长链非编码RNA LINC00996通过抑制CDKN2A促进胃癌进展

背景长链非编码RNA长基因间非蛋白编码RNA 996(long intergenic non-protein coding RNA 996,LINC00996)在多种肿瘤中发挥促癌或抑癌作用,而其在胃癌中的表达和作用尚不清楚.目的探索LINC00996在胃癌组织和细胞系中的表达,并探讨其对胃癌细胞生物学行为的作用及机制.方法用生物信息学法分析胃癌中LINC00996的表达,及其对胃癌患者总生存期的影响.用RT-qPCR检测胃癌及癌旁组织、胃癌及正常胃上皮细胞系中LINC00996表达.胃癌细胞(SGC7901、NCI-N87)转染针对LINC00996的小干扰RNA(si-LINC00996)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A(cyclin-dependent kinase inhibitor 2A,CDKN2A)的小干扰RNA(si-CDKN2A)后,用细胞计数试剂盒-8法、EDU染色法、流式细胞术法、划痕法和Transwell法分别检测细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移与侵袭;Western blot法检测细胞中CDKN2A、周期蛋白D1、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和劈开的半胱胺酸蛋白酶-3(Cleaved cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,Cleaved caspase-3)表达.结果LINC00996在胃癌组织和细胞中表达较癌旁组织和胃正常细胞系显著升高(P<0.05),Kaplan Meier Plotter数据库显示LINC00996高表达组的胃癌患者的总生存期较低表达组显著缩短(P<0.05).敲降LINC00996能抑制胃癌细胞增殖、细胞周期运行、迁移、侵袭(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05);降低cyclin D1和Bcl-2表达(P<0.05);升高CDKN2A、Bax和Cleaved caspase-3表达(P<0.05).敲降CDKN2A能部分逆转敲降LINC00996对胃癌细胞的作用(P<0.05).结论敲降LINC00996能通过上调CDKN2A诱导胃癌细胞凋亡,抑制其增殖、迁移与侵袭.

MIIP对肾癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的:利用质粒转染技术制备过表达迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MIIP)的肾癌786-0/MIIP细胞系,观察MIIP对细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法:构建携带MIIP基因的质粒,通过脂质体质粒转染技术上调肾癌786-0细胞系MIIP基因表达。Western-blot、Real-time PCR检测转染效果;利用MTT实验检测MIIP对786-0细胞增殖能力的影响;Transwell实验、划痕实验检测MIIP对786-0细胞侵袭、迁移能力的影响。结果:Western-blot、Real-time PCR检测发现实验组786-0/MIIP细胞MIIP蛋白及mRNA表达量有效上调。MTT实验显示实验组786-0/MIIP细胞增殖能力明显减弱(P<0.01)。Transwell实验显示实验组786-0/MIIP细胞侵袭能力减弱,穿透小室细胞数明显减少(P<0.01)。细胞划痕实验显示实验组786-0/MIIP细胞迁移能力显著下降(P<0.01)。结论:通过质粒转染技术能够制备过表达MIIP的肾癌细胞系。转染成功的肾癌786-0/MIIP细胞系MIIP表达量增加,有效抑制了肾癌细胞的增殖、侵袭与迁移。

MIIP通过HDAC6参与肿瘤侵袭转移的研究进展

迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MIIP),是近年来研究发现的潜在肿瘤转移抑制基因,定位于1p36,该区域在多种肿瘤中缺失。MIIP的定位提示其可能在肿瘤侵袭、转移中发挥作用,并且已有研究报道MIIP可抑制胶质瘤及乳腺癌的侵袭转移。本文就MIIP通过HDAC6在肿瘤侵袭转移中的作用及其分子机制作一综述。

迁移侵袭抑制蛋白MIIP与肿瘤的研究进展

迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)基因是近年来新发现的一种抑癌基因,与多种人类肿瘤发生进展关系密切。它主要通过与胰岛素样生长因子结合蛋白2 (IGFBP2)、组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)结合调控肿瘤细胞的迁移、侵袭。本文主要围绕MIIP与肿瘤的关系,及其作用机制进行归纳总结。目的在全面了解MIIP对肿瘤影响的基础上,为抗肿瘤治疗提供新思路辅助临床治疗。

鼻咽癌组织中MIF、c-Fos、NF-κB和MMP9的表达及意义

目的 研究巨噬细胞移动抑制因子 (macrophagemigrationinhibitoryfactor,MIF)、核蛋白c Fos、核因子κB (NF κB)以及金属基质蛋白酶 9(MMP9)在鼻咽癌组织中的表达水平及相互关系 ,探讨MIF在鼻咽癌细胞早期侵袭转移过程中的作用及相关机制。方法 收集 1999～ 2 0 0 3年期间 4 5例确诊未治的鼻咽原发癌活检组织标本 ,采用免疫组化法检测鼻咽癌组织中MIF、c Fos、NF κBp6 5亚单位以及MMP9的表达 ,并分析与患者的病理及临床资料的关系。结果 在 4 5例鼻咽原发癌组织中 ,MIF、c Fos、NF κBp6 5和MMP9的阳性表达率分别为 77.8% ( 35 / 4 5 )、5 1.1% ( 2 3/ 4 5 )、6 2 .2 % ( 2 8/ 4 5 )和 71.1% ( 32 / 4 5 )。其中 ,癌细胞MIF和MMP9的表达水平均与淋巴结转移有关 ,伴有淋巴结转移的癌组织中两者表达水平均高于无淋巴结转移的癌组织 (P值均 <0 .0 5 )。MIF阳性组的癌细胞c Fos和MMP9的表达也均显著高于MIF阴性病例。且MIF、c Fos和MMP9的表达互为正相关。但癌细胞NF κBp6 5的表达与患者性别、年龄、病理组织学分型、有无淋巴结转移以及临床分期均未显示相关性 ,且与其它 3种蛋白的表达亦无相关性。结论 MIF在鼻咽癌细胞的早期淋巴结转移过程中可能具有重要的促进作用 ,其机制可能是非NF

小分子干扰RNA沉默鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2基因表达对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)基因表达对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响。方法选取2016年1月至2019年12月于张家港市第一人民医院进行手术的60例患者的胰腺癌肿瘤组织标本作为研究对象。应用Western blot检测RhoGDI2在人胰腺癌细胞株CFPAC-1、HPAF-Ⅱ、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990中的表达,利用siRNA沉默CFPAC-1细胞中RhoGDI2的表达,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞体外迁移能力和侵袭能力,Western blot检测P21蛋白激活激酶1(Pak1)表达情况,免疫组织化学染色检测胰腺癌组织标本中RhoGDI2和Pak1的表达情况。结果Western blot检测结果显示,RhoGDI2蛋白在胰腺癌细胞株中呈不同程度的表达水平,表达水平由高到低的细胞顺序依次为CFPAC-1、SW1990、PANC-1、HPAF-Ⅱ、MIA PaCa-2。WT、si-NC及si-RhoGDI2组细胞的RhoGDI2蛋白表达量分别为(1.25±0.09)、(1.19±0.11)、(0.38±0.07);转染si-RhoGDI2后RhoGDI2蛋白的表达显著下降,3组蛋白表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞的48 h划痕迁移率分别为(62.33±5.29)%、(62.27±3.37)%、(17.60±6.16)%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞的48 h划痕迁移率分别为(62.33±5.29)%、(62.27±3.37)%、(17.60±6.16)%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组胰腺癌细胞穿膜细胞数分别为(132.3±10.3)、(120.7±16.5)、(24.3±9.5)个,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。WT、si-NC及si-RhoGDI2组细胞的Pak1蛋白表达量分别为(0.82±0.06)、(0.73±0.07)、(0.23±0.03),3组蛋白表达量比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学染色检测结果显示,RhoGDI2阳性47例,阳性率为78.3%,Pak1阳性45例,阳性率为75.0%。Spearman等级相关分析结果显示,RhoGDI2与Pak1的表达水平呈正相关(r>0,P<0.05)。结论沉默RhoGDI2基因表达能够抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭,RhoGDI2可能在胰腺癌发生发展过程中具有重要作用。

迁移侵袭抑制蛋白对人脐静脉内皮细胞生物学行为的作用

目的:研究迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MIIP)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖能力、迁移侵袭能力等生物学行为的影响。方法:采用瞬时转染的方式在HUVEC中过表达MIIP,经蛋白质印迹(Western-blot)实验鉴定MIIP和VEGFR2的表达水平;采用5-乙炔基-2-脱氧尿苷(5-ethyny-2’-deoxyuridine,EdU)法检测MIIP对HUVEC增殖能力的影响,采用划痕愈合实验和穿透小室实验检测MIIP对HUVEC迁移侵袭能力的影响,采用小管形成实验检测HUVEC体外成管能力的变化,采用基质胶栓实验观察MIIP对HUVEC体内血管新生能力的影响。结果:通过瞬时转染可使MIIP在HUVEC中的表达上调2.8倍。与空载体转染的细胞相比,过表达MIIP的HUVEC的划痕愈合能力减弱;空载体转染组及MIIP过表达组的HUVEC在迁移实验中的穿膜细胞数分别为(350±24)个和(167±29)个(P<0.01),在侵袭实验中的穿膜细胞数分别为(434±12)个和(286±8)个。在体外小管形成实验中形成的小管数分别为(27±4)个和(13±2)个。EdU阳性标记的细胞比例在2组分别为63%±4%和61%±2%。基质胶栓实验显示,过表达MIIP后,HUVEC的体内血管新生能力下降。蛋白质印迹结果显示,MIIP能够下调HUVEC中血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)的表达。结论:MIIP能够抑制HUVEC的迁移侵袭能力、体外成管能力及体内血管新生能力。

迁移侵袭抑制蛋白在肿瘤发生发展中的作用及其临床意义

迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MIIP)能够与胰岛素样生长因子结合蛋白2(insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP2)、组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)、p21活化激酶1、表皮生长因子受体、细胞分裂周期20(cell division cycle 20,cdc20)、拓扑异构酶等相互作用,抑制细胞增殖和迁移侵袭,进而抑制多种肿瘤的发生发展。最近的研究显示,MIIP还与病毒感染、细胞免疫有关。鉴于MIIP的作用涉及到多条肿瘤相关的信号通路及肿瘤治疗靶点,MIIP逐渐成为研究的热点。本文主要围绕MIIP的分子特征、功能和在多种肿瘤中的临床意义及作用机制进行综述。

半枝莲总黄酮调控MIIP对人胃腺癌细胞AGS增殖、凋亡和放疗敏感性的作用及机制研究

目的研究半枝莲总黄酮(TF-SB)对人胃腺癌细胞AGS增殖、凋亡和放疗敏感性的影响和分子机制.方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测TF-SB(0、25、50、100、200μg·mL^(-1))作用24 h对AGS细胞存活率的影响.将AGS细胞分为对照组、溶剂对照(含相同浓度的甲醇)组、TF-SB(100μg·mL^(-1))组、质粒空载体(pcDNA,200nmol·L^(-1))组、迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)过表达质粒(pcDNA-MIIP,200nmol·L^(-1))组、TF-SB(100μg·mL^(-1))+小干扰RNA对照(si-con,200nmol·L^(-1))组、TF-SB(100μg·mL^(-1))+MIIP小干扰RNA(si-MIIP,200nmol·L^(-1))组,转染质粒后TF-SB处理24h,CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting法检测B细胞淋巴瘤-x1(Bcl-x1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleavedCaspase-3)、MIIP表达;不同照射量X射线(0、2、4、6、8 Gy)照射后,克隆形成实验检测细胞存活率,并绘制单击多靶模型拟合曲线,Western blotting法检测γ-H2AX蛋白表达.结果与TF-SB 0μg·mL^(-1)组比较,TF-SB25、50、100、200μg·mL^(-1)组AGS细胞存活率显著降低(P<0.05);与对照组及溶剂对照组比较,TF-SB 100μg·mL^(-1)组AGS细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Bcl-x1蛋白表达显著降低(P<0.05),cleaved Caspase-3和MIIP蛋白表达显著升高(P<0.05);放疗后,TF-SB组细胞存活率显著降低(P<0.05),γ-H2AX蛋白表达显著升高(P<0.05),放疗敏感性增加.与pcDNA组比较,pcDNA-MIIP组AGS细胞凋亡率显著增加,细胞存活率显著降低,Bcl-x1蛋白表达显著降低,cleaved Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05);放疗后,pcDNA-MIIP组细胞存活率显著降低(P<0.05),γ-H2AX蛋白表达显著升高(P<0.05),敏感性增加.与TF-SB+si-con组比较,TF-SB+si-MIIP组AGS细胞凋亡率显著降低,细胞存活率显著增加,Bcl-x1蛋白表达显著增加,cleaved Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05);放疗后,TF-SB+si-MIIP组细胞存活率显著升高(P<0.05),γ-H2AX蛋白表达显著降低(P<0.05),敏感性降低.结论TF-SB通过上调MIIP可抑制AGS细胞增殖,诱导细胞凋亡,提高其放疗敏感性.

MIIP基因对人胶质瘤细胞U87增殖能力与放疗敏感性影响

目的探讨过表达迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)基因对人胶质母细胞瘤细胞系U87放疗敏感性的影响。方法采用过表达MIIP基因慢病毒转染U87细胞,通过Western blot实验检测转染效率;MTT实验检测MIIP基因对U87细胞活力的影响;应用平板克隆形成实验,评价放射线照射对MIIP过表达组与对照组克隆形成能力的影响;进一步应用Western blot实验检测RAD51蛋白与BCL2蛋白的表达情况。结果 MIIP基因过表达可以抑制神经胶质瘤细胞U87的增殖能力。上调MIIP基因,抑制U87细胞的克隆形成能力,并提高放疗敏感性。放疗前与放疗后,MIIP基因均抑制RAD51蛋白与BCL2蛋白的表达。结论过表达MIIP基因抑制U87细胞的增殖能力与克隆形成能力;MIIP基因可提高U87细胞放疗敏感性,其机制与RAD51、BCL2信号转导通路相关。

迁移侵袭抑制蛋白和p21活化激酶1在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的探讨迁移侵袭抑制蛋白（MIIP）和p21活化激酶1（PAK1）在子宫内膜癌组织中的表达，分析其与子宫内膜癌患者临床病理特征及预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测135例子宫内膜癌、55例不典型增生和88例正常子宫内膜组织中MIIP和PAK1蛋白的表达，分析子宫内膜癌组织中MIIP和PAK1蛋白表达的临床意义及二者的相关性。 结果正常子宫内膜组、不典型增生组和子宫内膜癌组MIIP的阳性表达率分别为52.3%（46/88）、41.8%（23/55）和34.8%（47/135），子宫内膜癌组明显低于正常子宫内膜组（P〈0.05）。MIIP蛋白的表达与肌层浸润、国际妇产科联盟（FIGO）分期和淋巴结转移情况有关（均P〈0.05）。正常子宫内膜组、不典型增生组和子宫内膜癌组的PAK1阳性表达率分别为45.5%（40/88）、50.9%（28/55）和62.2%（84/135），子宫内膜癌组显著高于正常子宫内膜组（P〈0.05）。PAK1蛋白的表达与组织学分级、肌层浸润、FIGO分期和淋巴结转移情况有关（均P〈0.05）。MIIP和PAK1蛋白的表达与患者的累积生存率无关（P值分别为0.092和0.052）。子宫内膜癌组织中MIIP与PAK1蛋白的表达呈负相关（r=-0.329，P〈0.001）。结论MIIP的低表达和PAK1的过表达共同参与了子宫内膜癌的发生、发展，与子宫内膜癌的不良预后有关。MIIP和PAK1蛋白在子宫内膜癌中的表达呈负相关。

迁移侵袭抑制蛋白在胃腺癌中表达及与预后关系研究

目的分析迁移侵袭抑制蛋白（MIIP）在胃腺癌及正常胃组织中的表达及其与预后的关系。 方法采用组织微阵列和免疫组织化学法检测MIIP在90例胃腺癌组织及90例正常胃黏膜组织中的表达情况，分析MIIP表达水平与胃腺癌临床病理特征、预后的关系。 结果 MIIP在胃腺癌组织中表达率显著低于正常胃黏膜组织[30.0%（27/90）比55.6%（50/90），χ^2＝12.006，P＝0.001]。MIIP低表达与肿瘤体积大（χ^2＝4.116，P＝0.042）、T分期深（χ^2＝6.752，P＝0.009）、淋巴结转移阳性（χ^2＝7.234，P＝0.007）、TNM分期晚（χ^2＝7.608，P＝0.006）显著相关。MIIP高表达者5年总生存率显著高于低表达者（χ^2＝11.378，P＝0.001）。肿瘤大小（OR＝0.570，P＝0.043）、浸润深度（OR＝0.213，P＝0.036）、MIIP表达水平（OR＝1.967，P＝0.042）是胃癌患者总生存时间的独立预后因素。 结论 MIIP在胃腺癌组织中低表达，其表达水平与预后呈负相关。

过表达迁移侵袭抑制蛋白基因对人巨细胞病毒转染U87细胞特性影响

目的探讨过表达迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)基因对人巨细胞病毒(HCMV)感染的神经胶质母细胞瘤U87细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法采用过表达的MIIP基因慢病毒转染HCMV感染的U87细胞,通过Western-blot检测其转染效率,并将细胞分为为实验组(U87+HCMV/MIIP)、对照组(U87+HCMV/CMV4)和空白组(U87+HCMV)。采用CCK-8检测过表达的MIIP基因对HCMV转染的U87细胞增殖情况的作用;采用Transwell迁移实验检测对细胞迁移情况的影响;采用Transwell体外侵袭实验检测对细胞侵袭能力的影响。结果实验组细胞的MIIP蛋白表达量与对照组和空白组比较,明显上调(P<0.05);细胞的增殖能力与对照组和空白组比较,明显降低(P<0.05);细胞的侵袭力与对照组和空白组比较,明显减弱,且细胞数显著下调(P<0.05);迁移能力与对照组和空白组比较,显著降低(P<0.05)。结论 HCMV感染的U87细胞在MIIP基因过表达后增殖、侵袭及迁移能力均受抑制。

长链非编码RNA MIF-AS1调控非小细胞肺癌增值、侵袭和转移的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MIF-AS1/微小RNA(miRNA,miR)-370-3p/丝裂原活化蛋白激酶9(MAP3K9)分子轴调控非小细胞肺癌(NSCLC)增殖、侵袭及迁移的分子机制。方法收集河南省人民医院2017年5月至2019年1月NSCLC患者20例标本,其中男12例,女8例,年龄(52.37±10.34)岁。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)与蛋白质印迹法(Western blot)检测NSCLC患者癌组织及9例细胞株中MIF-AS1、miR-370-3p、MAP3K9的表达水平;分别用si-MIF-AS1、si-NC、si-MIF-AS1+抗-miR-370-3p或si-MIF-AS1+pcDNA-MAP3K9转染A549细胞,采用噻唑蓝(MTT)法、Transwell实验检测转染细胞的增殖、侵袭、迁移能力;Western blot检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p21、p27、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、MMP-14蛋白的表达;双荧光素酶报告基因验证MIF-AS1对miR-370-3p或miR-370-3p对MAP3K9的靶向调控作用,应用SPSS 21.0统计软件分析。结果MIF-AS1、MAP3K9在NSCLC组织(2.49±0.25、2.24±0.22)及A549(2.54±0.24、2.31±0.23)、H1299(2.11±0.21、2.44±0.24)、PC-9细胞(2.26±0.23、2.16±0.22)中的表达较癌旁组织(1.00±0.09、1.02±0.09)、正常肺上皮细胞BEAS-2B(1.01±0.09、1.00±0.09)明显升高(t=25.078,P<0.05;F=94.367,P<0.05),差异有统计学意义。miR-370-3p在NSCLC组织(0.42±0.04)及A549(0.34±0.03)、H1299(0.53±0.05)、PC-9细胞(0.44±0.04)中的表达较癌旁组织(1.01±0.08)、正常肺上皮细胞BEAS-2B(1.00±0.08)明显降低(t=29.500,P<0.05;F=269.552,P<0.05),差异有统计学意义;转染si-MIF-AS1显著抑制NSCLC细胞增殖(24 h:0.27±0.03,48 h:0.36±0.03,72 h:0.48±0.04)、侵袭[(24.33±3.14)个]及迁移[(32.46±3.34)个]能力(P<0.01),差异有统计学意义,上调p21(0.64±0.06)、p27(0.77±0.07)蛋白的表达(t=17.441,P<0.05;t=17.726,P<0.05),差异有统计学意义,下调Cyclin D1(0.29±0.03)、MMP-2(0.25±0.03)、MMP-9(0.34±0.03)、MMP-14(0.29±0.03)蛋白的表达(t=17.732,P<0.05),差异有统计学意义;双荧光素酶报告基因证实MIF-AS1与miR-370-3p靶向结合,以及miR-370-3p与MAP3K9靶向结合;转染si-MIF-AS1+抗-miR-370-3p或si-MIF-AS1+pcDNA-MAP3K9后可抑制si-MIF-AS1对NSCLC细胞增殖、侵袭及迁移的作用。结论LncRNA MIF-AS1通过调控miR-370-3p/MAP3K9分子轴促进NSCLC细胞增殖、侵袭及迁移。