miR-101-3p通过靶向下调GALNT1逆转乳腺癌多西他赛耐药的分子机制

目的 探讨miR-101-3p通过靶向下调GALNT1逆转乳腺癌多西他赛(docetaxel, DTX)耐药的分子机制。方法 构建MCF-7/DTX细胞株,采用qRT-PCR检测MCF-7及MCF-7/DTX细胞株及乳腺癌患者癌组织中miR-101-3p的表达水平;向MCF-7/DTX细胞转染miR-101-3p mimics、siGALNT1、miR-101-3p inhibitor并用qRT-PCR实验评估转染效率;MTT实验用于检测调控miR-101-3p及GALNT1对MCF-7/DTX细胞DTX敏感性的影响;划痕实验用于分析转染后各组细胞迁移能力的变化;Transwell实验检测调控miR-101-3p及GALNT1后MCF-7/DTX细胞的垂直侵袭能力的改变;流式凋亡实验检测各组细胞在同一浓度DTX处理下的凋亡百分比;western blot实验检测调控miR-101-3p及GALNT1对凋亡关联蛋白及上皮间充质转化标志蛋白表达量的影响。结果 MCF-7/DTX细胞和DTX患者耐药组中miR-101-3p的相对表达量呈异常降低趋势。转染miR-101-3p mimics后,与miR-NC组相比miR-101-3p mimics组DTX敏感性明显升高,迁移和侵袭能力在高水平miR-101-3p下有所降低,同时凋亡百分比显著上升凋亡蛋白表达呈相同趋势,上皮间充质转化过程受到一定抑制。MCF-7/DTX细胞中GALNT1相对表达量较MCF-7细胞明显升高,双荧光素酶实验证实了miR-101-3p与GALNT1的靶向关系并且GALNT1表达量与miR-101-3p呈负相关。回复实验进一步分析GALNT1和miR-101-3p间的关系,低水平miR-101-3p能够逆转敲低GALNT1引起的DTX高敏感性,同时一定程度恢复敲低GALNT1引起的MCF-7/DTX细胞迁移、侵袭、凋亡及EMT的改变。结论 miR-101-3p介导MCF-7/DTX细胞的DTX敏感性可能是通过靶向GALNT1完成的。

Bta-miR-101对牛睾丸支持细胞增殖、凋亡及分泌的影响

旨在探究bta-miR-101对牛睾丸支持细胞增殖、凋亡及分泌的影响。本研究采集3日龄(n=3)与13月龄(n=3)健康公牛的睾丸组织,构建安格斯牛组织表达谱,验证bta-miR-101在两个时期的差异表达。利用在线工具(TargetScan、miRTarBase、miRDB及miRWalk)预测miR-101的靶基因,并利用KOBAS对其进行GO和KEGG通路富集分析。将miR-101的模拟物与抑制物分别转染至牛睾丸支持细胞中,利用RT-qPCR、Western Blotting以及CCK-8等技术检测细胞增殖、凋亡及分泌相关基因表达量以及细胞增殖系数。通过4种在线软件预测到26个bta-miR-101的共同靶基因,GO和KEGG富集分析发现这些基因主要富集在核质、蛋白质结合、JAK-STAT的受体信号通路上,这些信号通路与细胞分化、细胞周期、细胞凋亡等生物过程有着不同程度的关联。RT-qPCR结果显示,bta-miR-101在牛初生期睾丸组织中的表达量显著高于性成熟时期(P<0.05),与实验室前期测序结果一致。转染miR-101的模拟物与抑制物后,发现相较于对照组,miR-101 mimics可以促进增殖相关基因在mRNA和蛋白水平的表达量,并显著升高支持细胞的增殖系数,同时抑制凋亡基因在mRNA和蛋白水平的表达量(P<0.05);miR-101 inhibitor可以抑制增殖相关基因在mRNA和蛋白水平的表达量,同时促进凋亡基因在mRNA和蛋白水平的表达量(P<0.05)。在细胞分泌方面,miR-101对分泌标志基因GDNF、BMP4的转录有影响,但对雄激素结合蛋白的分泌影响不显著。综上所述,miR-101促进牛睾丸未成熟支持细胞的增殖并抑制其凋亡,对雄激素结合蛋白的分泌无显著影响。

miR-101-3p与膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的关系研究

目的 探究miR-101-3p与膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的关系。方法 将膀胱癌细胞分为对照组、下、上调miR-101-3p组,体外培养膀胱癌细胞。采用CCK-8实验来检测膀胱癌细胞增殖能力;通过划痕实验来检测膀胱癌细胞迁移能力;通过Transwell实验来检测膀胱癌细胞侵袭能力;3组细胞分别加入不同浓度的顺铂,观察对细胞的抑制率;Western blot法测定CDK4、Akt、ICAM-1、MMP-9蛋白的表达量。结果 在24 h、48 h、72 h的细胞增殖率方面,上调miR-101-3p组均低于对照组、下调miR-101-3p组,而对照组低于下调miR-101-3p组(P<0.05);在24 h、48 h、72 h的细胞迁移数、侵袭数方面,上调miR-101-3p组均少于对照组、下调miR-101-3p组,而对照组少于下调miR-101-3p组(P<0.05);在CDK4、Akt、ICAM-1、MMP-9蛋白的表达量方面,上调miR-101-3p组均低于对照组和下调miR-101-3p组(P<0.05);在顺铂敏感度方面,上调miR-101-3p组高于对照组、下调miR-101-3p组(P<0.05)。结论 上调miR-101-3p能够抑制CDK4、Akt、ICAM-1、MMP-9蛋白的表达,调控细胞周期,阻止膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭,提高其顺铂敏感性。

miR-101-5p通过靶向ATAD2抑制肺鳞癌细胞的侵袭

目的 探讨微小RNA-101-5p(miR-101-5p)影响肺鳞癌(lung squamous cell carcinoma,LUSC)细胞增殖、侵袭的分子机制。方法 从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载肺鳞癌TCGA-LUSC的miRNA成熟体表达数据和总RNA的测序数据,鉴定差异表达基因;分析富集于ATAD2的信号通路。培养LUSC细胞,qRT-PCR检测细胞中miR-101-5p和ATAD2的mRNA表达,MTT实验、克隆形成实验和侵袭实验检测miR-101-5p对LUSC细胞增殖和侵袭的影响,流式细胞术检测ATAD2对LUSC细胞周期的影响,Western blotting检测ATAD2蛋白的表达。双荧光素酶实验验证miR-101-5p能否与ATAD2靶向结合,最后通过LUSC细胞共转染oe-ATAD2和miR-101-5p模拟物(mimic),检测细胞增殖、克隆、侵袭能力的变化,进一步探究miR-101-5p能否通过ATAD2调节LUSC细胞的生物学功能。结果 miR-101-5p在LUSC组织及培养LUSC细胞中显著下调。过表达miR-101-5p的LUSC增殖和侵袭能力显著抑制。其下游调控靶基因ATAD2在LUSC中显著上调,且miR-101-5p和ATAD2表达呈负相关,单基因富集分析(GSEA)结果显示ATAD2显著富集于细胞周期信号通路。双荧光素酶实验结果显示,miR-101-5p靶向结合ATAD2,并通过MTT和侵袭实验发现miR-101-5p通过靶向结合ATAD2调控LUSC细胞的增殖和侵袭。结论 miR-101-5p在LUSC中低表达,miR-101-5p通过靶向抑制ATAD2降低LUSC细胞的增殖、侵袭。

补骨脂素通过miR-101/PI3K/Akt轴对骨肉瘤细胞侵袭、转移的影响

目的探讨补骨脂素对骨肉瘤细胞侵袭、转移的抑制作用及可能的作用机制。方法用不同浓度补骨脂素作用于人骨肉瘤细胞(human osteosarcoma cells,MG-63),用CCK-8法检测细胞的存活情况,筛选最佳抑制浓度;用实时荧光定量法检测骨肉瘤组织与正常组织中微小RNA(microRNA,miR)-101的相对表达量。将对数生长期骨肉瘤细胞MG-63随机分为对照组、miR101模拟物阴性对照组(miR-NC组)、miR-101组、补骨脂素组和补骨脂素联合miR-101组。用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]实验检测细胞增殖抑制率;用肿瘤细胞侵袭实验(Transwell)检测细胞侵袭和迁移能力;用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测肌磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)mRNA的表达情况;用蛋白印迹法(Western blotting)检测磷酸化肌磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达情况。结果与对照组比较,miR-101组、补骨脂素组和补骨脂素联合miR-101组的细胞增殖抑制率升高,细胞侵袭数量、细胞迁移数量、PI3K和Akt mRNA,p-PI3K、p-Akt、MMP2和MMP9蛋白的表达水平均降低(P<0.05)。与miR-101组和补骨脂素组比较,补骨脂素联合miR-101组的细胞增殖抑制率升高,细胞侵袭数量、细胞迁移数量、PI3K和Akt mRNA,p-PI3K、p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平均降低(P<0.05)。结论补骨脂素能够降低骨肉瘤细胞MG-63的增殖能力,并抑制其侵袭和迁移能力,其作用机制可能与调节miR-101水平、影响PI3K/Akt信号通路有关。

miR-27a、miR-101联合c-erb-B2检测在胃癌术后复发中的预测价值

目的探究miR-27a、miR-101联合c-erb-B2检测在胃癌术后复发中的预测价值。方法选取2021年12月至2022年12月芜湖市第二人民医院收治的152例原发性胃癌患者为研究对象,均进行手术治疗。选取152例胃癌患者的胃癌组织和距肿瘤边缘4 cm的癌旁组织,比较胃癌组织和癌旁组织miR-27a、miR-101和c-erb-B2表达;术后随访1年,根据术后复发情况分为复发组(n=27)和未复发组(n=125),比较两组不同临床特征和miR-27a、miR-101、c-erb-B2表达;分析胃癌术后复发的危险因素;采用ROC曲线评估miR-27a、miR-101、c-erb-B2表达单一及联合对胃癌患者术后复发的预测价值。结果胃癌组织miR-27a表达水平高于癌旁组织,miR-101表达水平低于癌旁组织,c-erb-B2阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);复发组和未复发组性别、年龄、肿瘤原发部位、分化程度比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组肿瘤直径、TNM分期、浆膜浸润、淋巴结转移、c-erb-B2、miR-101和miR-27a表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);二元Logistic回归分析结果显示,肿瘤直径≥5 cm、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移、有浆膜浸润、c-erb-B2表达阳性、miR-101低水平表达、miR-27a高水平表达均是影响胃癌患者复发的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线显示,miR-27a、miR-101、c-erb-B2联合检测预测胃癌患者复发的AUC为0.906,高于三者单独检测的0.729、0.803、0.834。结论miR-27a水平升高、miR-101水平下降以及c-erb-B2表达阳性均是胃癌术后复发的危险因素,三者联合检测在预测胃癌术后复发中具有良好的应用价值,可为临床诊治提供参考依据。

LncRNA NEAT1/miR-101-3p/RAC1在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及机制研究

目的 探讨lncRNA NEAT1在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用机制。方法 采用RT-qPCR法检测宫颈腺癌细胞系HeLa、宫颈鳞癌细胞系SiHa和人子宫内膜上皮细胞系EM中lncRNA NEAT1的表达;干扰或过表达lncRNA NEAT1后,通过CCK-8和Transwell观察宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化,扫描电镜观察细胞侵袭性伪足的变化;采用双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA NEAT1与miR-101-3p的靶向关系;通过免疫荧光、Transwell、CCK-8等方法检测lncRNA NEAT1/miR-101-3p/RAC1对SiHa和HeLa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 相比于EM细胞(0.99±0.04),宫颈癌SiHa(7.59±0.10,P<0.01)和HeLa(1.50±0.07,P<0.05)细胞中lncRNA NEAT1的表达明显升高。相比于sh-NC组,sh-NEAT1组(加入NEAT1敲低质粒)细胞增殖、迁移、侵袭及侵袭性伪足数量明显减少(P<0.05);相比于OE-NC组,OE-NEAT1组(加入NEAT1过表达质粒)SiHa、HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及侵袭性伪足数量显著增加(P<0.05)。miR-101-3p与突变的NEAT1共转染后,相比于对照组(3.10±0.16)荧光素酶活性无显著变化(2.99±0.11,P>0.05),而与野生型NEAT1共转染后,相比于对照组(2.97±0.13)荧光素酶活性显著降低(1.15±0.05,P<0.01),提示lncRNA NEAT1与miR-101-3p靶向结合。RT-qPCR结果显示,与sh-NC组(SiHa,0.97±0.09;HeLa,1.07±0.06)相比,sh-NEAT1组miR-101-3p mRNA表达明显升高(SiHa,3.86±0.39;HeLa,2.62±0.51,P<0.01);与OE-NC组(SiHa,0.98±0.20;HeLa,1.05±0.18)相比,OE-NEAT1组miR-101-3p mRNA表达显著降低(SiHa,0.35±0.05;HeLa,0.14±0.03,P<0.05),提示lncRNA NEAT1与miR-101-3p的表达呈负相关。CCK-8、Transwell结果显示,siRNA-RAC1、miR-101-3p mimic使SiHa和HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭受到抑制(P<0.05),上调lncRNA NEAT1可部分逆转以上现象,使细胞增殖、迁移和侵袭数目增加(P<0.05)。结论 宫颈癌细胞中lncRNA NEAT1的表达显著升高,它作为miR-101-3p的竞争性内源RNA(ceRNA),通过竞争性结合miR-101-3p并部分控制其对RAC1的调控,进而调节宫颈癌细胞侵袭性伪足的形成并诱导细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-101、miR-122在妊娠期糖尿病患者血清和胎盘组织中表达及意义分析

分析妊娠期糖尿病血清、胎盘miR-101、miR-122表达特点与指导意义。方法:选取2022年10月~2023年09月孕产妇70例,其中妊娠期糖尿病35例设为A组,血糖正常孕妇35例设为B组,分析孕妇血清和胎盘miR-101与miR-122表达对孕妇血糖、胰岛素情况的影响。结果:A组血清、胎盘miR-101活性高于B组(P<0.05);A组血清、胎盘miR-122显著高表达(P<0.05);FBG与血清miR-101正相关,FIN、HOMA-IS与血清miR-101负相关(P<0.05);FBG、HOMA-IR与miR-122正相关,FIN与血清miR-101负相关(P<0.05)。结论:妊娠期糖尿病患者常见miR-101、miR-122激活,可能影响机体胰岛素分泌,根据miR-101、miR-122变化实施针对性管理,以促进疾病防控。

LncRNA XIST和miR-101-3p在SLE患者外周血单核细胞中的表达及临床应用价值

目的分析长链非编码RNA(Lnc RNA)X染色体失活特异转录本(XIST)和微小RNA-101-3p(mi R-101-3p)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单核细胞中的表达及临床应用价值。方法选取2019年4月至2021年10月在新乡市中心医院治疗的180例SLE患者作为观察组,选择同期180例健康体检者作为对照组。根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分将观察组分为稳定期组80例和活动期组100例。采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)法对患者外周血单核细胞中Lnc RNA XIST、mi R-101-3p的相对表达水平进行检测。分析Lnc RNA XIST与mi R-101-3p的相关性以及二者与SLEDAI评分的相关性;对影响SLE的因素进行logistic回归分析;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Lnc RNA XIST、mi R-101-3p的表达对SLE的诊断价值。结果与对照组相比,观察组患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);活动期组患者较稳定期组外周血单核细胞中Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST与mi R-101-3p水平呈负相关(r=-0.410,P<0.05);Lnc RNA XIST水平与SLEDAI评分呈正相关(r=0.425,P<0.05),mi R-101-3p水平与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.454,P<0.05);logistic回归分析显示,Lnc RNA XIST是影响SLE的危险因素(P<0.05),mi R-101-3p是影响SLE的保护因素(P<0.05);Lnc RNA XIST、mi R-101-3p联合诊断SLE的ROC曲线下面积为0.960,均优于其各自单独诊断(Z_(二者联合-Ln-c RNA XIST)=3.268,P=0.001;Z_(二者联合-mi R-101-3p)=2.584,P=0.005)。结论SLE患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,与SLE疾病活动性有关,对SLE具有一定的诊断价值。

溃疡性结肠炎患者血清miR-101-3p、PTX3水平变化及其与病情的关系

目的探讨溃疡性结肠炎(UC)患者血清中微小RNA-101-3p(miR-101-3p)和正五聚蛋白3(PTX3)的水平变化及其与UC病情的关系。方法选取该院2020年3月至2023年7月收治的124例UC患者作为UC组,另选取同期124例体检健康者作为对照组。根据Mayo评分分为活动期71例、缓解期53例,并将活动期患者分为轻度组20例、中度组28例、重度组23例。采用双抗夹心酶联免疫吸附试验检测血清PTX3水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清miR-101-3p水平。采用Pearson相关分析血清miR-101-3p水平与PTX3水平的相关性;采用多因素Logistic回归分析影响UC患者病情的因素;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-101-3p、PTX3对UC患者病情的诊断价值。结果UC组血清miR-101-3p水平低于对照组,PTX3水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,UC患者血清miR-101-3p水平与PTX3水平呈负相关(r=-0.482,P<0.05)。活动期患者血清miR-101-3p水平低于缓解期,PTX3水平高于缓解期,差异均有统计学意义(P<0.05)。在活动期UC患者中,血清miR-101-3p水平轻度组>中度组>重度组,任意两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);血清PTX3水平为轻度组<中度组<重度组,任意两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清miR-101-3p水平升高是UC患者病情处于活动期的保护因素(P<0.05),PTX 3水平升高是UC患者病情处于活动期的危险因素(P<0.05)。血清miR-101-3p、PTX3单项及联合检测诊断UC患者病情处于活动期的曲线下面积(AUC)分别为0.820(95%CI:0.741~0.884)、0.853(95%CI:0.778~0.910)、0.977(95%CI:0.933~0.996),联合检测诊断的AUC明显高于miR-101-3p、PTX3单项检测(Z=4.010、3.663,均P<0.05)。结论UC患者血清miR-101-3p水平明显降低,PTX3水平明显增加,二者与UC患者病情有关,并且2项指标联合检测诊断UC患者病情处于活动期的价值更佳。

CircPIP5K1A靶向调节miR-101-3p影响结直肠癌SW480细胞生长、迁移、侵袭和凋亡的作用机制

目的探究CircPIP5K1A靶向调节miR-101-3p对结直肠癌(CRC)SW480细胞生长、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法qRT-PCR检测人CRC组织、邻近正常组织、CRC细胞株SW480、正常结肠上皮细胞FHC中CircPIP5K1A、miR-101-3p水平;将si-NC、si-CircPIP5K1A、si-CircPIP5K1A+inhibitor NC、si-CircPIP5K1A+miR-101-3p inhibitor分别转染至SW480细胞并命名为si-NC组、si-CircPIP5K1A组、si-CircPIP5K1A+inhibitor NC组、si-CircPIP5K1A+miR-101-3p inhibitor组,未做任何处理的SW480细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验验证CircPIP5K1A与miR-101-3p的关系;qRT-PCR检测SW480细胞中CircPIP5K1A、miR-101-3p表达;CCK-8法检测SW480细胞增殖情况;流式细胞术检测SW480细胞凋亡率;Transwell检测SW480细胞侵袭、迁移数量;Western blot检测SW480细胞E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白水平;小鼠异种移植检测肿瘤生长。结果与邻近正常组织[(1.00±0.03)、(1.00±0.02)]或FHC细胞(1.00±0.00)相比,CRC组织和SW480细胞CircPIP5K1A水平[(1.85±0.21)、(1.54±0.16)]显著上调(P<0.05),miR-101-3p表达[(0.31±0.02)、(0.36±0.04)]显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-CircPIP5K1A组SW480细胞A 450值、迁移、侵袭细胞数量、CircPIP5K1A表达、N-cadherin、Vimentin蛋白水平显著下降(P<0.05),SW480细胞凋亡率、miR-101-3p表达、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);而抑制miR-101-3p表达减弱了沉默CircPIP5K1A抑制SW480细胞增殖、迁移和侵袭的效果;CircPIP5K1A负向调控miR-101-3p。与NC组、慢病毒空载(LV-NC)组相比,PIP5K1A慢病毒载体(LV-PIP5K1A)组肿瘤体积、肿瘤质量显著下降(P<0.05);与LV-PIP5K1A组、LV-PIP5K1A+拮抗剂对照(antiagomir)组相比较,LV-PIP5K1A+miR-101-3p拮抗剂(miR-101-3p antiagomir)组肿瘤体积、肿瘤质量显著升高(P<0.05)。结论沉默CircPIP5K1A可能通过上调miR-101-3p表达来对CRC细胞SW480增殖、迁移和侵袭产生影响。

miR-101-3p调控HMGB1影响甲状腺乳头状癌的体外转移活性

目的探讨miR-101-3p在甲状腺乳头状癌细胞发展中的作用机制,以期为甲状腺乳头状癌的预防和治疗提供一个新思路。方法采用q-PCR方法检测癌组织和癌旁组织中miR-101-3p和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平。用miR-101-3p mimic、miR NC、pcDNA3.1 HMGB1和pcDNA3.1 NC转染KAT-5细胞后,Western blotting检测HMGB1途径蛋白的表达。使用划痕实验检测细胞的迁移情况,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,通过集落形成实验分析细胞的生长能力。荧光素酶报告基因实验分析miR-101-3p和HMGB1的相互作用情况。结果miR-101-3p在甲状腺乳头状癌组织中的表达显著低于癌旁组织(分别为1.08±0.02、0.52±0.01,P<0.05);HMGB1在人PTC中表达显著高于癌旁组织(分别为0.88±0.03、1.29±0.02,P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-101-3p能够靶向抑制HMGB1表达(分别为0.98±0.02、0.03±0.0l,P<0.05)。miR-101-3p过表达能够明显抑制KAT-5细胞的增殖与侵袭和迁移。然而,过表达HMGB1能够逆转miR-101-3p对KAT-5细胞的抑制作用。结论miR-101-3p在甲状腺乳头状癌组织中的表达降低,HMGB1在甲状腺乳头状癌组织中的表达升高。miR-101-3p可靶向调控HMGB1进而抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭并诱导细胞凋亡。

CircPRKCI通过miR-101-3p/TGFBR3轴调节食管鳞状细胞癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探索环状RNA PRKCI(circular ribonucleic acid PRKCI,CircPRKCI)通过miR-101-3p/转化生长因子βⅢ型受体(transforming growth factor beta typeⅢreceptor,TGFBR3)轴对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞恶性行为学的影响。方法将si-NC、si-CircPRKCI、miRNC、miR-101-3p mimics、vector+miR-101-3p mimics、CircPRKCI+miR-101-3p mimics转染至KYSE150细胞中,采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测细胞CircPRKCI、miR-101-3p、TGFBR3 mRNA表达。并采用RT-qPCR、细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)法、Transwell法、流式细胞术、蛋白质印迹法检测各组细胞恶性行为情况。结果CircPRKCI和TGFBR3 mRNA在KYSE150细胞中上调,miR-101-3p表达下调(P<0.05);沉默CircPRKCI能够靶向上调miR-101-3p,抑制TGFBR3表达以及细胞活力、侵袭与迁移能力,增强细胞凋亡(P<0.05);上调miR-101-3p能够显著抑制KYSE150细胞恶性行为,而过表达CircPRKCI会减弱上调miR-101-3p对KYSE150细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05)。结论CircPRKCI可通过靶向负调节miR-101-3p/TGFBR3轴,影响ESCC细胞的增殖、迁移、侵袭与凋亡等恶性生物学行为。

SNHG6靶向miR-101/TGFBR1促进AMI小鼠左心室心肌纤维化

目的探讨SNHG6对急性心肌梗死(AMI)小鼠左心室心肌的影响。方法将30只雄性C57/BL6小鼠构建成AMI小鼠后随机均分为AMI组、AMI+SNHG6组、AMI+miR-101-3p组、AMI+SNHG6+miR-101-3p组、AMI+miR-101-3p+TGFBR1组,另设正常小鼠6只为假手术组。qRT-PCR检测AMI小鼠SNHG6、miR-101-3p表达水平。心脏彩超检测各组小鼠左室射血分数(LVEF);马松和天狼星红染色法以及免疫组化分析各组小鼠左心室心肌纤维化变化。将H9C2细胞株分为阴性对照组(转染空质粒)、SNHG6组(转染质粒SNHG6)、miR-101-3p组(转染质粒miR-101-3p)。Western blotting检测各组TGFBR1蛋白表达;采用双荧光素酶报告基因法预测并验证SNHG6/miR-101-3p/TGFBR1荧光素酶活性及调控机制。结果AMI小鼠较假手术组SNHG6表达显著增加,miR-101-3p降低(P<0.05)。与AMI组比较,AMI+SNHG6组小鼠LVEF降低,心肌纤维化程度加重(P<0.05);AMI+miR-101-3p组LVEF升高,心肌纤维化程度减轻(P<0.05)。AMI+SNHG6+miR-101-3p组较AMI+SNHG6组LVEF升高、心肌纤维化程度减轻(P<0.05),而AMI+miR-101-3p+TGFBR1组较AMI+miR-101-3p组LVEF降低、心肌纤维化程度加重(P<0.05)。双荧光素酶报告基因法验证显示,miR-101-3p组SNHG6、TGFBR1野生型质粒的荧光素酶活性较阴性对照组明显降低(P<0.05)。结论SNHG6抑制miR-101-3p上调TGFBR1加重AMI小鼠左心室心肌纤维化。

外周血miR-200C、miR-101和CA-724联合检测对胃癌的诊断价值

目的:探讨外周血miR-200C、miR-101和糖类抗原-724(CA-724)联合检测对胃癌的诊断价值。方法:选取112例高度疑似胃癌患者为研究对象,根据病理检查结果分为胃癌组(n=69)和良性组(n=43);胃癌组患者再根据临床分期分为早期组(n=28)和晚期组(n=41),根据是否淋巴结转移分为转移组(n=43)和无转移组(n=26)。比较各组患者miR-200C、miR-101、CA-724水平,分析其对胃癌的诊断价值。结果:胃癌组患者miR-200C、miR-101低于良性组,CA-724高于良性组(P<0.05);早期组患者miR-200C、miR-101均高于晚期组(P<0.05),CA-724均低于晚期组(P<0.05);无转移组患者miR-200C、miR-101均高于转移组(P<0.05),CA-724低于转移组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-200C、miR-101、CA-724单独及三者联合诊断胃癌曲线下面积(AUC)分别为0.903、0.889、0.965、0.990,三者联合检测诊断的价值高于各指标单独检测(P<0.05)。结论:外周血miR-200C、miR-101在胃癌患者血液中表达呈下降趋势,CA-724则与之相反,三者联合检测对胃癌诊断价值较高。

miR-101-3p通过靶向抑制斯坦尼钙调节蛋白1(STC1)促进巨噬细胞对人肝癌细胞的吞噬作用

目的 探究miR-101-3p能否促进THP-1巨噬细胞对HCCLM3人肝癌细胞的吞噬作用及其机制。方法 通过慢病毒包装、感染和抗性筛选,获得绿色荧光蛋白(GFP)标记并过表达miR-101-3p的HCCLM3人肝癌细胞稳转系(HCCLM3^(GFP)-miR-101-3p),同时使用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞贴壁分化为M0型巨噬细胞。将两者共培养24 h后收集细胞,运用荧光激活细胞分选法(FACS)检测巨噬细胞吞噬效率。实时定量PCR检测斯坦尼钙调节蛋白1(STC1)、钙网蛋白(CRT)的mRNA表达水平,免疫荧光染色法检测CRT的表达和分布,Western blot法检测STC1、 CRT的蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验分析miR-101-3p与靶基因的靶向调控关系。结果 过表达miR-101-3p促进THP-1巨噬细胞对HCCLM3肝癌细胞的吞噬作用,miR-101-3p通过靶向STC1进而上调HCCLM3细胞膜表面CRT的表达。结论 miR-101-3p通过靶向抑制STC1进而促进HCCLM3细胞膜表面CRT的表达,增强巨噬细胞对肝癌细胞的吞噬作用。

胃癌并发Hp感染患者血清miR-101,HSP-70,IL-1β表达水平与肿瘤增殖和侵袭力的相关性研究

目的 探讨胃癌并发幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染患者血清mi R-101,热休克蛋白-70(heat shock protein-70,HSP-70)和白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)表达水平与肿瘤增殖和侵袭力的相关性。方法 选取2017年2月~2020年2月绵阳市第三人民医院胃癌患者120例为观察组(依据Hp检测结果分为胃癌Hp阳性组68例、胃癌Hp阴性组52例)、同期慢性胃炎患者86例为对照组。测定比较各组血清miR-101,HSP-70,IL-1β水平和Hp感染U值,分析Hp感染与胃癌患者血清各指标水平关联性,统计胃癌Hp阳性组不同血清各指标水平患者胃癌组织中肿瘤增殖基因[磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ(phosphatidylinositol-3 kinase catalytic subunit δ,PIK3CD)、C-myc癌基因(C-myc oncogene,C-myc)、zeste基因增强子同源物2(zeste gene enhancer homolog 2,EZH2)]、侵袭基因[泛素样含PHD和环指域1(Ubiquitin-like containing PHD and ring finger domain 1, UHRF1)及Vav3癌基因(Vav3oncogene,Vav3)]表达,分析胃癌并发Hp感染患者血清各指标水平与胃癌组织中肿瘤增殖、侵袭基因表达关系以及对患者生存率的影响。结果 胃癌Hp阳性组血清miR-101水平低于胃癌Hp阴性组、对照组(0.51±0.13 vs 0.82±0.16,1.38±0.29);HSP-70(2.73±0.69 pg/L vs 1.80±0.57 pg/L, 1.14±0.38 pg/L),IL-1β(42.07±18.54 pg/L vs 23.61±10.38 ng/L,16.37±7.09 ng/L)水平和Hp感染U值(246.59±31.28 dpm/mmol vs 59.26±12.68 dpm/mmol, 41.35±8.39 dpm/mmol)高于胃癌Hp阴性组、对照组,差异均有统计学意义(F=79.650~2 297.784,均P <0.05);Hp感染U值与胃癌Hp阳性组患者血清mi R-101(r=-0.629)水平呈负相关,与HSP-70(r=0.574)和IL-1β(r=0.539)水平呈正相关(均P <0.05);miR-101高水平患者组织中PIK3CD,C-myc,EZH2,UHRF1和Vav3基因表达量均低于低水平患者,差异有统计学意义(t=8.554~17.034,均P <0.05);HSP-70高水平患者组织中各基因表达量均高于HSP-70低水平患者,差异均有统计学意义(t=6.395~13.742,均P <0.05);IL-1β高水平患者组织中各基因表达量均高于IL-1β低水平患者,差异有统计学意义(t=5.330~21.755,均P <0.05)。胃癌Hp阳性患者血清miR-101水平与组织中PIK3CD,C-myc,EZH2,UHRF1和Vav3基因表达量呈负相关(r=-0.664,-0.709,-0.714,-0.702,-0.687),HSP-70和IL-1β水平与组织中各基因表达量呈正相关(r=0.608~0.702,均P <0.05)。随访至2021年2月,经Kaplan-Meier生存分析显示,HSP-70和IL-1β高水平胃癌Hp阳性患者生存率均低于HSP-70和IL-1β低水平患者,miR-101高水平患者生存率高于低水平患者,差异有统计学意义(χ^(2)=8.163~9.862,均P <0.05)。结论 胃癌患者并发Hp感染可诱导血清miR-101,HSP-70和IL-1β异常表达,促进肿瘤增殖和侵袭,影响患者预后。

miR-101通过抑制DNA甲基转移酶3a抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的研究miR-101对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响,并分析miR-101影响乳腺癌细胞生物学行为的可能机制。方法采用实时荧光定量PCR检测miR-101和DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)在乳腺癌组织和相对应的正常乳腺组织,正常乳腺细胞以及多种乳腺癌细胞系中的表达水平,应用慢病毒介导感染的方法分别将miR-101序列及shRNA-DNMT3a转至MDAMB-231人乳腺癌细胞,通过Western blot法检测DNMT3a以及上皮钙黏素(E-cadherin)的表达,分析miR-101影响乳腺癌细胞生物学行为的可能机制。通过MTT法检测乳腺癌细胞的增殖能力,划痕实验检测乳腺癌细胞的迁移能力。结果miR-101在MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361、HCC70乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中表达低于正常乳腺组织及MCF-10A乳腺细胞系,而DNMT3a表达则升高。Western blot实验结果显示过表达miR-101的MDA-MB-231细胞中,DNMT3a的表达明显下降,而E-cadherin的表达升高;应用shRNA-DNMT3a抑制DNMT3a表达后,E-cadherin的表达也明显升高,证实miR-101可能通过抑制DNMT3a而发挥作用。体外实验显示过表达miR-101可明显抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移能力。结论miR-101抑制乳腺癌细胞增殖和迁移能力可能是通过抑制DNMT3a进而恢复E-cadherin表达来实现。

稳定过表达mir-101结直肠癌细胞株的建立及其靶基因的鉴定

目的构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株并鉴定mir-101的靶基因。方法运用荧光定量PCR技术检测结直肠癌细胞株中mir-101的表达水平。利用GV209-mir101慢病毒感染SW620细胞,建立稳定过表达mir-101的细胞株。扩增包含mir-101结合位点的RAC1 3'UTR基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2载体,对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-Rac1-Mut;并用双萤光素酶报告实验检测RAC1 3'UTR相对荧光素酶活性。结果稳定过表达mir-101的细胞株中,mir-101的表达明显高于对照组。双萤光素酶报告实验证实mir-101 inhibitors可以上调3'UTR相对荧光素酶活性。稳定过表达mir-101,RAC1表达下调;而干扰mir-101之后RAC1表达上调。结论成功构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株。RAC1是mir-101的靶基因。

miR-101靶向甲基化转移酶3A抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭

背景与目的:mi R-101在胃癌、结肠癌、乳腺癌以及前列腺癌中表达下调,有类似抑癌基因样作用,然而,其在卵巢癌中的作用尚未明确。该研究旨在探讨mi R-101是否通过靶向调控甲基化转移酶3A(DNMT3A)抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭,从而进一步揭示mi R-101的抑瘤机制。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测22例卵巢癌组织及癌旁正常卵巢组织中mi R-101的表达改变;将mi R-101 mimics转染于卵巢癌SKOV3细胞,以DNMT3A si RNA为阳性对照,采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测外源过表达mi R-101对DNMT3A蛋白表达水平的影响;采用噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)和Transwell侵袭实验检测外源高表达mi R-101对人卵巢癌细胞生长与侵袭能力的影响。结果:q RT-PCR检测结果显示,mi R-101在22例卵巢癌组织中的表达水平较癌旁正常组织明显下调;Western blot检测结果显示,外源过表达mi R-101或沉默DNMT3A能下调SKOV3细胞DNMT3A蛋白的表达水平;MTT检测结果显示,转染mi R-101 mimics或沉默DNMT3A 48、72和96 h后D值与对照组比较明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);Transwell侵袭实验显示,转染mi R-101 mimics或沉默DNMT3A 36 h后穿过基底膜的细胞数分别为(105±7)个和(107±13)个,与对照组(213±11)个比较能明显减缓SKOV3细胞的穿膜能力,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:mi R-101通过靶向调控DNMT3A抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭。