胰腺癌中的表达可能起到促进肿瘤细胞增殖和抑制凋亡的作用,MK基因可能成为胰腺癌治疗的新靶点。

血清midkine对甲状腺球蛋白抗体阳性甲状腺癌患者转移病灶的预测价值

目的研究midkine在甲状腺球蛋白抗体(TgAb)阳性的分化型甲状腺癌患者首次131I治疗前,对甲状腺癌是否有转移病灶的预测价值。方法根据严格的纳入和排除标准,入选151例分化型甲状腺癌患者,运用酶联免疫吸附法测定midkine(MK)水平。最终有转移病灶的TgAb阳性的分化型甲状腺癌患者28例,无转移病灶者123例。用受试者工作特征(ROC)曲线评估患者^(131)I治疗前MK预测转移病灶的价值。结果有转移病灶的分化型甲状腺癌患者的MK水平高于无转移的患者。MK显示出良好的诊断价值,最佳截断值为550 ng/L时,诊断准确率为83%,ROC曲线下面积为0.856(P<0.001)。结论当TgAb阳性而不适合用甲状腺球蛋白做标志物时,MK可以作为预测分化型甲状腺癌转移的标志物。

新型肝素结合细胞因子midkine的心血管作用

Midkine (MK),a newly discovered heparin-binding growth factor,promotes growth,survival,and migration in various cells. Meanwhile,MK stimulates statistically significant forms in new arterioles and capillaries,causes vascular remodeling,prevents ischemia myocardial cells from injury via inhibiting apoptosis. MK also regulates the level of blood-fat. In general,MK plays key roles in cardiovascular diseases.