lncRNA CASC9和miR⁃758⁃3p在肝细胞肝癌血清中的表达及诊断价值

目的检测长链非编码RNA肿瘤易感候选者9(lncRNA CASC9)、微小RNA⁃758⁃3p(miR⁃758⁃3p)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)血清中的表达及诊断价值。方法选取2018年6月至2020年2月于镇江市第三人民医院收治的HCC患者72例作为HCC组,另选取健康体检人员30例作为健康对照组。starBase v2.0在线软件预测lncRNA CASC9与miR⁃758⁃3p的结合位点;检测受试者血清中lncRNA CASC9、miR⁃758⁃3p的表达,分析两者与HCC患者临床病理参数的关系,分析两者和甲胎蛋白(AFP)对HCC的诊断价值。结果StarBase v2.0软件结果显示,lncRNA CASC9与miR⁃758⁃3p存在潜在的互补结合位点。与健康对照组相比,lncRNA CASC9在HCC患者血清中的表达升高(P<0.05),miR⁃758⁃3p在HCC患者血清中的表达降低(P<0.05)。HCC患者血清中lncRNA CASC9、miR⁃758⁃3p的表达与肝硬化、淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05)。ROC分析显示:lncRNA CASC9、miR⁃758⁃3p和AFP对HCC均有一定的诊断价值。三者联合应用的诊断价值较高,ROC⁃AUC为0.848(95%CI:0.767~0.937)。结论血清lncRNA CASC9和miR⁃758⁃3p有可能成为HCC早期诊断的血清学标志物。

miRNA-758-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究微小RNA(microRNA,miR)-758-3p在口腔鳞状细胞癌(OSCC)的表达及对OSCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测正常牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGE)及OSCC细胞系(CAL27、SCC9和SCC25)中miR-758-3p的表达水平。将miR-758-3p模拟物转染至CAL27细胞中,构建过表达miR-758-3p细胞模型。采用WST-1检测细胞增殖能力;Transwell法检测迁移和侵袭的影响;Western blot检测过表达miR-758-3p对CAL27细胞中MMP2及MMP9蛋白水平的影响。结果与HGE细胞比较,OSCC细胞系CAL27、SCC9和SCC15中miR-758-3p表达下调(P<0.05),其中CAL27细胞miR-758-3p表达量最低。miR-758-3p模拟物转染后,CAL27细胞中miR-758-3p的表达水平显著增高(P<0.05)。miR-758-3p的过表达能显著抑制CAL27的细胞增殖、(P<0.05);过表达miR-758-3p能显著抑制CAL27细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),明显抑制MMP2和MMP9蛋白的表达(P<0.05)。结论miR-758-3p在OSCC细胞CAL27中呈较低表达,过表达miR-758-3p可以显著抑制CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭。

食管癌组织miR-758-3p、NUSAP1表达变化及其与临床病理特征和预后的关系

目的探讨食管癌组织微小核糖核酸-758-3p(miR-758-3p)、核仁纺锤体相关蛋白1(NUSAP1)表达变化及其与临床病理特征和预后的关系。方法选择食管癌患者97例,取手术切除的食管癌组织及其癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-758-3p、NUSAP1 mRNA表达。通过TargetScan数据库预测miR-758-3p与NUSAP1的结合位点,分析食管癌组织miR-758-3p表达与NUSAP1 mRNA表达的关系以及二者表达与临床病理特征和预后的关系。结果与癌旁正常组织比较,食管癌组织miR-758-3p相对表达量降低,NUSAP1 mRNA相对表达量升高(t分别为23.037、25.253,P均<0.05)。经TargetScan数据库预测,NUSAP1基因3′非翻译区583~589位点处存在miR-758-3p的结合位点。Pearson相关分析显示,食管癌组织miR-758-3p表达与NUSAP1 mRNA表达呈负相关(r=-0.732,P<0.01)。食管癌组织miR-758-3p、NUSAP1 mRNA表达与组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、病理类型、吸烟史、饮酒史、肿瘤最大径无关(P均>0.05)。以食管癌组织miR-758-3p、NUSAP1 mRNA相对表达量的均数为临界值,将患者分为miR-758-3p高表达者(≥0.64,47例)与miR-758-3p低表达者(<0.64,50例)、NUSAP1 mRNA高表达者(≥3.19,43例)与NUSAP1 mRNA低表达者(<3.19,54例)。生存分析发现,miR-758-3p高表达者3年累积生存率高于其低表达者,NUSAP1 mRNA高表达者3年累积生存率低于其低表达者(Log-rankχ^(2)分别为5.682、6.918,P均<0.05)。结论食管癌组织miR-758-3p低表达、NUSAP1 mRNA高表达,二者表达变化与组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移以及患者预后密切相关。

LncRNA DARS-AS1靶向miR-758-3p促进骨肉瘤细胞增殖并抑制凋亡

目的:探讨LncRNA DARS-AS1对骨肉瘤细胞增殖及凋亡的影响及其可能作用机制。方法:qRT-PCR法检测骨肉瘤组织、瘤旁组织、人成骨细胞hFOB 1.19、人骨肉瘤细胞Saos2、U2OS、HOS中LncRNA DARS-AS1、miR-758-3p的表达量;对Saos2细胞进行转染,根据不同转染物分为si-NC组、si-LncRNA DARS-AS1组、miR-NC组、miR-758-3p组、si-LncRNA DARS-AS1+anti-miR-NC组、si-LncRNA DARS-AS1+anti-miR-758-3p组;MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;双荧光素酶报告实验检测LncRNA DARS-AS1与miR-758-3p的靶向调控关系。结果:与瘤旁组织比较,骨肉瘤组织中LncRNA DARS-AS1的表达量升高(P<0.05),miR-758-3p的表达量降低(P<0.05);与hFOB 1.19细胞比较,Saos2、U2OS、HOS细胞中LncRNA DARS-AS1的表达量升高(P<0.05),miR-758-3p的表达量降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-LncRNA DARS-AS1组细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-758-3p组细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);LncRNA DARS-AS1能够靶向结合miR-758-3p;si-LncRNA DARS-AS1+anti-miR-758-3p组与si-LncRNA DARS-AS1+anti-miR-NC组比较,细胞活力升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:干扰LncRNA DARS-AS1表达可通过靶向调控miR-758-3p表达而抑制骨肉瘤细胞增殖及诱导细胞凋亡。

异甘草素通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移的机制研究

目的 肺鳞癌(Lung squamous cell carcinoma,LUSC)是全世界范围内高频率发生的恶性肿瘤。最近的研究表明,异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)在肿瘤增殖和转移中发挥抗肿瘤活性。因此,研究旨在探讨ISL在抗LUSC转移中的作用机制。方法 利用梯度浓度ISL处理LUSC细胞,探究ISL在LUSC细胞增殖、迁移和侵袭中的抗癌特性。随后,利用生物信息学手段探寻了长链非编码RNA(Long non-coding RNAs, lncRNA)MIR22HG/miR-24-3p/Fas配体基因(Fas ligand Gene,FASLG)之间可能的互作关系。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测LUSC细胞中lncRNA MIR22HG、miR-24-3p、FASLG的表达,细胞计数盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、克隆形成、划痕愈合和Transwell实验分别检测细胞活力、增殖、迁移和侵袭。蛋白质免疫印迹法(Western blot, WB)检测上皮间充质转换(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)和转移相关蛋白的表达。RNA免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation, RIP)实验和双萤光素酶实验验证lncRNA MIR22HG与miR-24-3p、miR-24-3p与FASLG的结合关系。结果 ISL可以显著抑制LUSC细胞增殖、迁移和侵袭。生信分析及临床样本分析发现lncRNA MIR22HG在LUSC中低表达,ISL可以促进lncRNA MIR22HG的表达,抑制LUSC细胞的恶性行为。此外,lncRNA MIR22HG可以海绵吸附miR-24-3p进而调节FASLG的表达。miR-24-3p在LUSC中上调表达,FASLG在LUSC中下调表达。过表达FASLG可以逆转miR-24-3p过表达对LUSC增殖、转移以及EMT进程的促进作用。结论 这些结果表明,ISL通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移,表明ISL有潜力作为治疗LUSC的新型药物。

lncRNA MIR4435-2HG靶向miR-376a-3p调控胆管癌细胞生物学行为的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MIR4435-2HG(MIR4435-2HG)对胆管癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其对微小RNA-376a-3p(miR-376a-3p)的调控作用。方法 qRT-PCR法检测人肝内胆管上皮细胞HIBEpic与人胆管癌细胞RBE中MIR4435-2HG、miR-376a-3p的表达。将si-NC、si-MIR4435-2HG、miR-NC、miR-376a-3p mimics、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-NC、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-376a-3p分别转染至RBE细胞,作为si-NC组、si-MIR4435-2HG组、miR-NC组、miR-376a-3p组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组;采用MTT法、Transwell小室法及流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验验证MIR4435-2HG与miR-376a-3p的靶向关系。Western blot检测相关蛋白表达。结果 RBE细胞中MIR4435-2HG表达量升高(P<0.05),miR-376a-3p表达量降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MIR4435-2HG组MIR4435-2HG表达、细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率升高(P<0.05)。MIR4435-2HG可靶向调控miR-376a-3p;与si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组比较,si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论 敲低MIR4435-2HG可通过靶向调控miR-376a-3p进而抑制RBE细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导其凋亡。

长链非编码RNAMIR22HG和微RNA-9-3p在骨关节炎病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)MIR22HG和微RNA-9-3p(miR-9-3p)在骨关节炎(OA)病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性。方法 选取2020年10月至2021年10月在南充市中医医院确诊为OA的病人120例,作为OA组,60例体检健康人群作为对照组;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平;Pearson法分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的相关性以及二者与视觉模拟(VAS)评分、美国特种外科医院膝关节评分(HSS)以及西安大略和麦马斯特大学骨关节炎指数可视化量表(WOMAC)评分的相关性;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p对OA的诊断价值。结果 OA组的血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著高于对照组(1.48±0.25比1.01±0.22),miR-9-3p的表达水平显著低于对照组(0.72±0.13比1.05±0.12)(P<0.05);相关性分析显示,lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平呈负相关关系(P<0.05);KLⅣ级血清lncRNA MIR22HG的表达水平、VAS评分、WOMAC评分显著高于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著高于KLⅡ级(P<0.05),KLⅣ级血清miR-9-3p的表达水平、HSS评分显著低于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著低于KLⅡ级(P<0.05);OA病人lncRNA MIR22HG的表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈正相关,与HSS评分呈负相关(P<0.05);miR-9-3p表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈负相关,与HSS评分呈正相关(P<0.05);二者联合诊断的AUC高于lncRNA MIR22HG、miR-9-3p单独诊断的AUC值(Z=2.22,P=0.012;Z=1.43,P=0.025)。结论OA病人血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著升高,miR-9-3p表达水平显著降低,二者与OA病情严重程度密切相关,且对OA具有一定的诊断价值。

LncRNA CRNDE调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨LncRNA结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法将人肺泡上皮细胞A549分为CK组、LPS组、LPS+si⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE组、LPS+si⁃CRNDE+inhibitor NC组、LPS+si⁃CRNDE+miR⁃338⁃3p inhibitor组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃KLF6组;qRT⁃PCR检测各组细胞CRNDE、miR⁃338⁃3p和KLF6表达水平;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA试剂盒检测TNF⁃α、IL⁃10和IL⁃1β水平;商品化试剂盒分析MDA、GSH⁃Px、SOD水平;Western blot检测细胞中KLF6、Cleaved⁃caspase⁃3、Bax、Bcl⁃2蛋白表达量。双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃338⁃3p与RNDE和KLF6的关系。结果与CK组相比,LPS组和LPS+si⁃NC组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著升高,miR⁃338⁃3p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著降低(P<0.05);与LPS+si⁃NC组相比,LPS+si⁃CRNDE组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著降低,miR⁃150⁃5p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著升高(P<0.05);干扰miR⁃338⁃3p表达或过表达KLF6均可降低下调CRNDE表达改善LPS诱导A549细胞损伤的作用(P<0.05)。结论下调CRNDE可调控miR⁃338⁃3p/KLF6轴减轻LPS诱导的A549细胞损伤。

重度子痫前期患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p及杀伤细胞抑制性受体的表达意义

目的探究重度子痫前期(PE)患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p及杀伤细胞抑制性受体(KIR)表达水平及临床意义。方法回顾性分析2019年3月—2022年8月于合肥市第一人民医院南区就诊143例PE患者临床资料。根据PE严重程度将患者分为重度PE组(n=85)和轻度PE组(n=58),另选取同期正常妊娠孕妇65例为对照组。比较3组及PE患者中不同妊娠结局患者的外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR表达水平;受试者工作特征曲线(ROC)评估miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR对重度PE的诊断效能;Logistic回归分析miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR与PE患者妊娠结局的关系。结果与对照组比较,轻度PE组、重度PE组外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR表达水平升高,且重度PE组高于轻度PE组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR诊断重度PE的AUC值分别为0.836、0.835和0.879(P<0.05),最佳阈值分别为1.43、1.70和52.13μg/L。各组不良妊娠结局发生率比较差异有统计学意义(P<0.05),且重度PE组最高,轻度PE组高于对照组(P<0.05)。轻度及重度PE患者中,结局不良患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR水平均高于结局良好者(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,重度PE、miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR与PE患者不良妊娠结局呈正相关(P<0.05)。结论PE患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR表达水平偏高,并与病情严重程度相关,可能会增加PE患者不良妊娠结局风险。检测外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR水平或可为临床重度PE的诊断提供参考。

LncRNA MIR22HG调节miR-132-3p/TLR2轴对急性心肌梗死小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响

目的:探讨长链非编码RNA miR-22宿主基因(lncRNA MIR22HG)调节miR-132-3p/Toll样受体2(TLR2)轴对急性心肌梗死(AMI)小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响。方法:取C57BL/6J小鼠随机分为sham组、AMI组、AMI+sh-NC组、AMI+shMIR22HG组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组,每组10只,除去sham组外,其它组都进行冠状动脉左前降支结扎,sham组只开胸不结扎冠状动脉,其中AMI+sh-NC组、AMI+sh-MIR22HG组、AMI+shMIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组小鼠分别相对应的对尾静脉注射sh-NC、sh-MIR22HG、sh-MIR22HG+antagomir-NC、sh-MIR22HG+antagomir-132-3p。超声心动图评估小鼠心室重构和心脏功能;HE染色和Masson染色观察心肌组织病理学变化及纤维化;RT-qPCR检测心肌组织MIR22HG、miR-132-3p表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;Western blotting检测心肌组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、激活型半胱氨酸蛋白酶-3(cleved caspase-3)/半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、collagenⅢ和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证MIR22HG和miR-132-3p、miR-132-3p和TLR2的关系。结果:与sham组比较,AMI组小鼠心功能显著降低,心肌组织损伤、心肌纤维化加重,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著升高,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与AMI+sh-NC组比较,AMI+sh-MIR22HG组小鼠心功能改善,心肌组织损伤、心肌纤维化减轻,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著降低,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达上升(P<0.05);下调miR-132-3p减弱了敲减MIR22HG对心肌组织的保护作用;双荧光素酶报告基因实验结果显示,MIR22HG靶向调控miR-132-3p表达,miR-132-3p靶向负调控TLR2表达。结论:抑制MIR22HG表达可通过调节miR-132-3p/TLR2轴抑制AMI小鼠心肌细胞凋亡,改善小鼠心室重构。

CircSMC3调节miR-582-5p/MCL1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:探讨环状非编码RNA(CircRNA)SMC3通过调节微小RNA(miR)-582-5p/髓细胞白血病基因1(MCL1)轴对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:qRT-PCR检测4种GC细胞系及正常胃上皮细胞系GES-1中SMC3、miR-582-5p、MCL1mRNA的表达水平。将SGC-7901细胞分为对照组、si-NC组、si-SMC3组、mimics NC组、miR-582-5p组、si-SMC3+inhibitor NC组、si-SMC3+miR-582-5p inhibitor组、miR-582-5p+pcDNA3.1组、miR-582-5p+MCL1组。检测各细胞凋亡、增殖、迁移及相关蛋白表达的情况;验证miR-582-5p与SMC3、MCL1的靶向关系。结果:4种GC细胞系中SMC3、MCL1 mRNA表达均增加,miR-582-5p表达下降(P<0.05)。干扰SMC3、过表达miR-582-5p可以抑制SGC-7901细胞增殖、迁移及相关蛋白、表达(P<0.05);抑制miR-582-5p表达可逆转干扰SMC3对细胞的作用(P<0.05);上调MCL1可逆转过表达miR-582-5p细胞的作用(P<0.05)。结论:干扰SMC3可能通过调节miR-582-5p/MCL1轴,抑制SGC-7901细胞增殖、迁移,促进凋亡。

血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a与非小细胞肺癌射频消融治疗患者预后生存的关系

目的探究血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a与非小细胞肺癌(NSCLC)射频消融治疗患者预后生存的关系。方法选取2019年1月至2021年1月于河南省新乡市新乡和平医院行射频消融治疗的92例NSCLC患者,根据随访生存情况将患者分为生存组65例和死亡组27例,比较不同临床分期、不同临床疗效以及不同生存情况患者血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a水平差异,分析miR⁃28⁃3p、miR⁃23a与肺癌分期以及射频消融疗效的相关性,采用ROC曲线分析miR⁃28⁃3p、miR⁃23a预测患者生存的最佳截断值,采用COX比例风险模型以及Kaplan⁃Meier生存分析miR⁃28⁃3p、miR⁃23a与肺癌患者预后生存关系。结果不同分期患者血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a表达水平:Ⅰ期>Ⅱ期>Ⅲa期,差异有统计学意义(P<0.05);不同临床疗效患者血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a表达水平:局部进展>不完全消融>完全消融,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman分析结果显示,血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a与肺癌分期呈正相关,与射频消融疗效呈负相关(P<0.05);截至2023年2月,生存组和死亡组患者性别、年龄、组织病理类型、肿瘤位置、基础疾病比较差异无统计学意义(P>0.05),肿瘤分期及血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a比较差异有统计学意义(P<0.05),且死亡组血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a水平高于生存组,差异有统计学意义(P<0.05);ROC分析结果显示,血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a预测NSCLC患者生存的最佳截断值分别为10.18和1.03;COX分析结果显示,血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a高表达与NSCLC射频消融治疗患者预后不良相关(P<0.05);Kaplan⁃Meier生存分析显示,NSCLC射频消融治疗患者miR⁃28⁃3p、miR⁃23高、低表达患者间总生存期比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a与NSCLC频消融治疗患者肿瘤分期以及临床疗效相关,两指标可用于评估患者预后生存情况,值得推广应用。

miR⁃27b⁃3p通过靶向SSRP1调控骨肉瘤细胞的生长

目的:探究miR⁃27b⁃3p对骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞生长的影响及其潜在的分子机制。方法:①采用实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)分析miR⁃27b⁃3p在骨肉瘤细胞系中的表达;②CCK⁃8实验、集落形成实验及流式细胞术检测miR⁃27b⁃3p以及SSRP1对骨肉瘤细胞生长的影响;③使用在线数据库预测miR⁃27b⁃3p的靶基因并进行筛选,使用双荧光素报告酶实验测定miR⁃27b⁃3p与结构特异性识别蛋白1(structure⁃specific recognition protein⁃1,SSRP1)的关系;④干扰效率以及过表达效率使用Western blot实验验证。结果:①miR⁃27b⁃3p在骨肉瘤细胞和临床样本中低表达,过表达miR⁃27b⁃3p会抑制骨肉瘤细胞的生长;②生物信息学分析和双荧光素报告酶实验证实SSRP1为miR⁃27b⁃3p的靶基因,SSRP1表达受miR⁃27b⁃3p的直接调控;③干扰SSRP1的表达会抑制骨肉瘤细胞的增殖,促进凋亡;④过表达SSRP1会部分逆转miR⁃27b⁃3p对骨肉瘤细胞生长的抑制效应。结论:miR⁃27b⁃3p在骨肉瘤细胞中低表达,通过靶向SSRP1从而影响骨肉瘤细胞的生长。miR⁃27b⁃3p可能是骨肉瘤的一个潜在的分子靶点,靶向miR⁃27b⁃3p/SSRP1轴可能成为骨肉瘤治疗的新策略。

复发性阿弗他口腔溃疡患者唾液外泌体miR⁃142⁃5p、FOXO3表达的相关性研究

目的分析复发性阿弗他口腔溃疡(RAU)患者唾液外泌体miR⁃142⁃5p、叉头转录蛋白O亚族3(FOXO3)表达与免疫功能的相关性。方法收集2019年12月—2021年12月三亚中心医院/海南省第三人民医院口腔科收治RAU患者134例作为观察组,另选取同期健康志愿者134例作为健康对照组。收集受试者唾液后提取唾液外泌体,qRT⁃PCR分析样本中miR⁃142⁃5p、FOXO3 mRNA表达水平,流式细胞仪测定外周血CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)细胞比例,并计算CD4^(+)/CD8^(+)比值;比较miR⁃142⁃5p、FOXO3高、低表达亚组间RAU患者的疼痛指数、溃疡面积;Pearson法分析患者唾液外泌体miR⁃142⁃5p、FOXO3 mRNA水平之间及二者与CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)的相关性;绘制受试者工作特征曲线(ROC)评估miR⁃142⁃5p、FOXO3 mRNA表达水平预测RAU的诊断价值。结果与健康对照组比较,观察组患者唾液外泌体miR⁃142⁃5p表达水平、外周血CD3^(+)CD8^(+)细胞比例升高[t(χ^(2))/P=34.580/<0.001、6.889/<0.001],FOXO3 mRNA及蛋白表达水平、外周血CD3^(+)CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)细胞比值降低[t(χ^(2)/P=43.121/<0.001、37.692/<0.001、10.219/0.001、26.091/<0.001)]。与miR⁃142⁃5p低表达亚组比较,miR⁃142⁃5p高表达亚组患者疼痛指数升高、溃疡面积增大(t/P=3.880/<0.001、5.027/<0.001);与FOXO3高表达亚组比较,FOXO3低表达亚组患者疼痛指数升高、溃疡面积增大(t/P=4.711/<0.001、5.382/<0.001)。观察组患者唾液外泌体miR⁃142⁃5p与CD3^(+)CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)细胞比值呈负相关(P均<0.001),FOXO3 mRNA与CD3^(+)CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)细胞比值呈正相关(P均<0.001),miR⁃142⁃5p、FOXO3与CD3^(+)CD8^(+)细胞比值均无相关性(P>0.05)。绘制ROC曲线结果提示,miR⁃142⁃5p、FOXO3 mRNA及二者联合预测RAU复发的曲线下面积(AUC)分别为0.810、0.809、0.947,二者联合检测优于各自单独预测效能(Z=6.528、8.573,P均<0.001)。结论RAU患者唾液外泌体miR⁃142⁃5p处于高表达状态,FOXO3处于低表达状态,二者共同参与复发性口腔溃疡的免疫调控。

血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2水平在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨血清miR-141-3p、可溶性上皮钙黏蛋白(s E-cadherin)、环氧合酶-2(COX-2)水平在乳腺癌中的表达及与临床病理、细胞免疫的关系。方法选择2020年4月至2021年12月南阳市第二人民医院收治的乳腺癌患者50例进行研究,设为病例组;并选取同期入院的乳腺良性疾病患者50例设为对照组。采用酶联免疫分析两组患者miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2表达及与临床病理、细胞免疫之间的关系。结果病例组血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(t=24.400,8.229,26.195,P<0.01);病例组CD4+、CD4+/CD8+水平显著低于对照组,CD8+显著高于对照组,差异均有统计学意义(t=19.419,170.271,203.192,P<0.01);所有患者不同年龄、病理组织学类型与血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤最大径>4 cm、病理分级Ⅲ级~Ⅳ级、分化程度高分化程度、淋巴结转移血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2水平均明显高于肿瘤最大径≤4 cm、病理分级Ⅰ~Ⅱ级级、中低分化程度、淋巴结未转移患者,差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示,血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2与乳腺癌患者肿瘤最大径、病理分级、分化程度、淋巴结转移及CD8+之间均呈正相关,血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2与乳腺癌患者CD4+、CD4+/CD8+之间均呈负相关(P<0.05)。结论乳腺癌患者中血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2水平表达明显升高,与临床病理、细胞免疫之间关系密切,可能协同参与了乳腺癌的发生、发展,对乳腺癌患者预后的评估具有重要意义。

miR⁃30b⁃5p通过下调MKRN3表达抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR⁃30b⁃5p在食管癌细胞中的表达及对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响机制。方法收集2016年1月至2020年12月就诊于安徽省第二人民医院手术治疗的70例食管癌患者的肿瘤和癌旁组织,检测miR⁃30b⁃5p的表达水平。qRT⁃PCR检测食管癌细胞株中miR⁃30b⁃5p的表达水平。将miR⁃30b⁃5p mimics转染至TE⁃13和ECA109细胞中,检测转染后各组细胞中miR⁃30b⁃5p及MKRN3表达水平。根据细胞增殖实验,Transwell及裸鼠成瘤实验检测食管癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。双荧光素酶实验验证miR⁃30b⁃5p的靶基因。蛋白印迹实验探索miR⁃30b⁃5p对食管癌影响的分子机制。结果miR⁃30b⁃5p在食管癌细胞和食管癌组织中相较于正常上皮细胞和癌旁组织表达显著下降(P<0.05)。细胞增殖实验显示,miR⁃30b⁃5p mimics组增殖率显著低于NC组(P<0.05);Transwell实验结果显示,miR⁃30b⁃5p mimics组迁移率及侵袭率显著低于NC组(P<0.05);双荧光素酶实验显示MKRN3是miR⁃30b⁃5p的直接靶基因。Western blot检测JAK/STAT信号通路蛋白发现,miR⁃30b⁃5p mimics组蛋白低于NC组(P<0.05)。结论miR⁃30b⁃5p在食管癌中呈现低表达,miR⁃30b⁃5p通过下调MKRN3表达抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。

LncRNA MIR205HG靶向miR-299-3p调控肺癌细胞增殖、凋亡的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA MIR205HG(LncRNA MIR205HG)与微小RNA-299-3p(miR-299-3p)的相互关系及其影响肺癌细胞增殖、凋亡的分子机制。方法 检测肺癌组织和细胞中MIR205HG、miR-299-3p的表达。H1299细胞分为si-MIR205HG组、si-NC组、miR-299-3p组、miR-NC组、si-MIR205HG+anti-miR-299-3p组、si-MIR205HG+anti-miR-NC组。MIR205HG与miR-299-3p的相互作用;检测增殖、凋亡及蛋白表达。结果 肺癌组织和细胞系中MIR205HG表达水平升高(P<0.05),miR-299-3p表达水平降低(P<0.05)。MIR205HG能与miR-299-3p特异性结合,可调控miR-299-3p的表达。干扰MIR205HG表达或miR-299-3p过表达后可降低肺癌细胞增殖能力,促进细胞凋亡,且CyclinD1、p21表达降低,Bcl-2、Bax表达增高(P<0.05)。抑制miR-299-3p可逆转干扰MIR205HG表达对肺癌细胞增殖及凋亡的作用。结论 干扰MIR205HG表达可抑制肺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,其作用机制与负向调控miR-299-3p有关。

血清IL-17A、miR-342-3p与2型糖尿病肾病严重程度及预后的关系

目的探讨血清IL⁃17A、miR⁃342⁃3p与2型糖尿病肾病严重程度及预后的关系。方法选取2019年1月至2021年12月东方市人民医院内分泌科收治的119例2型糖尿病患者为研究对象。根据糖尿病肾病发生情况将患者分为对照组(单纯2型糖尿病,n=49)和糖尿病肾病组(发生糖尿病肾病,n=70),并根据白蛋白尿分期和CKD分期并将糖尿病肾病组患者分为G1A2组(n=12)、G2A2组(n=14)、G3A3组(n=17)、G4A3组(n=16)和G5A3组(n=11)等5个亚组。检测比较六组血清IL⁃17A、miR⁃342⁃3p水平,分析血清IL⁃17A、miR⁃342⁃3p水平与UACR和肾小球滤过率的关系。糖尿病肾病患者均随访至2022年11月30日,统计患者随访期间肾存活情况,并将患者分为肾存活组(n=49)和肾非存活组(n=21)。分析血清IL⁃17A、miR⁃342⁃3p水平对2型糖尿病肾病预后的影响及其对2型糖尿病肾病预后的预测效能。结果不同糖尿病肾病病情患者血清IL⁃17A、miR⁃342⁃3p水平比较:G5A3组<G4A3组<G3A3组<G2A2组<G1A2组<对照组,差异有统计学意义(F=9.158,38.244,均P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,患者血清IL⁃17A、miR⁃342⁃3p水平与UACR均呈负相关(r=-0.879,-0.883,均P<0.001),但与其肾小球滤过率相关性不明显(r=0.338,0.286,P=0.592,0.704)。肾非存活组血清IL⁃17A、miR⁃342⁃3p水平均低于肾存活组,差异有统计学意义(t=5.997,5.194,均P<0.001)。Logistics回归模型分析结果显示,血清IL⁃17A和miR⁃342⁃3p水平均可明显影响患者预后[OR(95%CI)=(0.2300.111~0.478),0.212(0.096~0.470)]。ROC曲线分析结果显示,2型糖尿病肾病患者血清IL⁃17A和miR⁃342⁃3p水平的预后预测效能均良好,两者联合预测预后效能最佳。结论2型糖尿病肾病患者IL⁃17A和miR⁃342⁃3p表达水平均下调且均与病情严重程度和预后相关,可能作为其病情和预后早期评估参考指标。

miR⁃455⁃3p调控Keap1/Nrf2信号对气道平滑肌细胞凋亡的机制研究

目的探讨miR⁃455⁃3p调控Keap1/Nrf2信号对气道平滑肌细胞凋亡的影响。方法收集2021年1月至2023年1月我院普胸外科收治的60例COPD患者,作为COPD组;另选取60例无COPD病史的肺部良性肿瘤患者正常肺组织作为健康对照组(Control组)。分离气道平滑肌细胞(ASMCs),将COPD患者气道平滑肌细胞随机分为miR⁃455⁃3p组、miR⁃NC组、miR⁃455⁃3p+si⁃Nrf2组。RT⁃PCR检测Control组和COPD组患者中miR⁃455⁃3p的表达,并检测转染过不同质粒的各组COPD患者气道平滑肌细胞中miR⁃455⁃3p的表达。分别采用CCK⁃8、Transwell小室法及流式细胞仪检测COPD患者气道平滑肌细胞增殖、侵袭和凋亡能力;采用ELISA检测COPD患者气道平滑肌细胞培养上清液中IL⁃6、TNF⁃α水平;蛋白质印迹检测细胞中Keap1和Nrf2蛋白表达。结果与Control组相比,COPD组患者ASMCs中miR⁃455⁃3p表达降低(P<0.05);与NC组相比,miR⁃455⁃3p组ASMCs中miR⁃455⁃3p表达增加(P<0.05);与miR⁃455⁃3p组相比,miR⁃455⁃3p+si⁃Nrf2组ASMCs中miR⁃455⁃3p表达明显降低(P<0.05)。NC组和miR⁃NC组ASMCs增殖、侵袭、凋亡能力及IL⁃6和TNF⁃α水平相比差异无统计学意义(P>0.05);与miR⁃NC组相比,miR⁃455⁃3p组ASMCs增殖、侵袭能力及细胞上清液中IL⁃6、TNF⁃α水平明显降低,凋亡能力明显增加(P<0.05);与miR⁃455⁃3p组相比,miR⁃455⁃3p+si⁃Nrf2组ASMCs增殖、侵袭能力及细胞上清液中IL⁃6、TNF⁃α水平明显增加,凋亡能力明显降低(P<0.05)。NC组和miR⁃NC组细胞中Keap⁃1、Nrf2蛋白表达相比差异无统计学意义(P>0.05);与miR⁃NC组相比,miR⁃455⁃3p组细胞中Keap⁃1蛋白表达明显降低,Nrf2蛋白表达明显升高(P<0.05);与miR⁃455⁃3p组相比,miR⁃455⁃3p+si⁃Nrf2组细胞中Keap⁃1蛋白表达明显增加,Nrf2蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论过表达miR⁃455⁃3p可抑制COPD患者气道平滑肌细胞增殖和侵袭,诱导凋亡,其作用机制和激活Keap1/Nrf2信号通路有关。

黄芩苷通过调节miR⁃223⁃3p/NLRP3通路对脓毒症急性肺损伤大鼠的保护作用

目的研究黄芩苷调节miR⁃223⁃3p/NOD样受体蛋白3(NLRP3)通路对脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠的保护作用。方法构建脓毒症ALI大鼠模型,实验分为假手术组、模型组、地塞米松组、低剂量黄芩苷组、中剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组。酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠血清TNF⁃α(肿瘤坏死因子⁃α)、IL⁃1β(白细胞介素1β)、IL⁃10水平;苏木素⁃伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化;测定大鼠肺组织含水量及肺泡液体清除率(AFC);实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)测定各组大鼠肺组织miR⁃223⁃3p水平;蛋白印迹法测定各组大鼠肺组织NLRP3水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清IL⁃1β、TNF⁃α水平和WW/DW比值、肺组织NLRP3水平升高(P<0.05),血清IL⁃10水平和AFC值、肺组织miR⁃223⁃3p水平降低(P<0.05);同时模型组大鼠肺泡完整性破坏,肺泡萎陷,肺间质明显水肿,大量炎症细胞浸润,肺组织病理得分升高(P<0.05)。经黄芩苷治疗后,随着给药剂量增高,血清IL⁃1β、TNF⁃α水平和WW/DW比值、肺组织NLRP3水平降低(P<0.05),血清IL⁃10水平和AFC值、肺组织miR⁃223⁃3p水平升高(P<0.05),呈剂量依赖性;同时大鼠肺泡结构恢复,肺间质水肿缓解,炎症细胞浸润减少,肺组织病理评分降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论黄芩苷可通过下调促炎因子IL⁃1β、TNF⁃α水平,上调抑炎因子IL⁃10水平以缓解脓毒症ALI大鼠肺损伤,可能与miR⁃223⁃3p/NLRP3通路有关。