血清miR⁃200c表达与2型糖尿病患者白蛋白尿短期进展的相关性研究

目的研究血清miR⁃200c表达与2型糖尿病患者白蛋白尿短期进展的相关性。方法选择2015年3月至2019年10月期重复收治入院的108例2型糖尿病患者,根据首次入院时尿白蛋白水平分为无白蛋白尿组55例、微量白蛋白尿组35例、大量白蛋白尿组18例,根据第二次入院时尿白蛋白变化分为白蛋白尿进展组和非进展组,检测首次入院时血清miR⁃200c表达量并分析白蛋白尿短期进展的相关因素。结果与无白蛋白尿组、微量白蛋白尿组比较,大量白蛋白尿组患者的糖尿病病程明显延长,高血压率、FBG、HbA1c%、Scr、eGFR、miR⁃200c均明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05);与非进展组患者比较,进展组患者高血压率、Scr、eGFR、miR⁃200c均明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05);Logistics回归分析显示,高血压及miR⁃200c增加是白蛋白尿短期进展的危险因素,差异具有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析显示,miR⁃200c对白蛋白尿短期进展具有预测价值,最佳截点为0.865。结论血清miR⁃200c表达增加是2型糖尿病患者白蛋白尿短期进展的危险因素且对白蛋白尿短期进展具有预测价值。

miR-200c PAPP-A水平与经阴道超声鉴别诊断先兆流产和异位妊娠的价值

目的:探究血清miR-200c、妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)水平与经阴道超声鉴别诊断先兆流产和异位妊娠的价值。方法:本研究开展时间为2020年1月至2022年1月,研究对象为此时间段内在我院就诊的正常早孕孕妇、异位妊娠及先兆流产孕妇各43例,患者均接受阴道超声检查,记录各项超声参数,并比较各组孕妇就诊时血清miR-200c、PAPP-A水平差异,探究其对孕妇先兆流产及异位妊娠的诊断价值。结果:三组间孕妇的妊娠黄体平均径比较组间差异无统计学意义(P>0.05),异位妊娠孕妇的子宫内膜厚度低于先兆流产组和正常早孕组,且先兆流产组低于正常早孕组(P<0.05);先兆流产组孕妇的RI高于异位妊娠组和正常早孕组,且异位妊娠组高于正常早孕组(P<0.05);先兆流产组和异位妊娠组孕妇的PSV均低于正常早孕组(P<0.05),但先兆流产组和异位妊娠组组间差异无统计学意义(P>0.05)。先兆流产组和异位妊娠组孕妇的血清miR-200c水平高于正常早孕组(P<0.05),但先兆流产组和异位妊娠组组间差异无统计学意义(P>0.05),异位妊娠孕妇的PAPP-A低于先兆流产组和正常早孕组,且先兆流产组低于正常早孕组(P<0.05)。经分析,超声及miR-200c、PAPP-A水平联合诊断孕妇先兆流产特异度高于各指标单独诊断,对异位妊娠诊断的特异度及阳性预测值高于各指标单独诊断。结论:血清miR-200c和PAPP-A水平结合经阴道超声检查,能有效地用于鉴别诊断先兆流产和异位妊娠,提高诊断的准确率和特异度,具有较高的临床应用潜力。

血清miR-200c表达水平与复发性卵巢癌的相关性及临床意义

目的分析血清miR-200c表达水平与上皮性卵巢癌(EOC)患者治疗后复发的关系。方法选取2019年6月至2020年6月昆明医科大学第三附属医院收治的160例EOC患者作为研究对象,随访2年,有104例复发。调查患者的基线资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测患者血清miR-200c的表达水平,采用单因素分析患者治疗后复发与血清miR-200c的表达水平和基线资料的相关性,多因素Logistic回归分析影响患者复发的独立危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-200c预测EOC患者治疗后复发的效能。结果单因素分析显示,雌激素受体、孕激素受体、淋巴结转移、血清糖类抗原125(CA125)和人附睾蛋白4(HE4)的水平与EOC患者治疗后复发呈正相关,血清miR-200c水平与EOC患者治疗后复发呈负相关(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,血清CA125高表达(OR>1,P<0.05)、miR-200c低表达(OR<1,P<0.05)是EOC患者术后复发的独立危险因素;ROC曲线结果显示,血清CA125、miR-200c水平单独及联合预测EOC患者治疗后复发的曲线下面积分别为0.915、0.954、0.993,血清miR-200c的预测效能优于CA125,联合预测效能优于单项指标。结论miR-200c是提示EOC细胞侵袭性的分子标志物,血清miR-200c表达水平的降低会增加EOC患者治疗后复发的风险,可作为潜在的癌症复发预测指标和治疗靶点。

miR-200c通过抑制RhoA/ROCK通路延缓皮肤创伤愈合进程

目的探究miR-200c在皮肤创伤愈合中的作用及其调控机制。方法构建SD大鼠背部全层皮肤创伤模型,将创伤后大鼠分为agomir-NC组、miR-200c agomir组、sh-NC组和sh-RhoA组。采用qRT-PCR检测创面组织中miR-200c表达,Western blot检测创面组织中MMP-9、N-cadherin、E-cadherin和RhoA蛋白表达。创伤后第1,7,14天计算大鼠创面愈合率。采用双荧光素酶报告实验分析miR-200c和RhoA靶向关系。将人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞分为inhibitor-NC组、miR-200c inhibitor组、miR-200c inhibitor+sh-NC组和miR-200c inhibitor+sh-RhoA组。采用EdU法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移,qRT-PCR检测HaCaT细胞中miR-200c表达,Western blot检测HaCaT细胞中MMP-9、N-cadherin、E-cadherin、RhoA和ROCK蛋白表达。结果与正常皮肤比较,创面组织中miR-200c表达降低(P<0.01),RhoA表达升高(P<0.01)。miR-200c与RhoA 3′UTR存在靶向结合关系。与agomir-NC组比较,miR-200c agomir组大鼠创面愈合率以及MMP-9、N-cadherin、RhoA和ROCK蛋白表达均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与sh-NC组比较,sh-RhoA组大鼠创面愈合率以及MMP-9、N-cadherin、RhoA和ROCK蛋白表达均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。与inhibitor-NC组比较,miR-200c inhibitor组HaCaT细胞增殖水平、细胞迁移率以及MMP-9和N-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05);与miR-200c inhibitor+sh-NC组比较,miR-200c inhibitor+sh-RhoA组HaCaT细胞增殖水平、细胞迁移率以及MMP-9和N-cadherin蛋白表达均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。结论miR-200c靶向RhoA,过表达miR-200c可以通过调控RhoA/ROCK通路抑制皮肤创伤愈合的再上皮化过程,进而延缓皮肤创伤愈合进程。

miR-200c靶向ZEB1调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡

目的探究miR-200c对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法利用RT-qPCR检测52例宫颈癌组织及癌旁组织中miR-200c的表达水平,使用miR-200c模拟物或抑制物转染宫颈癌细胞系,RT-qPCR验证转染效率后,使用CCK8检测转染细胞的增殖水平,流式细胞术检测转染细胞的凋亡水平;生物信息学预测miR-200c的靶基因,荧光素酶报告基因验证其靶向关系;RT-qPCR检测癌组织中靶基因的表达水平,Pearson相关性分析miR-200c和靶基因的表达关系;RT-qPCR和蛋白质印迹检测转染靶基因siRNA或质粒细胞的增殖和凋亡水平。结果宫颈癌组织中miR-200c的表达显著低于癌旁组织,转染miR-200c模拟物的HT3细胞增殖水平显著降低,凋亡水平显著增加,而转染miR-200c抑制物的HeLa细胞增殖水平显著增加,凋亡水平显著降低;荧光素酶报告基因实验证实ZEB1是miR-200c的指标靶标,miR-200c模拟物显著降低ZEB1表达,而抑制物则发挥相反效应;宫颈癌组织中ZEB1的表达显著高于癌旁组织,且其表达与miR-200c呈显著负相关关系;敲低ZEB1显著抑制HT3的增殖水平,促进其凋亡,而过表达ZEB1则发挥相反效应。结论miR-200c通过靶向抑制ZEB1表达调控宫颈癌细胞的增殖与凋亡,从而参与宫颈癌的发生发展。

miR-200b、miR-200c靶向肝细胞生长因子抑制结直肠癌细胞

目的研究miR-200b、miR-200c对肝细胞生长因子进行靶向调节抑制结直肠癌细胞增殖的机制。方法采用生物信息学软件预测和验证miR-200b、miR-200c靶基因,分析miR-200b、miR-200c过表达抑制HGF表达,并分析miR-200b、miR-200c在体外影响结直肠癌细胞增殖活性的情况。结果培养1d、2d、3d,阴性对照模拟物的结直肠癌细胞增殖活性均高于miR-200b模拟物、miR-200c模拟物、miR-200b/c模拟物(P<0.05),阴性对照抑制剂的结直肠癌细胞增殖活性均低于miR-200b抑制剂、miR-200c抑制剂、miR-200b/c抑制剂(P<0.05),miR-200b模拟物、miR-200c模拟物的结直肠癌细胞增殖活性均高于miR-200b/c模拟物(P<0.05),miR-200b抑制剂、miR-200c抑制剂的结直肠癌细胞增殖活性均低于miR-200b/c抑制剂(P<0.05)。结论miR-200b、miR-200c对肝细胞生长因子进行靶向调节抑制结直肠癌细胞增殖,可以作为潜在治疗靶点。

妊娠期糖尿病视网膜病变患者血清miR-200c-3p、 miR-20b-5p表达水平及检测临床意义

目的:探讨妊娠期糖尿病视网膜病变(DR)患者血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平变化及检测临床意义。方法:选择妊娠期糖尿病孕妇80例(GDM组)和DR孕妇75例(DR组),正常妊娠期女性95例(对照组)。采用qRT-PCR法对受试者血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平进行测定,采用全自动生化分析仪对受试者低密度脂胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)进行测定,采用血糖检测仪对受试者空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 hPG)进行测定。结果:GDM组、DR组患者FPG、2 hPG、LDL-C、TG、TC、miR-200c-3p、miR-20b-5p值显著高于对照组(均P<0.05);DR组患者FPG、2 hPG、LDL-C、TG、TC、miR-200c-3p、miR-20b-5p值显著高于GDM组(均P<0.05);随着病情严重程度的增加,DR组患者miR-200c-3p、miR-20b-5p水平显著升高(均P<0.05);预后不良组DR患者FPG、2 hPG、LDL-C、TG、TC、miR-200c-3p、miR-20b-5p值显著高于预后良好组(均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平升高为DR患者发生预后不良的危险因素;ROC曲线结果显示,血清miR-200c-3p、miR-20b-5p、两者联合诊断DR患者不良预后曲线下面积(AUC)为0.927(95%CI:0.843~0.974)、0.848(95%CI:0.746~0.920)、0.985(95%CI:0.924~0.999)。结论:DR患者血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平升高,对DR不良预后具有一定的预测价值。

上调miR-200c-5p的表达抑制人结直肠癌细胞系SW480增殖

目的探讨miR-200c-5p对人结直肠癌细胞系SW480恶性增殖的影响。方法将miR-200c-5p模拟物/抑制剂及阴性对照分别瞬时转染人结直肠癌细胞系SW480。通过qPCR检测miR-200c-5p的表达,利用CCK-8法和平板克隆形成试验检测miR-200c-5p对结直肠癌细胞增殖活力和克隆形成能力的影响。使用生物信息学方法分析miR-200c-5p在结直肠癌中的差异靶基因和相关通路。结果瞬时转染miR-200c-5p模拟物/抑制剂成功高/低表达miR-200c-5p(P<0.05);高表达miR-200c-5p细胞增殖活力降低,低表达则相反(P<0.05);高表达miR-200c-5p的细胞克隆形成率低于对照组细胞,低表达则相反(P<0.05);miR-200c-5p的靶基因CXCL10在结直肠癌细胞中显著上调,C2orf72、ZC3H12C和DST显著下调,miR-200c-5p显著相关的KEGG通路为“melanoma”、“microRNAs in cancer”和“bladder cancer”。结论miR-200c-5p抑制人结直肠癌细胞系SW480的增殖及克隆形成,与结直肠癌的发生、发展相关。

外周血miR-200C、miR-101和CA-724联合检测对胃癌的诊断价值

目的:探讨外周血miR-200C、miR-101和糖类抗原-724(CA-724)联合检测对胃癌的诊断价值。方法:选取112例高度疑似胃癌患者为研究对象,根据病理检查结果分为胃癌组(n=69)和良性组(n=43);胃癌组患者再根据临床分期分为早期组(n=28)和晚期组(n=41),根据是否淋巴结转移分为转移组(n=43)和无转移组(n=26)。比较各组患者miR-200C、miR-101、CA-724水平,分析其对胃癌的诊断价值。结果:胃癌组患者miR-200C、miR-101低于良性组,CA-724高于良性组(P<0.05);早期组患者miR-200C、miR-101均高于晚期组(P<0.05),CA-724均低于晚期组(P<0.05);无转移组患者miR-200C、miR-101均高于转移组(P<0.05),CA-724低于转移组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-200C、miR-101、CA-724单独及三者联合诊断胃癌曲线下面积(AUC)分别为0.903、0.889、0.965、0.990,三者联合检测诊断的价值高于各指标单独检测(P<0.05)。结论:外周血miR-200C、miR-101在胃癌患者血液中表达呈下降趋势,CA-724则与之相反,三者联合检测对胃癌诊断价值较高。

上皮性卵巢癌患者血清外泌体miR-200c与组织NRP1表达、辅助化疗反应及预后的关系

目的:探讨上皮性卵巢癌(EOC)患者血清外泌体微小RNA(miR)-200c与组织神经纤毛蛋白1(NRP1)表达、化疗反应及预后的关系。方法:纳入2018年2月至2022年10月期间在本院接受初级减瘤手术和辅助化疗的135例EOC患者,另外纳入30例良性肿瘤患者作为对照。术前3 d采集患者血清样本,提取并纯化血清外泌体,通过实时荧光定量PCR法检测血清外泌体miR-200c表达水平。术中收集135例EOC癌组织、48例癌旁正常组织和30例良性肿瘤组织样本,通过免疫组织化学法评估组织NRP1蛋白表达。118例患者术后完成至少6个疗程的标准化疗方案,化疗完成后>6个月无复发视为化疗敏感。化疗耐药定义为原发性化疗难治性患者或化疗完成后≤6个月复发。结果:EOC组织中NRP1蛋白阳性表达率高于癌旁正常卵巢组织和良性肿瘤组织(P<0.001)。与良性肿瘤患者相比,EOC患者血清外泌体miR-200c表达水平显著降低(P<0.001)。血清外泌体miR-200c水平可良好地区分EOC患者和良性肿瘤患者,ROC曲线下面积(AUC)为0.955(95%CI 0.921~0.989)。EOC患者血清外泌体miR-200c水平与组织NRP1表达呈负相关(P<0.001)。血清外泌体miR-200c表达水平在化疗耐药组患者中更低(P<0.001),其预测EOC患者化疗反应的AUC为0.846(95%CI 0.769~0.924)。Cox回归和Kaplan-Meier预后分析显示,血清外泌体miR-200c低表达是导致EOC患者更短总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)的独立危险因素(P<0.05)。结论:血清外泌体miR-200c低表达与组织NRP1高表达、化疗耐药及预后不良有关,有希望作为术前预测EOC化疗反应和预后的生物标志物。

miR-200c在子宫内膜癌组织中的表达及与ZEB2蛋白的相关性

目的:探讨miR-200c在子宫内膜癌组织中的表达及与ZEB2的相关性。方法:选取113例子宫内膜癌组织和癌旁组织标本,40例正常子宫内膜癌组织作为对照组,检测组织中miR-200c表达量,以及ZEB2基因和蛋白表达量,利用反义寡核苷酸技术抑制子宫内膜癌RL95-2细胞株中miR-200c表达,检测其对细胞侵袭力的影响,以及细胞中ZEB2基因和蛋白表达。结果:子宫内膜癌组织中miR-200c表达量、ZEB2基因和蛋白表达量均高于癌旁组织和对照组(P<0.05);反义miR-200c转染组穿膜细胞数少于阴性对照组和脂质体组(P<0.05);反义miR-200c转染组细胞中ZEB2基因和蛋白表达量均低于阴性对照组和脂质体组(P<0.05)。结论 :miR-200c在子宫内膜癌组织中呈高表达,可能是通过调控ZEB2而促进肿瘤细胞的浸润和转移。

食管鳞癌中微小RNA miR-200c的表达及其意义

目的检测食管鳞癌中微小RNA miR-200c的表达,探讨其与肿瘤发展和分期的关系。方法应用实时荧光定量PCR方法检测76例各类分期分型食管鳞癌和配对癌旁组织中miR-200c的表达,分析其表达与肿瘤临床分期和病理分型的关系。结果食管鳞癌组织与癌旁组织比较,miR-200c的表达显著减少(P<0.01);miR-200c的表达在中晚期(III、IV期)食管鳞癌组织较早中期(Ⅰ、Ⅱ)食管鳞癌组织降低更为显著(P<0.01)。结论 miR-200c在食管鳞癌发生发展过程中表达有明显降低,其表达水平可作为潜在的食管鳞癌临床分期分级和预后的指标。

miR-200c阻滞转化生长因子-β1在腹膜后成纤维细胞增殖和迁移侵袭中的作用

目的:阐明miR-200c对腹膜后成纤维细胞增殖的影响,并分析其分子机制,为抑制腹膜后纤维化提供理论依据。方法:收集36例人腹膜后组织,原代培养成纤维细胞,以5 ng/ml TGF-β1刺激者为TGF-β1组,pc DNA3.1-miR-200c转染成纤维细胞,再给予5 ng/ml TGF-β1刺激者为miR-200c组,仅以pc DNA3.1质粒转染者为pc DNA3.1质粒组,正常培养的成纤维细胞为对照组。分别以噻唑蓝(MTT)细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell细胞小室迁移实验检测成纤维细胞增殖和迁移能力,并以ELISA实验检测各组细胞裂解液中Akt蛋白的含量。结果:miR-200c组成纤维细胞的增殖OD值明显比TGF-β1组降低(P<0.01);与TGF-β1组相比,miR-200c组细胞迁移率明显降低(P<0.01);miR-200c组Akt蛋白的含量比TGF-β1组明显降低(P<0.01)。结论:miR-200c下调Akt通路而抑制TGF-β1对成纤维细胞的增殖或迁移效果,对抑制腹膜纤维化具有重要意义。

胃癌中DNA甲基化对miR-200c 141表达影响的研究

目的:探讨胃癌组织中miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c/141表达水平和临床病理特征的相关性。方法:运用实时定量PCR(qRT-PCR)和BS-MSP方法检测胃癌组织和癌旁组织中miR-200c/141CpG岛的表达与其基因甲基化水平。统计学分析miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c/141水平和临床病理特征的关系。结果:miR-200c/141CpG岛的甲基化水平在胃癌组织中显著升高,miR-200c和miR-141的水平显著降低,miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c和miR-141的水平呈负相关。结论:胃癌组织中升高的miR-200c/141CpG岛的甲基化水平诱导miR-200c和miR-141表达降低。

miR-200c在胃癌中的表达水平与患者临床病理特征的关系

目的:探讨miR-200c在胃癌组织中的表达水平与胃癌患者临床病理特征及无病生存期(diease free survial,DFS)的关系。方法:收集河北医科大学第四医院普外科2012年5月至2013年1月64例胃癌手术切除的标本及相关临床资料,采用实时荧光定量PCR技术检测miR-200c在胃癌组织和配对癌旁非癌组织中的表达。回顾性分析miR-200c表达水平与胃癌患者的临床病理特征及DFS相关性。结果:胃癌组织中miR-200c的表达水平显著低于癌旁非癌组织(3.29 vs 5.91,P<0.01)。miR-200c的表达水平与肿瘤TNM分期、浸润深度、转移和脉管瘤栓呈显著负相关(均P<0.01)。miR-200c高表达组患者中位DFS明显长于低表达组患者(22.0 vs 13.5个月,P<0.01),其表达水平与患者DFS呈正相关(P<0.01)。结论:miR-200c在胃癌组织中低表达,其表达水平与肿瘤TNM分期、肿瘤浸润深度和脉管瘤栓呈负相关,与DFS呈正相关,在胃癌的发生发展及预后中具有重要作用。

MiR-200c与脏器纤维化的研究进展

MiR-200c在肺、肝、肾、腹膜、皮肤纤维化及翼状胬肉中异常表达。多项研究表明miR-200c与脏器纤维化密切相关,miR-200c主要通过调控TGF-β介导的上皮间质转化参与调控纤维化的发生发展;血清中miR-200c的表达异常可能为肺纤维化的早期诊断提供依据,实验表明miRNA mimics,miRNA agomir,miRNA抑制剂是纤维化潜在的靶标治疗工具。作者对miR-200c的表达、调控及其在脏器纤维化的诊断、治疗和预后判断中的作用进行了综述。

miR-200c增强肺癌A549细胞对紫杉醇及吉非替尼的敏感度及相关机制

目的观察上调肺癌A549细胞中mi R-200c的表达对紫杉醇、吉非替尼敏感度及两药联合作用的影响及其作用机制。方法用mi R-200c转染肺癌A549细胞,Real-time PCR检测mi R-200c表达,MTT法和流式细胞仪检测转染mi R-200c后A549细胞对紫杉醇、吉非替尼单药及两药联合的敏感度和细胞凋亡的影响,Western blot检测TUBB3蛋白、EGFR、Akt、MAPK磷酸化蛋白及总蛋白的表达。结果上调mi R-200c表达可增强A549细胞对紫杉醇及吉非替尼敏感度并促进细胞凋亡,对两药联合无明显作用。Western blot显示转染mi R-200c联合紫杉醇可下调A549细胞中TUBB3蛋白表达,联合吉非替尼下调EGFR和Akt磷酸化蛋白表达,与两药联合对EGFR和Akt磷酸化蛋白表达无明显影响。结论mi R-200c可增强肺癌A549细胞对紫杉醇、吉非替尼的敏感度,可能分别与抑制TUBB3表达、抑制EGFR和Akt磷酸化蛋白表达有关,而对两药联合无协同抗肿瘤作用。

miR-200c对乳腺癌BT549细胞迁移及Slug表达的作用

目的:结合对乳腺癌细胞系BT549迁移能力的研究,探讨转染miR-200c对Slug表达的作用。方法:设计miR-200c模拟物,转染具有高转移性的乳腺癌细胞系BT549,通过Transwell迁移试验、划痕实验,观察转染miR-200c后对乳腺癌细胞系BT549迁移能力的影响;利用Real-time PCR检测Slug和E-钙黏连蛋白mRNA的表达水平;利用Western blot检测Slug蛋白的表达水平。结果:Real-time PCR和Western blot结果显示,miR-200c转染组Slug表达水平被有效抑制(P<0.05)。与对照组相比,miR-200c转染组的BT549细胞迁移能力明显下降(P<0.05)。结论:在乳腺癌细胞系BT549中,miR-200c可以通过抑制Slug的表达进而抑制上皮间质转化,最终导致细胞迁移能力下降。

miR-200c对舌癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-200c对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响。方法将miR-200c的模拟物通过脂质体转染到人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞内,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率、Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和Bcl-2蛋白的表达。结果与对照组相比,miR-200c模拟物20、40、80nmol/L组的Tca8113细胞生长受到明显抑制,差异有统计学意义(P<0.05),miR-200c模拟物的浓度越大,作用时间越长,抑制效果越明显(P<0.05);转染miR-200c模拟物48h后,Tca8113细胞停滞于G0/G1期,细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot证明20、40、80nmol/L组Bcl-2蛋白表达量明显低于对照组,而Caspase-3蛋白表达量明显高于对照组(P<0.05)。结论 miR-200c过表达可抑制舌癌Tca8113细胞增殖并诱导细胞凋亡。

海七鳃鳗pma-miR-200c-3p对斑马鱼心脏发育的作用研究

为研究海七鳃鳗Petromyzon marinus pma-miR-200c-3p在心脏发育过程中的生物学功能,采用显微注射技术,将pma-miR-200c-3p模拟体注射到斑马鱼Danio rerio胚胎,过表达pma-miR-200c-3p后,使用qRT-PCR及Western blot法检测了一些与心脏发育相关的标志性基因的表达水平,以及BMP/Smad通路重要基因蛋白水平的变化,并利用生物信息学预测、GFP荧光表达分析了pma-miR-200c-3p的生物学作用。结果表明:过表达pma-miR-200c-3p的斑马鱼胚胎中,与心脏发育相关的标志性bmp4、bmp5、smad1、gata5、tbx2b和notch1a基因的表达水平极显著上调(P<0.01),同时BMP/Smad通路中BMP4、Smad1、GATA5蛋白表达水平也明显升高;细胞试验表明,cdx1b基因可能是pma-miR-200c-3p的一个靶基因。研究表明,pma-miR-200c-3p可能通过抑制cdx1b基因的表达,参与BMP/Smad通路以促进心脏发育。