维甲酸诱导肝癌细胞株凋亡及其与midkine基因表达关系的研究

探讨在肝癌细胞凋亡过程中维甲酸 (retinoicacid ,RA )与midkine基因 (MK )的关系。笔者采用肝癌细胞株HepG2 ,用含不同浓度的全反式维甲酸 (ATRA )的培养基处理。以Annexin V FITC双标记流式细胞仪 (FCM )法测定凋亡率 ,逆转录 -多聚酶链反应 (RT PCR)法检测MKmRNA的表达变化。结果示经ATRA作用的肝癌细胞凋亡率较对照组升高 ,MKmRNA表达增加 ,且随培养基中外源性RA的浓度递升而增加 ,肿瘤细胞凋亡率及MKmRNA的表达也逐渐增高。

靶向Midkine基因的siRNA真核表达载体的构建及鉴定

目的构建靶向midkine基因的siRNA的表达载体,为研究midkine在肿瘤中作用提供一个新的方向。方法根据基因库中midkinecDNA序列设计和合成针对人midkine基因的siRNA寡核苷酸,定向克隆入质粒载体PGCsiU6,对该重组表达载体进行酶切鉴定及DNA测序。结果酶切鉴定、DNA测序证实表达质粒构建成功,无碱基突变。结论成功构建了靶向midkine基因表达的siRNA干扰质粒载体PGCsiU6/midkine,为进一步运用RNA干扰技术进行midkine基因功能研究奠定了基础。

鼻咽癌癌组织中Midkine基因表达的研究

目的研究Midkine(MK)基因在鼻咽癌(NPC)组织中的表达。方法用Trizol法提取鼻咽癌组织和正常鼻咽组织的RNA,经RT-PCR获得扩增的MK DNA,溴化乙锭琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。结果45例鼻咽癌组织中有37例在447 bp处出现1条MK的特征条带。7例鼻咽部正常组织均表达阴性。24例颈淋巴结转移患者中20例鼻咽癌组织MK mRNA表达阳性(表达率为83.33%),21例无颈淋巴结转移中17例鼻咽癌组织MK mRNA表达阳性(表达率为80.95%)。结论MK mRNA在鼻咽癌组织特异表达,MK有望作为鼻咽癌筛查的指标之一。

转染Zbtb7a基因对人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察转染Zbtb7a基因对人胃癌细胞系SGC7901增殖及凋亡的影响,并探讨其机制。方法将pcDNA3.1-Zbtb7a和pSilencer 3.1-H1-mk用Lipofectamine2000转染SGC7901细胞,采用RT-PCR和Western Blot法检测MK mRNA及蛋白表达,CCK-8试剂盒和平板克隆法检测细胞增殖,流式细胞仪Annexin V-PI染色检测细胞凋亡。结果转染Zbtb7a后,SGC7901细胞中MK表达水平明显升高,细胞增殖能力明显增强(P<0.05),并且0.5ng/mL TRAIL诱导的细胞凋亡受到抑制(P<0.05)。Zbtb7a高表达后干扰MK的表达,细胞增殖及克隆能力则明显降低(P<0.05),TRAIL诱导的细胞凋亡数也明显增加(P<0.05)。结论 Zbtb7a可以通过上调MK的表达,促进SGC-7901细胞增殖以及抑制TRAI诱导的细胞凋亡。

实时定量大肠癌组织中MK基因表达及其临床意义

目的利用实时定量PCR（Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction，RT—PCR）相对定量大肠癌组织中Midkine（MK）基因的表达，探讨MK基因在大肠癌不同病理状态中的意义。方法提取34例临床大肠癌组织及其癌旁正常组织中的总RNA，经寡聚脱氧胸腺嘧啶逆转录，RT—PCR扩增，以内标甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）基因的mRNA相对定量MK基因的mRNA表达，比较癌组织与其癌旁正常组织中的MK表达差异。结果34例样本中癌组织较之癌旁正常组织，MK基因表达降低（P〈0．01）；其中在Duckg分期中C期、女性组、淋巴结转移、管状腺癌和浸润浆膜层组中癌组织较之癌旁正常组织表达降低（P〈0．05），其余组大肠癌组织较之癌旁正常组织无统计学意义（P〉0．05）。结论在大肠癌病程晚期癌组织中MK基因的表达水平降低。