人红细胞类同种特异性自身抗体的血清学试验分析与研究

目的近年来,实验室临床样本的检测中,类同种特异性自身抗体(以下简称“类抗体”)样本检出率不断增加。抗球蛋白微柱凝集卡技术逐渐普及应用,进一步提高了类抗体检出率。为了研究类抗体实验室检测特点,探讨类抗体输血原则,本文进行了回顾性数据分析,为产生类抗体的患者提供有效的检测方法和临床建议。方法对160名产生类抗体的受检者进行详细的性别、年龄、诊断、血清学试验等回顾性分析。分析实验所得数据,找寻相关规律。结果类抗体最常见特异性为RH血型类抗体,包括类抗-Ce,类抗-Ec和类抗-D等占94.48%。CCDee分型是类抗体受检者最常见分型。血清微柱凝集卡法检测类抗体反应性较强(类抗体计分值最高:7.16分)。血清试管抗球蛋白法反应强度差异性最为显著,鉴别类抗体特异性较好。结论鉴定类抗体特异性比较困难,建议选择多种鉴定方法。微柱凝集卡法检测类抗体的反应性较强,抗球蛋白法鉴别类抗体特异性较好,建议此两种方法联合使用。输血治疗时应尽量避开类抗体特异性,输注相应抗原阴性的红细胞。

RhC抗原弱表达伴类自身抗-Ce及同种抗-Jkb致配血不合分析

目的:探讨1例患者类自身抗-Ce合并抗-Jkb引起交叉配血不合并分析其RHCE基因弱表达的原因。方法:采用试管法、毛细管离心法对ABO、Rh和Kidd血型抗原进行鉴定。采用盐水、聚凝胺、抗人球蛋白三介质联用多套谱细胞进行抗体筛查及抗体特异性鉴定;采用多重PCR技术对RHCE基因进行测序及单倍体分析并使用SwissModel进行RHCE蛋白建模。结果:该患者血清中检出类自身抗-Ce合并抗-Jkb抗体。RHCE三代单分子测序显示突变组合为c.48G>C、c.150C>T、c.178C>A、c.201A>G、c.203A>G和c.307C>T,在内含子2中存在109 bp插入序列,同时出现内含子5-8大片段丢失,其Rh血型基因型为DCe/DCe,表型为CCDee。结论:基因分型技术可以协助推断患者血清中部分弱表达的RhC、c、E、e的分子机理,以辅助疑难抗体的鉴定,从而保证患者输血安全。

同种抗-C、e伴类同种抗-e、Jk b自身抗体的鉴定及输血治疗

目的应用吸收放散和效价积分法对1例抗-C、e同种抗体合并抗-e、Jk b类同种自身抗体进行鉴别诊断。方法采用试管法对ABO、Rh和Kidd血型抗原进行鉴定;盐水、凝聚胺、微柱凝胶3种方法联用2套谱细胞进行抗体筛查及抗体特异性鉴定;多重吸收放散试验和效价积分原则对抗体进一步确认;多重PCR技术对RHCE基因、JK基因进行测序。结果通过血清学分析,该患者血型为A型、Rh分型ccDEE,直抗阳性。结合不同的Rh和Jk表型细胞吸收放散试验以及效价积分原则得出患者血清中含有抗-C、e同种抗体以及抗-e、Jk b类同种自身抗体,红细胞上有抗-e、Jk b类同种自身抗体。基因测序分析RHCE基因第5外显子676位出现G>C,其余外显子没有发生突变,推断Rh分型ccEE型;JK基因中第9外显子838 G/A杂合,Jk血型表型Jk(a+b+),选择交叉配血相合的A型ccDEE、Jk(a+b-)红细胞给患者输注,输血效果良好。结论应用吸收放散试验和效价积分法对患者血清进行抗体鉴定,以及血清学结合分子生物学对患者红细胞表型鉴定,可综合分析及区分出抗体的类型,为患者精准输血提供方案。

噬菌体展示肽库筛选赭曲霉毒素A模拟表位的研究

目的从噬菌体随机肽库中筛选模拟赭曲霉毒素A表位的噬菌体粒子,并以其替代毒素建立免疫学检测方法。方法以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,同时进行DNA测序确定插入七肽的氨基酸序列。结果经过4轮淘选,共筛选到11株能与该抗体特异性结合的阳性克隆,且该结合能被赭曲霉毒素A阻断,模拟表位的共有序列为IRPMVXX,X为任意氨基酸。以其中的P2号克隆建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200～8000pgml,检测下限为150pgml。结论噬菌体展示技术可成功筛选到赭曲霉毒素A模拟表位,筛选到的噬菌体粒子可作为毒素的替代品建立免疫学分析方法。

赭曲霉毒素A模拟表位的筛选及免疫学鉴定

从噬菌体随机七肽库中筛选得到赭曲霉毒素A的模拟表位,并以其替代毒素标品建立赭曲霉毒素A免疫学快速检测方法。以纯化的抗赭曲霉毒素A单克隆抗体(OTA mAb)为配基,亲和筛选融合表达在丝状M13噬菌体次要衣壳蛋白(PⅢ)上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,并以筛选的模拟表位建立赭曲霉毒素A的ELISA检测方法。经过4轮亲和筛选,共得到22株与OTA mAb特异结合的阳性噬菌体克隆,且该结合都能够被OTA标品阻断,DNA测序及多肽核心序列分析后,得到赭曲霉毒素A的模拟表位的主要序列为:MPLWXDL,X为任意氨基酸,以阳性噬菌体克隆建立的竞争ELISA检测方法,线性范围为250～8000pg/ml。基于制备的OTA mAb,利用噬菌体随机七肽库可成功筛选到赭曲霉毒素A的模拟表位,并能够替代OTA标品建立直接竞争模式的免疫学快速检测方法。

抗-E、c及Jk^a的同种抗体及“类同种自身抗体”分析

目的通过对1例同时检出抗-E、c及Jk^a同种抗体及'类同种自身抗体'患者的抗体鉴定,分析'类同种自身抗体'的血清学特征。方法采用微柱凝胶法、聚凝胺法以及PEG增强实验进行患者血清的抗体鉴定,采用微柱凝胶卡和经典抗球蛋白法进行患者放散液的抗体鉴定。采用O型Rh表型为CCee、Kidd表型为Jk(a-b+)的献血者红细胞进行吸收放散试验,对吸收后放散液进行抗体鉴定。结果患者血清及放散液中检出抗-E、c及Jk^a同种抗体及'类同种自身抗体'。结论患者在输血免疫刺激后产生抗-E、c及Jk^a同种抗体的过程中同时产生了特异性较差'类同种自身抗体'。

1例先天性中性粒细胞减少症患儿产生类抗-Ce合并类抗-A抗体的血清学研究与交叉配血策略

目的:观察先天性中性粒细胞减少症患儿移植前后多次输注红细胞产生的血清学改变,探讨其交叉配血策略。方法:1例脐带血干细胞移植术后多次输注红细胞效果不理想的先天性中性粒细胞减少症患儿,采用盐水介质法鉴定患儿ABO血型及Rh表型,采用盐水介质法、凝聚胺介质法和微柱凝胶法对该患儿进行血清红细胞放散液抗体鉴定及主侧交叉配血。临床随访观察使用交叉配血合格的血液后,该患儿的血红蛋白浓度变化。结果:该患儿ABO表型正定型为A型,反定型中A细胞和自细胞呈现弱凝集,Rh血型表型为CCDee。患儿血清中存在Rh血型系统类抗-Ce抗体,同时产生类抗-A抗体,选择输注O型Rh表型为ccDEE的洗涤红细胞1U后血红蛋白由88g/L升高至96g/L,且未出现输血不良反应。结论:运用不同血型血清学方法,能较准确地鉴定出患者血清中存在的同种抗体,提高输血安全。

产生类抗体的自身免疫性溶血性贫血患者的输血对策

目的了解再生障碍性贫血并发自身免疫性溶血性贫血(AIHA)患者交叉配血不合的原因,为患者多次输血提供相容性血液以改善其贫血状况。方法对1名55岁再生障碍性贫血并发AIHA的重度贫血(Hb 31 g/L)男性患者作输血前血清学分析:采用试管法、微柱凝胶法做ABO及RhD血型鉴定;采用试管法、间接抗球蛋白法对患者做抗体鉴定及交叉配血试验;根据抗体鉴定结果选择相应抗原阴性的供者红细胞输注。结果患者血型为B型、RhD阳性;从血清中检出了冷抗体型类抗-Ce;为其筛选2名B、RhccDEE型献血者的红细胞3.5 U输注,输血后患者Hb(g/L)由31升至45,次日患者贫血症状缓解并离院。结论对于类抗体导致AIHA患者交叉配血不合时需明确患者血清中存在的抗体特异性,再选择对应抗原阴性的红细胞输注,可为患者输血的安全性、有效性提供保障。

运用抗体效价检测技术鉴定自免溶贫患者的抗体特异性

目的应用抗体效价检测技术检测自免溶贫患者血样中的同种抗体和类同种抗体。方法收集上海市血液中心血型参比实验室2021年3月~4月临床上直抗阳性患者血液样本,使用血清、放散液原液和抗体效价标定的放散液稀释液进行抗体鉴定。结果血清检出4例有特异性抗体,放散液原液检出3例有特异性抗体,放散液稀释液检出9例有特异性抗体。结论直抗阳性患者的放散液稀释液检出特异性的抗体比例高于患者的血清和放散液原液,而抗体效价的检测对于稀释放散液的具体倍数起到决定的作用。抗体效价检测可提高自免溶贫患者类抗体的检出率,可减少由于类抗体特异性导致的输血效果降低,提高输血安全性和有效性。

类抗Ce自身抗体的分析与研究一例

目的通过一例类抗Ce案例的分析研究,探讨类抗体患者血清学检测方法和输血原则。方法采用盐水介质法、抗人球法进行血清学试验包括抗体筛选、抗体鉴定、直抗试验、交叉配血试验等。结果患者血清中存在类抗Ce的自身抗体。结论自身免疫性溶血的患者产生的类抗Ce抗体,在缺乏相应抗原刺激时可能快速衰减。

抗-C、e同种抗体合并抗-e类同种自身抗体的鉴定及交叉配血

目的通过对1例同时产生了类同种自身抗体和同种抗体患者的抗体分析及鉴定,了解Rh血型系统中同种抗体、简单特异性自身抗体和类同种自身抗体的血清学特征,从血清学上对三者进行区分,以便采取更适合的红细胞成分输血策略。方法采用筛选细胞和谱细胞、以不同方法对患者血清进行抗体筛查及鉴定。采用患者Rh抗体类似特异性对应抗原阴性的O型RhccDEE的献血者细胞、添加低离子液(LISS)的吸收方法,对患者吸收后的血清、红细胞放散液进行抗体鉴定。对以往相关文献进行回顾。结果患者Rh分型ccDEE,直抗阳性。血清抗体鉴定为IgM类的抗-C、抗-e和IgG类的抗-e(不排除抗-Ce可能性)。吸收后血清抗体鉴定为IgM类的抗-C、抗-e(不排除抗-Ce可能性)和IgG类的抗-e。放散液抗体鉴定为IgG类的抗-e。结论对患者红细胞Rh表型、直接抗球蛋白试验,以及分别对患者血清、吸收后血清及放散液抗体特异性进行综合分析,可区分出同种抗体或类同种抗体。而采用添加低离子液(LISS)的方法可更好的吸收低亲和力抗体。

抗E不规则抗体合并类E自身抗体分析--附1例报告

目的通过对1例同时检出抗E不规则抗体及类E自身抗体患者的抗体鉴定,分析类抗体的检测思路和血清学特征。方法复旦大学附属中山医院厦门医院于2021年10月12日收治1例由外院转入有多次输血史的患者,因存在自身抗体影响不规则抗体鉴定,入院后检测ABO血型、Rh血型,进行抗体筛查、抗体特异性鉴定、直接抗人球蛋白实验、吸收放散实验和聚乙二醇(PEG)增强试验。结果患者为41岁女性,因膀胱结石和膀胱阴道瘘入院,曾在外院输血5次。入院后血型鉴定及抗体筛查结果为A型、CcDee,抗筛实验阳性,自身细胞反应阳性。进行特异性抗体鉴定,检出患者体内存在抗E不规则抗体,选用O型Rh表型为CCee,Kidd表型为Jk(a-b+)、Lewis表型为Le(a-b-)的谱红细胞进行吸收放散实验,确定患者体内还存在类E自身抗体。结论该患者在经过多次输血免疫刺激后,同时产生抗E不规则抗体和类E自身抗体。在输血前进行不规则抗体筛查与特异性鉴定很有必要。

类抗Ce抗体1例的鉴定及分析

不规则抗体和自身抗体可能导致交叉配血不合~[1-2]。在大多数自身免疫性溶血性贫血患者的血清中可以检测到高效价的自身抗体,包括温自身抗体与冷自身抗体。抗体类型以温抗体IgG为主,但也有IgM、IgA和IgD抗体~[2]。多数情况下,患者血清中的自身抗体没有明显的特异性,然而某些患者的自身抗体则表现出类似同种抗体的特异性,如类似于Rh血型系统的抗体特异性。本文报道了1例患者血清中类抗-Ce抗体的检出情况。

异基因造血干细胞移植后并发自身免疫性溶血性贫血患者产生类抗体血清学检测方法及输血策略

目的探讨异基因造血干细胞移植(AHSCT)后免疫介导的自身免疫性溶血性贫血(AIHA)患者交叉配血不合的原因,血浆中不规则抗体筛选试验阳性时,不规则抗体鉴定的血清学检测方法的选择,处理措施及输血策略。方法一例AHSCT后的3岁男性患儿因重度贫血为改善贫血症状需输注红细胞入住四川省人民医院。通过盐水试管法确定了患儿ABO、Rh血型后进行交叉配血试验发现患儿与多个同型供者血液不相合,考虑到患儿贫血严重,于是采用直接抗球蛋白试验来判断红细胞是否被致敏;通过盐水介质试管法、微柱抗球蛋白法和聚凝胺法进行ABO血型系统以外的不规则抗体筛选试验以确定血浆中有无不规则抗体;根据不规则抗体筛选试验结果选择聚凝胺法来确定抗体的特异性;通过盐水介质试管法、经典抗球蛋白法和聚凝胺法进行交叉配血实验,结合抗体鉴定的结果,综合分析选择合适的供者红细胞输注。结果本例患儿ABO血型为AB型,Rh分型为CCDee,ABO血型已转变为供者血型。直接抗球蛋白试验强阳性,红细胞被抗体致敏。血浆中检出了不规则抗体,红细胞上放散下来的致敏抗体与血清中检出的不规则抗体均为类抗-Ce自身抗体。选择了避开类抗-Ce抗体的Ce抗原阴性的AB型红细胞输注后血色素升高,3 d后复查血常规Hb为79 g/L,输血有效。结论任何类型的AHSCT后都有可能发展成AIHA,也就是血浆中可能存在某种自身抗体(类抗体)而破坏自身红细胞,若能够明确患者血清中存在的类抗体,即可避开这种抗体而筛选红细胞无相应抗原的供者,也就避免发生溶血性输血反应以安全输血。