抗真菌药物敏感性检测新方法的研究进展

抗真菌药物敏感性检测的目标是生成可靠的最小抑菌药物浓度,判断菌株的药物敏感性,从而指导临床医生的抗真菌治疗,为流行病学研究和开发新的抗真菌药物提供信息。然而目前的标准化药物敏感性检测方法与许多商品化药物敏感性检测方法存在检测时间长、适用菌株范围不完整的局限性。该文对目前的抗真菌药敏试验新方法进行综述,包括单细胞水平分析法、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱、等温微量热法及新型的商品化检测系统,并对它们的优点和不足进行分析,以期在日益加重的全球真菌感染中为抗真菌药物敏感性检测新方法提供新的研究方向,实现快速、准确的药物敏感性检测。

老年患者感染黏液型铜绿假单胞菌的药敏结果分析

目的分析老年感染黏液型铜绿假单胞菌的药敏结果和抗菌药物的灵敏性,为临床抗菌药物的合理应用提供理论依据。方法提取66株老年感染黏液型铜绿假单胞菌进行体外培养,并分别对菌株进行传代培养。同时对菌株在抗菌药物中不同培养时间点的最低抑菌浓度和抑菌环大小进行测定,检测不同抗菌药物对黏液型铜绿假单胞菌耐药性。然后对数代传种后黏液消除的菌株进行相同检测,对比两次检测结果并进行分析。结果传种前抑菌环直径在24h与48、72h及传种后24、48、72h的检测结果比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。其中48、72h检测结果与传种后24、48、72h的测量结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。广泛的抗菌药物对铜绿假单胞菌灵敏性都比较高,但对黏膜性菌株耐药性明显增强,需要考虑生物膜的耐药作用。结论 48h内检测老年感染黏液型铜绿假单胞菌有重要的诊断和疗效意义。对黏液型铜绿假单胞菌需要考虑生物膜的耐药作用,尽量提高抗菌药物使用的合理性。

基于ompK36突变快速检测产KPC肺炎克雷伯菌亚胺培南最低抑菌浓度的方法学建立

目的基于ompK36基因GD突变,建立一种快速检测产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌(KPC-Kp)亚胺培南最低抑菌浓度(MIC)的方法。方法方法学建立。收集丽水市中心医院2011年3月至2019年12月的非重复肺炎克雷伯菌258株,PCR扩增膜孔蛋白o mpK36基因以及碳青霉烯酶基因bla_(KPC)、bla_(NDM)、bla_(IMP)、bla_(OXA-48)并测序确认,微量肉汤稀释法检测菌株亚胺培南MIC值,建立基因型与MIC值的对应模式。基于该模式,设计建立实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)快速检测MIC值的方法。利用丽水市疾控中心2017—2019年收集的159株非重复肺炎克雷伯菌进一步验证。四格表计算敏感度、特异度,Kappa检验比较RT-PCR法与肉汤稀释法结果的一致性。结果258株肺炎克雷伯菌中,109株未携带碳青霉烯酶基因,65株携带ompK36基因GD突变,127株携带bla_(KPC),15株携带bla_(NDM),9株携带bla_(IMP),未检测到bla_(OXA-48)。以肉汤稀释法为标准,肺炎克雷伯菌耐药基因与亚胺培南MIC值存在3种对应模式:4种碳青霉烯酶基因均阴性时,MIC≤1 mg/L,敏感度为100%(107/107),特异度为98.4%(125/127);bla_(KPC)阳性而ompK36基因GD突变阴性时,4 mg/L≤MIC≤16 mg/L,敏感度为88.2%(60/68),特异度为98.8%(164/166);bla_(KPC)和ompK36基因GD突变双阳性时,MIC≥32 mg/L,敏感度为96.6%(57/59),特异度为96.6%(169/175)。RT-PCR法可准确检测bla_(KPC)、bla_(NDM)、bla_(IMP)、bla_(OXA-48)基因;在产酶菌株中o mpK36基因GD突变的RT-PCR结果与测序法100%一致。以丽水市疾控中心来源的159株肺炎克雷伯菌为样本,以肉汤稀释法为参照,RT-PCR检测亚胺培南MIC值在3种模式下敏感度和特异度均大于95%,Kappa值为0.971。结论基于ompK36基因GD突变建立的RT-PCR法有助于快速判断KPC-Kp的亚胺培南MIC值范围。

鼠疫耶尔森菌最低抑菌浓度测定方法的建立与应用

目的测定11种抗菌药物对鼠疫耶尔森菌(简称鼠疫菌)的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),建立鼠疫菌MIC测定方法,掌握常用抗生素对鼠疫菌的抑菌范围,为鼠疫的临床治疗提供基线数据。方法根据美国临床和实验室标准协会(Clinical Labor Standard Institution,CLSI)药敏试验方法中的琼脂稀释法,分别测定氧氟沙星、环丙沙星、复方新诺明(甲氧苄啶-磺胺甲恶唑)、硫酸卡那霉素、硫酸链霉素、头孢曲松钠、氨苄青霉素钠、氯霉素、盐酸壮观霉素、头孢呋辛钠、盐酸四环素共11种抗菌药物对118株鼠疫菌的MIC,并计算MIC50、MIC90(能抑制50%、90%细菌生长的最低药物浓度)。以纸片扩散法的检测结果作为对照观察两者的一致性。118株鼠疫菌分离自青海省鼠疫自然疫源地,由青海省地方病预防控制所保存。结果检测的118株鼠疫菌,未发现具有单个或多个抗菌药物抗性的菌株,与纸片扩散法结果一致,并获得11种抗菌药物对118株菌的MIC50、MIC90。结论成功建立了鼠疫菌MIC测定方法,该方法能高通量测定抗菌药物对鼠疫菌的MIC,评价鼠疫菌对抗生素的敏感性,是一种高效、经济、实用的实验手段。

常用抗菌药物对新疆鼠疫自然疫源地鼠疫菌体外抗菌活性的研究

目的检测新疆维吾尔自治区鼠疫自然疫源地鼠疫菌株对12种常用抗生素的敏感性,包括最低抑菌浓度及MIC90。方法采用琼脂稀释法测定氧氟沙星、环丙沙星、莫西沙星、复方新诺明(甲氧苄啶-磺胺甲恶唑)、硫酸卡那霉素、硫酸链霉素、头孢曲松钠、氨苄青霉素钠、氯霉素、盐酸壮观霉素、头孢呋辛钠、盐酸四环素共12种抗生素对100株鼠疫菌的最低抑菌浓度MIC50和MIC90。结果体外试验显示100株鼠疫菌中对氧氟沙星、环丙沙星、莫西沙星、复方新诺明、硫酸卡那霉素、硫酸链霉素、头孢曲松钠、氨苄青霉素、氯霉素、盐酸壮观霉素、头孢呋辛钠和盐酸四环素均敏感。其中头孢曲松钠、复方新诺明、环丙沙星、氧氟沙星对鼠疫菌株的MIC90≤0.125μg/ml,莫西沙星、氨苄青霉素、头孢呋辛钠、卡那霉素、氯霉素、链霉素和四环素0.25μg/ml≤MIC90≤4μg/ml,壮观霉素MIC90≥16μg/ml。结论新疆鼠疫自然疫源地尚未发现耐药鼠疫菌株,流行株对常用抗生素敏感。主动监测耐药鼠疫菌株有助于早期发现耐药菌,为当地鼠疫的治疗用药提供依据。

结核分枝杆菌利福平分子药敏结果与其表型药敏差异的研究

目的 分析结核分枝杆菌利福平耐药的分子药敏(Xpert MTB/RIF)检测与在表型药敏(Bactec MGIT 960)检测结果不一致的机制。 方法 从2015年10月-2018年4月在长沙医学院第一附属医院进行 Xpert MTB/RIF 检测的8 274位患者中筛选出 Xpert MTB/RIF 检测利福平耐药而 Bactec MGIT 960 利福平敏感的患者39例,以及Xpert MTB/RIF 检测利福平敏感而 Bactec MGIT 960 利福平耐药的患者7例,共46例患者标本复苏其分离株,然后提取基因组DNA并进行rpoB的利福平耐药决定区域(rifampicin resistance determining region, RRDR)测序,同时对所有复苏的分离株进行最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)测定,观察不同突变菌株的耐药程度。 结果 46例患者中有2例菌株复活失败、2例菌株丢失,剩下42例菌株完成测序,其余有5株菌株RRDR区未发生突变,剩余的37株在rpoB基因的RRDR区有不同位点及不同类型的变异,其中有2株在508和509位点发生缺失突变,其它突变的位点有511、516、526、531、533。多数突变位点集中在526位,突变类型包括His526Asn、His526Leu、His526Gly、His526Cys四种,其余位点突变形式为Leu511Pro、Asp516Tyr、Leu533Pro。在511、516、526、533位点突变中,MIC测定除了一株突变类型为His526Leu的菌株为32 μg/ml外,其余位点突变均表现为低水平耐药或敏感,而531位点突变中Ser531Trp、Ser531Leu均表现为高水平耐药。 结论 基于rpoB测序和MIC测定的结果显示特定rpoB基因突变可能导致结核分枝杆菌利福平耐药水平的改变,结核分枝杆菌利福平耐药(Xpert MTB/RIF)检测与(Bactec MGIT 960)检测结果不一致。

连翘与连翘叶总提物及其肠道菌群转化液对表皮葡萄菌的抗菌活性研究

目的:从体外抗菌实验探究连翘与连翘叶总提取物及两者肠道菌群转化液对表皮葡萄球菌的抗菌作用。方法:使用高效液相色谱法(HPLC)检测肠道菌群转化液的转化程度及连翘苷、连翘酯苷A、芦丁的含量,采用倍比稀释法、平板抑菌法、最低抑菌浓度(MIC)检测法、最低杀菌浓度(MBC)检测法比较4种药液抗菌活性的强弱。结果:4种药液对表皮葡萄球菌的MIC:连翘总提物为0.2000mg/mL,连翘叶总提物为0.1000mg/mL,连翘肠道菌转化液为0.1000mg/mL,连翘叶肠道菌转化液为0.0500mg/mL;MBC:连翘总提物为0.9990mg/mL,连翘叶总提物为0.6660mg/mL,连翘肠道菌转化液为0.6660mg/mL,连翘叶肠道菌转化液为0.4440mg/mL。结论:4种药液对表皮葡萄球菌均具有抗菌作用,连翘叶总提物抗菌作用优于连翘总提物,经过肠道菌转化后的药液抗菌活性更好。

结核分枝杆菌利福平分子药敏结果与其表型药敏差异的研究

目的:分析结核分枝杆菌利福平耐药的分子药敏(Xpert MTB/RIF)检测与在表型药敏(Bactec MGIT 960)检测结果不一致的机制。方法:从2015年10月-2018年4月在长沙医学院第一附属医院进行Xpert MTB/RIF检测的8274位患者中筛选出Xpea MTB/RIF检测利福平耐药而Bactec MGIT 960利福平敏感的患者39例,以及Xpert MTB/RIF检测利福平敏感而BaetecMGIT960利福平耐药的患者7例,共46例患者标本复苏其分离株,然后提取基因组DNA并进行rpoB的利福平耐药决定区域(rifampiein resistance determining region,RRDR)测序,同时对所有复苏的分离株进行最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)测定,观察不同突变菌株的耐药程度。结果:46例患者中有2例菌株复活失败、2例菌株丢失,剩下42例菌株完成测序,其余有5株菌株RRDR区未发生突变,剩余的37株在rpoB基因的RRDR区有不同位点及不同类型的变异,其中有2株在508和509位点发生缺失突变,其它突变的位点有511、516、526、531、533。多数突变位点集中在526位,突变类型包括His526Asn、H/s526Leu、His526Gly、His526Cys四种,其余位点突变形式为Leu5llPro、Asp516Tyr、Leu533Pro。在511、516、526、533位点突变中,MIC测定除了一株突变类型为H/s526Leu的菌株为32μg/ml外,其余位点突变均表现为低水平耐药或敏感,而531位点突变中Ser531Trp、Ser531Leu均表现为高水平耐药。结论:基于rpoB测序和MIC测定的结果显示特定rpoB基因突变可能导致结核分枝杆菌利福平耐药水平的改变,结核分枝杆菌利福平耐药(xpert MTB/RIF)检测与(Bactec MGIT 960)检测结果不一致。