血清miRNA-146、LPS、ROS在早期妊娠胚胎丢失患者中的水平及临床意义

目的探讨血清微小RNA(miRNA)-146、脂多糖(LPS)和活性氧(ROS)在早期妊娠胚胎丢失(EPEL)患者中的水平及临床意义。方法选取2021年3月至2023年3月广东省东莞市妇幼保健院收治的100例EPEL患者作为研究组,另外选取同期在广东省东莞市妇幼保健院就诊的100例正常妊娠女性作为对照组,检测并比较研究组和对照组血清指标水平。培养HTR-8/SVneo细胞,按照不同转染方式分成miRNA-146抑制剂组、miRNA-146模拟物组及NC组。比较miRNA-146抑制剂组、miRNA-146模拟物组Toll样受体4(TLR4)蛋白和核因子-κB(NF-κB)蛋白水平,比较NC组、miRNA-146模拟物组和miRNA-146抑制剂组miRNA-146水平及HTR-8/SVneo细胞的凋亡率,比较不同水平LPS处理的HTR-8/SVneo细胞生长活力。采用Pearson相关分析EPEL患者miRNA-146水平与ROS、LPS、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、TLR4蛋白和NF-κB蛋白水平的相关性。结果研究组LPS、ROS、IL-6和TNF-α水平高于对照组,且雌二醇、孕酮、miRNA-146水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-146模拟物组miRNA-146水平高于miRNA-146抑制剂组和NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-146模拟物组TLR4蛋白、NF-κB蛋白水平低于miRNA-146抑制剂组,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同水平LPS(8、12、16、20μg/mL)处理的HTR-8/SVneo细胞生长活力低于20μg/mL LPS+miRNA-146模拟物处理的HTR-8/SVneo细胞生长活力,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-146抑制剂组HTR-8/SVneo细胞的凋亡率高于NC组和miRNA-146模拟物组,且NC组高于miRNA-146模拟物组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,EPEL患者miRNA-146水平与ROS、LPS、IL-6、TNF-α、TLR4蛋白和NF-κB蛋白水平呈负相关(r=-0.737、-0.614、-0.712、-0.729、-0.739、-0.708,P<0.05)。结论EPEL患者血清中miRNA-146水平明显下降,并与LPS、ROS、IL-6、TNF-α的水平呈负相关,可能是EPEL发生的影响因素之一,有望为临床预测孕妇发生EPEL提供新思路。

微小RNA-146a保护脑出血大鼠神经的调控机制

目的探讨微小RNA-146a(miR-146a)靶向调控E盒锌指蛋白1基因(ZEB1)表达及其在脑出血大鼠模型中参与神经保护和抑制细胞自噬的相关分子机制。方法将8周龄雄性SD大鼠40只随机分为4组,分别为假手术组、模型组、miR-146a过表达组和miR-146a低表达组,每组10只。除了假手术组,其他3组采用Ⅶ型胶原酶诱导法建立动脉瘤性自发性脑出血大鼠模型。4组大鼠均基于高盐饮食饲养6周,继续饲养20周后处死。比较4组大鼠的神经功能[改良神经严重程度评分(mNSS)]、脑含水量。采用FJC染色检测退变神经元数量;采用TUNEL染色检测细胞凋亡;采用苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织病理变化;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-146a和ZEB1 mRNA表达;采用蛋白质印迹(Western blot)检测ZEB1、自噬相关蛋白人重组自噬效应蛋白(Beclin 1)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达。结果与假手术组比较,模型组的mNSS评分、脑含水量、退变神经元数量和细胞凋亡率增加,miR-146a表达量降低,ZEB1 mRNA以及ZEB1、Beclin 1和LC3蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,miR-146a过表达组的mNSS评分、脑含水量、退变神经元数量和细胞凋亡率下降,miR-146a表达量升高,ZEB1 mRNA以及ZEB1、Beclin 1和LC3蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,miR-146a低表达组的mNSS评分、脑含水量、退变神经元数量和细胞凋亡率增加,而miR-146a表达量降低,ZEB1 mRNA以及ZEB1、Beclin 1和LC3蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-146a可通过靶向抑制ZEB1基因及其蛋白表达,以及调控细胞自噬活性,进而发挥神经保护作用。

彩色多普勒超声联合血清微RNA-128微RNA-146a检测对乳腺肿块定性诊断价值分析

目的探讨彩色多普勒超声(CDFI)联合血清微RNA-128(miR-128)、微RNA-146a(miR-146a)对乳腺肿块的定性诊断价值。方法选择2020年6月至2022年12月在本院就诊的有乳腺肿块患者156例为观察对象,其中良性乳腺病变患者83例、乳腺癌患者73例。分析观察对象CDFI表现特征,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测患者血清miR-128、miR-146a水平,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-128、miR-146a对乳腺癌的诊断价值,评价CDFI联合血清miR-128、miR-146a对乳腺癌的诊断效能。结果CDFI检查结果显示,156例有乳腺肿块患者中乳腺癌78例、良性乳腺病变78例,CDFI诊断乳腺癌的灵敏度为80.8%(59/73),特异度为77.1%(64/83),准确度为78.8%(123/156);与乳腺良性肿瘤患者比较,乳腺癌患者血清miR-128、miR-146a表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-128诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)(95%CI)为0.793(0.717,0.869),灵敏度为75.3%,特异度为83.1%,截断值为0.7;血清miR-146a诊断乳腺癌AUC(95%CI)为0.822(0.755,0.889),灵敏度为76.7%,特异性为80.7%,截断值为0.83;CDFI、血清miR-128、miR-146a联合诊断乳腺癌的灵敏度为93.2%、特异性为89.2%,准确度为91.0%,其诊断效能显著高于CDFI、血清miR-128、miR-146a单独检测。结论CDFI联合血清miR-128、miR-146a在鉴定乳腺肿块良恶性中,有一定临床应用意义。

糖尿病酮症酸中毒合并感染患者血清微小RNA-146a和微小RNA-155水平检测及意义

目的:检测糖尿病酮症酸中毒合并感染患者血清微小RNA(miR)-146a和miR-155水平,分析其意义。方法:选取DKA合并感染患者76例(感染组)和单纯DKA未合并感染患者60例(未感染组)。入院后24 h内,对实验室生化指标进行检测,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)测定血清miR-146a、miR-155水平。分析DKA合并感染的影响因素,DKA患者血清miR-146a、miR-155、白细胞计数(WBC)和C-反应蛋白(CRP)的相关性,以及血清miR-146a、miR-155对DKA合并感染的诊断价值。结果:感染组WBC、CRP以及血清miR-146a、miR-155水平高于未感染组(均P<0.05)。WBC、CRP、miR-146a、miR-155是DKA患者合并感染的独立危险因素(均P<0.05)。DKA合并感染患者血清miR-146a、miR-155与WBC、CRP呈正相关,且血清miR-146a与miR-155呈正相关(均P<0.05)。血清miR-146a和miR-155对DKA合并感染均有一定的诊断价值,且两项联合的诊断价值更高(均P<0.05)。结论:DKA合并感染患者血清miR-146a、miR-155呈高水平,与WBC、CRP密切相关,对DKA合并感染具有较高诊断价值。

miRNA-146通过调控TLR4/NF-κB信号通路促进 POI模型卵巢颗粒细胞生长的机制研究

目的 探讨小鼠原发性卵巢功能不全(POI)模型的微小RNA(miRNA)-146、Toll样受体4(TLR4)和核转录因子-κB(NF-κB)的水平及对卵巢颗粒细胞生长的影响。方法 取健康雌性BALB/c小鼠40只,随机分为POI组和对照组,每组20只。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清miRNA-146水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)表达水平;采用蛋白质印迹法检测小鼠卵巢组织TLR4和NF-κB蛋白水平。采用miRNA-146模拟物或抑制剂转染小鼠卵巢颗粒细胞,评估卵巢颗粒细胞增殖、生长活力和细胞凋亡率及TLR4、NF-κB通路蛋白的表达。采用Spearman相关分析POI模型miRNA-146水平与TLR4和NF-κB水平的相关性。结果 POI组的miRNA-146水平显著低于对照组(P<0.05),TNF-α、IL-6、TLR4、NF-κB水平高于对照组(P<0.05)。miRNA-146模拟物在卵巢颗粒细胞中呈高表达水平,且呈浓度依赖趋势。miRNA-146转染后,miRNA-146模拟物组细胞凋亡率低于对照组,miRNA-146抑制剂组细胞凋亡率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。Spearman相关性分析结果显示,POI小鼠的miRNA-146水平与TLR4、NF-κB水平呈负相关(r=-0.725、-0.681,P<0.05)。结论 上调miRNA-146水平具有促进卵巢颗粒细胞生长的作用,其机制可能与miRNA-146负性调控TLR4/NF-κB信号通路和下调TNF-α、IL-6的表达相关,miRNA-146有望作为评估卵泡质量的指标之一。

miRNA-19、miRNA-146、miRNA-155在支气管哮喘患者中的表达及与气道重塑的相关性

目的探讨微小RNA-19(miRNA-19)、微小RNA-146(miRNA-146)、微小RNA-155(miRNA-155)在支气管哮喘患者中的表达及与气道重塑的相关性。方法选取2019年2月至2021年2月92例支气管哮喘患者作为研究组,根据病情严重程度分为重度组(n=17)、中度组(n=30)及轻度组(n=45),根据胸部高分辨率CT诊断结果将研究组分为气道重塑组(n=34)及非重塑组(n=58),另取同期60例健康体检者作为对照组,检测并比较各组血清miRNA-19、miRNA-146、miRNA-155,采用Perason相关性系数分析血清miRNA-19、miRNA-146、miRNA-155与病情严重程度、气道重塑的相关性。结果研究组血清miRNA-19、miRNA-146水平高于对照组,miRNA-155水平低于对照组(P<0.05);重度组血清miRNA-19、miRNA-146水平均高于中度组、轻度组,中度组血清miRNA-19、miRNA-146水平均高于轻度组(P<0.05);重度组血清miRNA-155水平低于中度组、轻度组,中度组血清miRNA-155水平低于轻度组(P<0.05);重塑组血清miRNA-19、miRNA-146水平均高于非重塑组,miRNA-155水平低于非重塑组(P<0.05);Perason相关性分析显示,血清miRNA-19、miRNA-146与病情严重程度、气道重塑呈正相关,血清miRNA-155与病情严重程度、气道重塑呈负相关(P<0.05)。结论支气管哮喘患者血清miRNA-19、miRNA-146呈高表达、miRNA-155呈低表达,三者均与病情严重程度及气道重塑情况存在相关性。

血清miR-124、CD146及Angptl2水平与急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系研究

目的探讨血清微小RNA-124(miR-124)、CD146、血管生成素样蛋白2(Angptl2)与急性脑梗死(ACI)患者颈动脉粥样硬化(CAS)斑块稳定性的关系,为ACI患者的早期防治提供参考依据。方法选择2020年1月至2023年2月在邯郸市中心医院就诊的ACI患者191例作为ACI组,另选取同期在该院体检的健康志愿者61例作为对照组。根据颈动脉彩色多普勒超声结果将ACI患者分为不稳定斑块组(56例)、稳定斑块组(71例)、无斑块组(64例)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测所有对象血清miR-124表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清CD146、Angptl2水平,采用单因素及多因素Logistic回归分析ACI患者CAS斑块不稳定的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-124、CD146联合Angptl2对ACI患者CAS斑块不稳定的预测价值。结果ACI组血清CD146、Angptl2水平高于对照组,miR-124表达水平低于对照组(P<0.05)。单因素分析结果显示,ACI患者CAS斑块的稳定性与患者年龄、合并高血压、合并高脂血症、纤维蛋白原(FIB)、血清C反应蛋白(CRP)、血清胱抑素C(CyC)、CD146、Angptl2、miR-124有关(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,血清miR-124下降、CD146升高、Angptl2升高、合并高脂血症是ACI患者CAS斑块稳定性的危险因素(P<0.05)。血清miR-124、CD146、Angptl2及三项指标联合应用预测ACI患者CAS斑块不稳定的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.741、0.719、0.781和0.834。结论血清miR-124表达水平及CD146、Angptl2水平是ACI患者CAS斑块不稳定的影响因素,可能参与ACI患者CAS斑块形成及发展过程,三者联合检测对ACI患者CAS斑块不稳定具有较好的预测效能。

miR-146a-5p、SMAD4在甲状腺滤泡癌组织中表达变化和对FTC-238细胞系增殖迁移侵袭影响及靶向关系

目的通过观察甲状腺滤泡癌(FTC)组织中miR-146a-5p、SMAD4的表达变化及对细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,分析miR-146a-5p与SMAD4之间的靶向关系,以探讨miR-146a-5p是否通过靶向SMAD4促进FTC增殖、迁移、侵袭。方法收集FTC组织标本30例份,非肿瘤甲状腺或距离肿瘤边缘>2 cm癌旁组织30例份,采用RT-qPCR法检测FTC组织及癌旁组织中miR-146a-5p、SMAD4 mRNA。将FTC-238细胞系分为miR-146a-5p mimics组和阴性对照(miR-NC组)分别转染miR-146a-5p mimics(使细胞过表达miR-146a-5p)及miR-NC。采用CCK8法观察两组培养12、24、48 h时的细胞增殖能力,划痕实验观察两组细胞迁移能力,Transwell小室实验观察两组细胞侵袭能力。分别采用RT-qPCR及免疫印迹法检测两组细胞中SMAD4 mRNA及蛋白。双荧光素酶报告基因实验验证miR-146a-5p与SMAD4的靶向关系。结果与癌旁组织相比,FTC组织中miR-146a-5p相对表达量降低(P<0.05);SMAD4 mRNA相对表达量升高(P<0.05)。与miR-NC组相比,各个时间点miR-146a-5p mimics组细胞OD值降低(P均<0.05);与miR-NC组相比,miR-146a-5p mimics组细胞迁移、侵袭数目减少(P均<0.05)。与miR-NC组相比,miR-146a-5p mimics组SMAD4 mRNA及蛋白相对表达量降低(P均<0.05)。miR-146a-5p与SMAD4存在靶向关系。结论FTC组织中miR-146a-5p表达降低、SMAD4表达升高;miR-146a-5p过表达可抑制FTC-238细胞系增殖、迁移、侵袭;miR-146a-5p与SMAD4之间存在靶向关系。miR-146a-5p可能通过靶向抑制SMAD4促进FTC癌细胞的增殖、迁移、侵袭。

母体血清微RNA-146a-5p联合三联法检测在孕中期唐氏综合征筛查中的意义

目的 探讨母体血清微RNA-146a-5p(miR-146a-5p)联合三联法检测在孕中期唐氏综合征筛查中的意义。方法 选取2017年1月至2020年8月于黄冈市中心医院孕中期行唐氏综合征筛查结果为阳性的孕妇65例(病例组),同期选择本院健康的妊娠孕妇65例(对照组)。使用化学发光免疫分析仪检测孕妇血清甲胎蛋白(AFP),人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)以及游离雌三醇(uE3)指标。实时荧光定量PCR法检测血清中miR-146a-5p的水平。采用受试者操作特征(ROC)曲线分析母体血清miR-146a-5p联合三联法对孕中期唐氏综合征的预测价值。采用Pearson法分析miR-146a-5p相对表达水平与血清AFP、uE3、β-hCG中位数的倍数(MOM)值的相关性。结果 与对照组(1.89±0.32)U/mL、(1.63±0.36)μg/L、1.03±0.24、(2.41±0.28)μg/L相比,病例组孕妇血清AFP MOM值(2.84±0.27)U/mL、β-hCG MOM值(2.84±0.25)μg/L及血清miR-146a-5p相对表达水平3.07±0.95较高(P<0.05),uE3 MOM值(1.71±0.19)μg/L较低(P<0.05)。Pearson法分析显示,miR-146a-5p与AFP、β-hCG呈正相关(P<0.05),与uE3呈负相关(P<0.05)。ROC曲线结果显示,AFP+uE3+β-hCG预测孕中期唐氏综合征的曲线下面积(AUC)为0.85,灵敏度分别为83.10%,特异度分别为75.40%;miR-146a-5p预测孕中期唐氏综合征的AUC为0.86,灵敏度为81.50%,特异度为87.70%;miR-146a-5p+AFP+uE3+β-hCG预测子孕中期唐氏综合征的AUC为0.91,灵敏度为86.20%,特异度为80.00%,miR-146a-5p联合三联法检测对孕中期唐氏综合征筛查价值高于三联法检测(P<0.05)。结论 母体血清miR-146a-5p联合三联法对孕中期唐氏综合征的预测效能具有较高的临床价值,可为孕中期唐氏综合征筛查提供一种新途径。

外周血miRNA-146a、miRNA-26a在重症急性胰腺炎预后中的价值探讨

目的 探究外周血微小RNA-146a(miR-146a)、微小RNA-26a(miR-26a)在重症急性胰腺炎预后中的价值。方法 选择器工业五二一医院2019年4月—2021年3月收治的119例重症急性胰腺炎患者作为研究对象,根据临床病历资料收集患者的临床一般资料,于患者入院24 h内对患者外周血miRNA-146a、miRNA-26a相对表达量及血常规指标进行检测。根据患者治疗28 d内病情转归情况将其分为生存组和死亡组。通过Logistic多因素回归分析影响重症急性胰腺炎患者预后的影响因素;采用受试者工作特征曲线(ROC)下面积评估外周血miR-146a及miR-26a水平对患者临床预后的预测价值。结果 死亡组胰周感染所占比例及APACHEⅡ评分、miR-146a相对表达量、miR-26a相对表达量均高于生存组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic多因素回归分析结果显示,胰周感染、APACHEⅡ评分、外周血miR-146a及miR-26a相对表达水平偏高均为重症急性胰腺炎患者预后死亡的危险因素(P<0.05)。ROC分析显示,外周血miR-146a、miR-26a水平单一及联合对重症急性胰腺炎患者预后死亡的ROC预测的曲线下面积(AUC)分别为0.793、0.780、0.883,且外周血miR-146a、miR-26a水平对重症急性胰腺炎患者死亡预后的单一预测效能低于两者联合(P<0.05)。结论 合并胰周感染、APACHEⅡ评分、外周血miR-146a及miR-26a相对表达水平偏高的重症急性胰腺患者死亡率较高,外周血miR-146a、miR-26a相对表达水平均可有效预测重症急性胰腺炎患者的死亡预后。

长链非编码RNA X染色体失活特异转录物和微小RNA-146-5p在甲状腺癌中的表达及临床意义

目的探讨甲状腺癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)X染色体失活特异转录物(XIST)、微小RNA-146-5p(miR-146-5p)的表达及其诊断价值。方法选取甲状腺癌患者92例为研究对象,均行手术切除术,术中收集甲状腺癌组织和癌旁正常组织。分析LncRNA XIST、miR-146-5p水平与患者临床病理特征之间的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估LncRNA XIST、miR-146-5p单独及联合对甲状腺癌的诊断价值。结果甲状腺癌组织中LncRNA XIST表达水平为(0.65±0.17),低于癌旁组织的(1.02±0.18),miR-146-5p表达水平为(2.56±0.87),高于癌旁组织的(1.07±0.25),差异有统计学意义(P<0.05)。临床分期Ⅲ~Ⅳ期、发生颈部淋巴结转移的甲状腺癌患者肿瘤组织中LncRNA XIST表达水平低于临床分期Ⅰ~Ⅱ期、未发生颈部淋巴结转移的甲状腺癌患者,miR-146-5p表达水平高于临床分期Ⅰ~Ⅱ期、未发生颈部淋巴结转移的甲状腺癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线结果显示,LncRNA XIST、miR-146-5p二者联合诊断甲状腺癌的曲线下面积(AUC)大于LncRNA XIST、miR-146-5p单独诊断,差异有统计学意义(P<0.05)。结论甲状腺癌组织中LncRNA XIST表达下调,miR-146-5p表达上调,二者与临床分期、颈部淋巴结转移有关,并对甲状腺癌有一定的诊断价值。

miRNA-146调控TLR4/NF-κB通路促进滋养层细胞增殖和迁移

目的探讨miRNA-146是否通过调控Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路促进滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖和迁移,以期为不明原因复发性流产(uRSA)的发病机制研究和防治提供参考。方法(1)细胞研究:将转染后的胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo分成miRNA-146抑制剂组、抑制剂对照组、miRNA-146模拟物组、模拟物对照组,检测各组HTR-8/SVneo细胞生长的活力、增殖、凋亡、迁移情况,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组TLR4、NF-κB、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的mRNA和蛋白相对表达水平。(2)动物研究:建立Dicer酶敲除的uRSA小鼠模型,将正常妊娠小鼠作为对照组,通过qRT-PCR检测胎盘组织的miRNA-146 mRNA表达情况,采用免疫组织化学法检测胎盘组织的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达情况。结果(1)细胞研究:与模拟物对照组比较,miRNA-146模拟物组HTR-8/SVneo细胞克隆形成率、增殖能力及迁移能力显著增加(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与抑制剂对照组和miRNA-146模拟物组比较,miRNA-146抑制剂组HTR-8/SVneo细胞克隆形成率、增殖能力及迁移能力显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。与模拟物对照组比较,miRNA-146模拟物组的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白和mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);与抑制剂对照组和miRNA-146模拟物组比较,miRNA-146抑制剂组的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白和mRNA相对表达量显著增加(P<0.05)。不同浓度(10~80μmol/L)miRNA-146对HTR-8/SVneo细胞生长活力的增长均有显著影响(P<0.05),并呈浓度依赖性。(2)动物研究:与对照组比较,uRSA组小鼠胎盘组织中miRNA-146 mRNA的相对表达量显著降低[(0.32±0.19)vs.(0.96±0.24),t=12.473,P<0.05],而TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6的蛋白表达有增高趋势。结论上调miRNA-146的表达具有促进胎盘滋养层细胞的增殖和迁移作用,其机制可能与负性调控TLR4/NF-κB通路相关。miRNA-146有望成为防治uRSA的潜在靶标。

IgA肾病患者尿液外泌体中微小RNA-146a、微小RNA-210表达及与病理分级的相关性研究

目的探索IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者尿液外泌体中微小RNA(miRNA,miR)-146a、miR-210表达及其与IgAN病理分级的相关性。方法选取2018年1月至2022年1月在雅安市人民医院经肾穿刺后病理组织学活检确诊的IgAN患者113例作为研究对象,并选取同期健康体检人群100人作为健康对照组。将研究对象的肾脏病理标本按照Lee氏分级分为轻(Ⅰ-Ⅱ级)、中(Ⅲ级)、重(Ⅳ-Ⅴ)3组,实时荧光定量PCR比较实验组及健康对照组两组间尿液外泌体中miR-146a、miR-210表达水平;比较不同病理分级IgAN患者尿液外泌体中miR-146a、miR-210表达水平;Spearman秩相关系数分析IgAN患者24 h尿蛋白、血肌酐、尿液外泌体miR-146a及miR-210表达水平之间的相关性;采用受试者工作特征曲线评估尿液外泌体中miR-146a、miR-210表达对IgAN的诊断价值。结果IgAN患者尿液外泌体中miR-146a[(3.27±1.59)比(5.13±0.34)]、miR-210[(1.25±0.71)比(2.33±0.45)]表达较健康对照组明显降低(P<0.01);IgAN患者尿液外泌体中miR-146a、miR-210表达水平与Lee氏分级、24 h尿蛋白及血肌酐呈负相关,即Lee氏分级越高,其表达水平越低。miR-146a用于诊断IgAN的敏感度及特异度分别为88.89%、77.52%,曲线下面积为0.835;miR-210用于诊断IgAN的敏感度及特异度分别为79.71%、85.92%,曲线下面积为0.842。结论IgAN患者尿液外泌体中miR-146a、miR-210表达水平明显降低,对尿液外泌体中miR-146a、miR-210表达水平进行检测有助于对IgAN病理分级进行判断,尿液外泌体中miR-146a、miR-210有望作为IgAN辅助诊断和治疗效果监测的潜在分子标志物。

前列腺小体miRNA-146a/TLR-4/NF-κB通路在EAP大鼠慢性炎症中的作用及大火草干预的研究

背景目前对慢性前列腺炎(CP)的治疗未达到预期的疗效,亟需寻找新的治疗药物,本课题组前期研究发现大火草〔Anemone tomentosa(Maxim.)Péi〕对CP有较好的疗效,但具体作用机制还有待进一步研究。目的探讨前列腺小体源性微小RNA-146a(miRNA-146a)调控Toll样受体4(TLR-4)/核转录因子κB(NF-κB)通路在自身免疫性前列腺炎(EAP)大鼠慢性炎症中的作用及大火草干预的可能机制。方法2021年12月—2022年6月,将42只Wistar大鼠采用随机数字表法分正常组、模型组、大火草低剂量组、大火草中剂量组、大火草高剂量组、miRNA-146a激动剂(mimics)组、miRNA-146a抑制剂(inhibitor)组,每组6只。药物干预后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA,采用蛋白质印迹法检测TLR-4、细胞内抑制性蛋白κB(IκB)、磷酸化细胞内抑制性蛋白κB(p-IκB)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6),酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)检测炎症因子。结果与正常组比较,各组前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA表达均下调(P<0.01)。与模型组比较,大火草中、高剂量组,miRNA-146a mimics组前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA表达均上调(P<0.01);miRNA-146a inhibitor组前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA表达下调(P<0.01)。大火草和miRNA-146a mimics可以显著降低前列腺组织TLR-4、p-IκBα、TRAF6蛋白表达(P<0.01);促进前列腺组织IκBα蛋白表达上调(P<0.01);降低大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)、干扰素γ(IFN-γ)水平(P<0.05)。大火草和miRNA-146a mimics可以减轻前列腺组织炎症细胞浸润,改善前列腺组织病理损伤。结论前列腺小体源性miRNA-146a可以调节TLR-4/NF-κB通路参与EAP大鼠前列腺局部病理变化。大火草抗EAP大鼠慢性炎症的作用机制可能与其调控前列腺小体源性miRNA-146a/TLR-4/NF-κB通路有关。

基于微小RNA-146a探究川陈皮素对帕金森病模型的神经保护作用

目的通过建立帕金森病(Parkinson’s disease,PD)细胞和动物模型,揭示微小RNA-146a(miR-146a)介导川陈皮素(nobiletin)对PD的调控作用。方法分别构建PD细胞模型和PD小鼠模型作为研究样本,并接受不同浓度川陈皮素治疗。利用实时荧光定量PCR检测样本中miR-146a的表达水平,CCK-8法分析细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,使用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测小鼠血清和海马组织匀浆中炎症因子的表达水平,并利用旷场实验记录小鼠运动能力,分析miR-146a介导川陈皮素对PD的治疗功效。结果与对照组相比,PD细胞模型组中miR-146a的表达和细胞凋亡率随川陈皮素浓度的增加而下降,细胞增殖水平则相反,提示川陈皮素具有提高PD细胞增殖活力、抑制凋亡的作用。进一步选择川陈皮素高剂量组验证发现,异常表达miR-146a介导川陈皮素调控PD的进展,并通过PD小鼠运动能力、血清和组织中炎症因子的变化再次验证了川陈皮素对神经保护功能的分子机制。结论miR-146a在PD细胞模型中表达显著升高,川陈皮素可恢复神经细胞的活力。miR-146a通过介导川陈皮素调控神经细胞的生长及炎症因子的水平,恢复小鼠的正常运动功能,可能是治疗PD的潜在靶点。

血清miR-146a、Lp-PLA2与脓毒症急性肾损伤患者肾功能的相关性分析

目的探讨血清微小RNA-146a(miR-146a)、脂蛋白相关性磷脂酶A2(Lp-PLA2)与脓毒症急性肾损伤(AKI)患者肾功能的相关性。方法选取2020年2月—2022年2月本院感染性疾病科住院的88例脓毒症患者进行回顾性分析,根据入院24 h内是否发生AKI分组(包括入院时已发生AKI的患者),将40例发生AKI的患者设为观察组1,48例未发生AKI的患者设为观察组2,另选取同期本院体检中心的45例健康体检者设为对照组。检测、比较3组入院24 h内/体检时血清miR-146a、Lp-PLA2、肾功能[胱抑素C(Cys-C),血肌酐(Scr)]指标。根据脓毒症AKI疾病严重程度,将观察组1患者分为休克组(7例)、重度组(20例)、轻度组(13例),比较脓毒症AKI患者中不同疾病严重程度、不同AKI分期组血清miR-146a、Lp-PLA2、肾功能指标,Pearson分析miR-146a、Lp-PLA2与肾功能指标的相关性,绘制受试者工作曲线(ROC),计算曲线下面积(AUC),分析miR-146a、Lp-PLA2、肾功能对脓毒症发生AKI的预测效能。结果观察组1入院24 h内血清miR-146a、Lp-PLA2、Cys-C、Scr均高于观察组2及对照组(P<0.05)。脓毒症休克组血清miR-146a、Lp-PLA2、Cys-C、Scr均高于重度组及轻度组(P<0.05)。AKIⅢ期组血清miR-146a、Lp-PLA2、Cys-C、Scr均高于Ⅱ期组及Ⅰ期组(P<0.05)。入院24 h内血清miR-146a、Lp-PLA2与Cys-C、Scr均呈正相关性(P<0.05)(r=0.421、0.417、0.398、0.387)。血清miR-146a、Lp-PLA2、Cys-C、Scr联合检测预测脓毒症发生AKI的AUC为0.798,(95%CI:0.716~0.947),灵敏度是93.13%,特异度是91.84%,联合检测预测脓毒症发生AKI的灵敏度及特异度均高于单独检测(P<0.05)。结论脓毒症AKI患者血清miR-146a、Lp-PLA2呈高表达,与Cys-C、Scr呈相关性,血清miR-146a、Lp-PLA2联合Cys-C、Scr检测可提高对AKI的预测灵敏度及特异度,在脓毒症患者AKI诊断中具有一定的参考价值。

子宫内膜息肉组织中miR-152和miR-146b-5p的表达及意义

目的探讨微小RNA(miR)-152和miR-146b-5p在子宫内膜息肉中的表达,及其对术后复发的预测价值。方法收集2021年1月至2022年10月在石家庄市第六医院接受宫腔镜息肉切除术的196例子宫内膜息肉患者作为子宫内膜息肉组,根据患者术后6个月的复发情况分为复发组(53例)和未复发组(143例),另选取同期因不孕症进行宫腔镜检查的196例患者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测子宫内膜息肉组织和正常子宫内膜组织中miR-152、miR-146b-5p相对表达水平,并进行组间比较;采用多因素Logistic回归分析子宫内膜息肉患者术后复发的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析子宫内膜息肉中miR-152、miR-146b-5p相对表达水平对子宫内膜息肉患者术后复发的预测价值。结果复发组miR-152、miR-146b-5p相对表达水平、孕激素受体(PR)水平明显低于未复发组和对照组(P<0.05),血管内皮生长因子(VEGF)、雌激素受体(ER)水平明显高于未复发组和对照组(P<0.05);未复发组miR-152、miR-146b-5p相对表达水平、PR水平明显低于对照组(P<0.05),VEGF、ER水平明显高于对照组(P<0.05)。进一步研究显示,miR-152、miR-146b-5p、VEGF、ER、PR是子宫内膜息肉患者术后复发的影响因素(P<0.05)。miR-152、miR-146b-5p二者联合预测子宫内膜息肉患者术后复发的曲线下面积(AUC)为0.949,灵敏度为96.23%,特异度为74.02%,优于二者各自单独预测(Z联合检测-miR-152=4.854、Z联合检测-miR-146b-5p=3.431,P<0.001)。结论子宫内膜息肉组织中miR-152、miR-146b-5p表达明显下调,二者联合对预测子宫内膜息肉患者术后复发有较好的参考价值。

miR-146a和miR-181a在系统性红斑狼疮患者尿液外泌体的表达及临床意义

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者尿液外泌体微小RNA(miR)-146a和miR-181a的表达及其临床意义。方法 选取2023年1月至2023年10月四川大学华西医院诊断为SLE的患者40例作为SLE组,另同期的体检健康者20例作为对照组。根据SLE病情活动指数(SLEDAI)将SLE患者分为低活动组19例(SLEDAI≤9分)和高活动组21例(SLEDAI>9分)。采用实时荧光定量PCR检测尿液外泌体miR-146a和miR-181a表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、补体C3、IgG和抗心磷脂抗体(ACA)水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析尿液外泌体miR-146a和miR-181a表达对SLE及SLE合并肾脏受累的诊断价值。结果 SLE组尿液外泌体miR-146a和miR-181a相对表达水平高于对照组(P<0.05),且高活动组尿液外泌体miR-146a和miR-181a相对表达水平高于低活动组(P<0.05)。肾脏受累的SLE患者的尿液外泌体miR-146a和miR-181a相对表达水平高于肾脏无受累的SLE患者(P<0.05)。高活动组血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IgG和ACA水平高于低活动组,血清C3水平低于低活动组(P<0.05)。SLE患者的尿液外泌体miR-146a与血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IgG和ACA水平呈正相关(r=0.443、0.493、0.410、0.381、0.340,P<0.05),与血清C3水平呈负相关(r=-0.340,P<0.05)。SLE患者的尿液外泌体miR-181a与血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IgG和ACA水平呈正相关(r=0.342、0.470、0.373、0.371、0.334,P<0.05),与血清C3水平呈负相关(r=-0.368,P<0.05)。尿液外泌体miR-146a和miR-181a表达诊断SLE的曲线下面积分别为0.907、0.897(P<0.05),诊断SLE合并肾脏受累的曲线下面积分别为0.859和0.815(P<0.05)。结论 尿液外泌体miR-146a和miR-181a表达水平对SLE患者的疾病活动具有良好的评估作用,对SLE的病情预测和诊断具有潜在应用价值。

血清miR-155-5p和miR-146b-5p与继发性急性髓系白血病染色体畸变及预后的关系

目的探究血清微小RNA(miR)-155-5p和miR-146b-5p与继发性急性髓系白血病(sAML)染色体畸变及预后的关系。方法选择2017-05至2020-04空军军医大学第二附属医院血液内科收治的sAML患者26例,另外纳入同期在医院进行体检的健康人25名作为健康对照组。根据国际人类细胞遗传命名系统,将sAML患者分为染色体畸变组和染色体正常组。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-155-5p和miR-146b-5p水平,并记录患者随访期间的总生存期。结果与健康对照组相比,sAML组患者血清miR-155-5p显著升高[4.69(1.87,30.83)vs.1.13(0.79,1.78),Z=-4.070,P<0.001],而miR-146b-5p显著降低[1.79(1.55,2.44)vs.3.02(2.58,3.43),Z=-4.561,P<0.001]。二者联合诊断sAML的曲线下面积为0.922(95%CI:0.846~0.997)。与染色体正常组相比,染色体畸变组sAML患者血清miR-155-5p明显升高[19.26(4.45,46.65)vs.1.51(0.79,3.27),Z=-3.585,P<0.001],miR-146b-5p明显降低[1.55(1.50,1.97)vs.2.16(1.79,3.00),Z=-2.954,P=0.003]。血清miR-155-5p和miR-146b-5p水平识别染色体畸变的AUC分别为0.925(95%CI:0.826~1.000)、0.850(95%CI:0.703~0.997),联合AUC可提高至0.919(95%CI:0.812~1.000)。血清miR-155-5p和miR-146b-5p是染色体畸变的独立影响因素(P<0.05)。血清miR-155-5p高表达(≥4.27)和miR-146b-5p低表达(<1.62)患者的总生存率更低,中位生存时间更短(P<0.05)。Cox回归分析结果表明,血清miR-155-5p高表达和miR-146b-5p低表达是sAML患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论血清miR-155-5p高表达和miR-146b-5p低表达与sAML患者染色体畸变和预后不良密切相关,二者有希望成为sAML染色体畸变和预后不良的风险预测指标。

复发性自然流产患者再妊娠早期血清miR-146b、miR-184水平与妊娠结局的关系

目的探讨复发性自然流产(RSA)患者再妊娠后早期血清微小RNA-146b(miR-146b)、微小RNA-184(miR-184)水平与妊娠结局的关系。方法选取2019年5月至2022年5月沧州市人民医院收治的146例RSA再妊娠患者作为RSA组,选取同期146例身体正常且无流产史的孕妇作为对照组。根据患者妊娠情况,以流产、畸形儿、低体重儿、死胎、产褥出血等为不良妊娠结局,将患者分为不良妊娠结局组(n=49)和正常妊娠结局组(n=97)。比较血清miR-146b、miR-184表达水平,以及不良妊娠结局组和正常妊娠结局组临床资料,采用Pearson法分析血清miR-146b、miR-184水平的相关性,采用Logistic回归分析不良妊娠结局的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-146b、miR-184对不良妊娠结局的预测效能。结果RSA组血清miR-146b低于对照组,miR-184高于对照组(P<0.05)。不良妊娠结局组孕次、舒张压、收缩压均高于正常妊娠结局组,产次低于正常妊娠结局组(P<0.05)。不良妊娠结局组血清miR-146b低于正常妊娠结局组,miR-184高于正常妊娠结局组(P<0.05)。不良妊娠结局组血清miR-146b与miR-184水平呈负相关(r=-0.566,P<0.001)。miR-146b和miR-184均为RSA患者再妊娠后不良妊娠结局的独立影响因素(P<0.05)。血清miR-146b、miR-184联合预测效能高于单独预测(P<0.05)。结论RSA患者血清miR-146b显著下调,miR-184显著上调,两者水平与RSA及RSA患者再妊娠后的不良妊娠结局具有相关性。