miR-17-5p靶向B7-H3对结直肠癌细胞生物学特性及免疫调节作用的影响

目的:探究miR-17-5p对B7-H3的调控以及在结直肠癌发展中的免疫调节作用。方法:收集25例人结直肠癌组织及相邻正常组织,通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组化实验分析miR-17-5p、B7-H3和PD-L1的表达水平。将人结直肠癌HCT-116细胞分为4组:miR-NC组、miR-17-5p mimic组、si-NC组、si-B7-H3组。通过细胞集落形成实验、Transwell实验和流式细胞术分析HCT-116细胞生长、侵袭能力和凋亡率。通过荧光素酶报告基因实验分析miR-17-5p对B7-H3的调控作用。通过ELISA实验分析细胞培养液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-α的细胞因子水平。结果:与癌旁组织比较,结直肠癌组织中miR-17-5p表达下降,B7-H3表达升高。miR-17-5p mimic和si-B7-H3能够降低HCT-116细胞集落形成数量和侵袭数量,促进HCT-116细胞凋亡,并能降低培养液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-α水平。此外,miR-17-5p mimic和si-B7-H3能够抑制HCT-116细胞PD-L1表达。结论:miR-17-5p能够靶向抑制B7-H3表达,影响结直肠癌发展中的免疫调节作用,并能抑制结直肠癌细胞的转移,促进结直肠癌细胞凋亡。

miR-17-5p通过调控PKD2对肺腺癌HCC827细胞生物学行为的影响

目的:探讨miR-17-5p在肺腺癌细胞中的表达及miR-17-5p对肺腺癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响及其分子作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR检测人肺腺癌细胞系HCC827和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-17-5p的表达水平。实验分为miR-17-5p过表达组(miR-17-5p mimics组)、miR-17-5p低表达组(miR-17-5p inhibitor组)和阴性对照组(NC组)。通过CCK-8、流式细胞术、Transwell实验探讨miR-17-5p对肺腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。最后通过Targetscan数据库预测出PKD2是miR-17-5p下游潜在的靶基因,利用实时荧光定量PCR和Western-blot实验验证miR-17-5p与PKD2之间的相互作用关系。结果:miR-17-5p在HCC827细胞中高表达(P<0.001),上调miR-17-5p后显著促进了肺腺癌细胞增殖(P<0.05)、侵袭(P<0.01)及迁移(P<0.05)并抑制凋亡(P<0.01)。miR-17-5p与PKD2的3’UTR存在直接结合位点,并且过表达miR-17-5p在mRNA和蛋白水平均显著促进了PKD2的表达(P<0.01)。结论:PKD2是miR-17-5p的直接靶基因,miR-17-5p通过调控PKD2影响肺腺癌细胞的生物学行为。

LncRNAHOTAIR靶向miR-17-5p/TXNIP对狼疮性肾炎进展的机制研究

目的探讨长链非编码RNA同源盒基因转录反义RNA(LncRNAHOTAIR)靶向miR-17-5p/硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)对狼疮性肾炎(LN)进展的机制。方法取60只MRL/lpr雌性小鼠,随机分为模型组、LncRNAHOTAIR敲低组、miR-17-5p agomir组、阴性对照组和LncRNAHOTAIR敲低+miR-17-5p antagomir组,每组12只,另取12只C57BL/6J雌性小鼠作为对照组,检测各组小鼠肾功能、免疫器官指数;以HE染色实验检测各组小鼠肾组织病理形态;以酶联免疫吸附测定(ELASA)法测定各组小鼠血清抗双链DNA(dsDNA)、免疫细胞因子免疫球蛋白G(IgG)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;以实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)和免疫印迹法检测各组小鼠肾组织LncRNAHOTAIR、miR-17-5p及TXNIP表达。以双荧光素酶报告基因实验检测小鼠肾小球系膜细胞中LncRNAHOTAIR对miR-17-5p、miR-17-5p对TXNIP的靶向调节。结果与对照组比较,模型组小鼠肾组织发生严重病理损伤,胸腺指数、脾脏指数、miR-17-5p表达降低(P<0.05),尿蛋白浓度、血尿素氮(BUN)、血清抗dsDNA及IgG、IL-6、MCP-1、TNF-α、肾组织LncRNAHOTAIR及TXNIP表达升高(P<0.05)。与模型组比较,Ln⁃cRNAHOTAIR敲低组、miR-17-5p agomir组小鼠肾组织病理损伤减轻,胸腺指数、脾脏指数、miR-17-5p表达升高(P<0.05),尿蛋白浓度、BUN、血清抗dsDNA及IgG、IL-6、MCP-1、TNF-α、肾组织LncRNAHOTAIR及TXNIP表达降低(P<0.05)。下调miR-17-5p可减弱敲低LncRNAHOTAIR组对模型组小鼠各指标的作用。结论敲低LncRNAHOTAIR可通过上调miR-17-5p而降低TXNIP表达,进而减少LN小鼠免疫炎性因子产生,增强其免疫功能,抑制体内炎症发生发展,最终减轻小鼠肾组织损伤并改善其肾功能。

特发性扩张型心肌病患者miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平及其与心衰的关系

目的 探讨特发性扩张型心肌病(IDCM)患者miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平及其与心衰的关系。方法 选取2019年1月至2023年1月绵阳市游仙区中医医院和四川省人民医院联合收治的IDCM患者136例(IDCM组),根据IDCM患者是否继发心力衰竭分为心衰组40例和非心衰组96例。选取同期68名无心脏病的健康志愿者设为对照组。比较IDCM组与对照组、心衰组与非心衰组的血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平、N末端B型利钠肽(NT-proBNP)、超敏肌钙蛋白T(hs-TnT)、左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)。分析血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平与心功能指标的相关性。采用ROC曲线分析miR-34a-5p、miR-17-5p对IDCM继发心衰的预测价值。结果 IDCM组的血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IDCM组的血清NT-proBNP、hs-TnT水平高于对照组,LVEF低于对照组,LVEDD高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。心衰组的血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平高于非心衰组,差异有统计学意义(P<0.05)。心衰组的血清NT-proBNP水平高于非心衰组,LVEF低于非心衰组,LVEDD高于非心衰组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平与血清NT-proBNP水平呈正相关(r=0.498,r=0.306,P<0.001)。血清miR-34a-5p联合miR-17-5p预测IDCM继发心衰的灵敏度为0.875,特异度为0.802。结论 IDCM患者存在miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平上调情况,且miR-34a-5p、miR-17-5p表达水平与心衰具有关联,对预测心衰有一定价值。

LncRNA MEG3靶向调节miR-17-5p对缺氧缺血性脑损伤新生小鼠血-脑屏障的影响

目的探讨LncRNA MEG3通过调节miR-17-5p对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生小鼠血-脑屏障的影响。方法90只C57BL小鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、si-NC组、si-LncRNA MEG3组、si-LncRNA MEG3+anti-miR-NC组、si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组,每组15只。除对照组外,其余组小鼠构建HIBD模型,并采用Longa评分评估小鼠神经损伤情况;电镜观察脑组织周围血管内皮细胞超微结构;EB法测定小鼠血-脑屏障通透性;qRT-PCR法测定各组小鼠脑组织LncRNA MEG3、miR-17-5p水平;Western blotting法测定小鼠脑组织ZO-1、Occludin蛋白水平。结果与对照组相比,模型组小鼠血管内皮薄厚不均、多处呈现水肿状态;与模型组相比,si-LncRNA MEG3组小鼠血管内皮细胞逐渐连接紧密、薄厚较为均匀,水肿减少;与si-LncRNA MEG3组相比,si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组血管内皮细胞损伤加剧。与对照组相比,模型组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平显著升高,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著降低(均P<0.05)。与模型组相比,si-NC组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平、miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05),si-LncRNA MEG3组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平显著降低,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著升高(均P<0.05)。与si-LncRNA MEG3组相比,si-LncRNA MEG3+anti-miR-NC组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量、LncRNA MEG3水平、miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05),si-LncRNA MEG3+anti-miR-17-5p组小鼠神经功能缺损评分、脑含水量、EB含量显著升高,miR-17-5p水平、ZO-1及Occludin蛋白表达显著降低(均P<0.05)。结论LncRNA MEG3沉默可能通过上调miR-17-5p,降低HIBD新生小鼠血-脑屏障通透性,维持血-脑屏障对大脑的保护作用,保护脑组织。

过敏性鼻炎病人外周血MALAT1、miR-17-5p的表达及临床意义

目的:探讨过敏性鼻炎病人外周血肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)、微小RNA17-5p(miR-17-5p)的表达水平及其临床意义。方法:选取过敏性鼻炎病人125例作为观察组,择同期体检健康者62名作为对照组。以荧光定量聚合酶链反应检测受试者外周血MALAT1、miR-17-5p表达水平,绘制ROC曲线评估外周血MALAT1、miR-17-5p对过敏性鼻炎发生的诊断价值,Spearman相关性分析外周血MALAT1、miR-17-5p与病人疾病严重程度的相关性,再以多因素logistic回归分析影响过敏性鼻炎严重程度的独立危险因素。结果:观察组外周血MALAT1 mRNA水平低于对照组,miR-17-5p水平高于对照组(P<0.05);ROC曲线分析显示,MALAT1 mRNA曲线下面积为0.812,miR-17-5p曲线下面积为0.845,MALAT1 mRNA灵敏性优于miR-17-5p,特异性低于miR-17-5p,两者联合检测诊断价值更高;中重度过敏性鼻炎病人血清MALAT1 mRNA水平明显低于轻度病人(P<0.05),miR-17-5p水平明显高于轻度病人(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,外周血MALAT1 mRNA水平与过敏性鼻炎疾病严重程度呈负相关关系(r=-0.779,P<0.01),miR-17-5p水平与疾病严重程度呈正相关关系(r=0.774,P<0.01);多因素logistic回归分析结果显示,低水平MALAT1 mRNA、高水平miR-17-5p为影响过敏性鼻炎严重程度的独立危险因素(P<0.05)。结论:过敏性鼻炎病人外周血中MALAT1 mRNA呈低表达,miR-17-5p呈高表达,与疾病严重程度关系密切,为影响过敏性鼻炎严重程度的独立危险因素,可能作为诊断过敏性鼻炎及评估疾病严重程度的潜在指标。

lncRNA HOTAIR/miR-17-5p/Smad7通路调控激素性股骨头坏死的机制研究

目的研究lncRNA HOTAIR对激素性股骨头坏死(steroidinduced necrosis of femoral head,SONFH)的影响。方法收集激素性股骨头坏死患者骨髓组织25例,正常对照组为25例股骨颈骨折患者。培养人骨髓间充质干细胞(hBMSCs),用地塞米松(DEX)培养,CCK-8测定细胞增殖。用HOTAIR过表达载体或miR-17-5p模拟物转染细胞。hBMSCs分为hBMSCs组、hBMSCs+成骨诱导组、hBMSCs+成骨诱导+空载组、hBMSCs+成骨诱导+过表达HOTAIR组、hBMSCs+成脂诱导组、hBMSCs+成脂诱导+空载组和hBMSCs+成脂诱导+过表达HOTAIR组。RT-qPCR测HOTAIR、miR-17-5p、Smad7、RUNX2、RRAR-γ的mRNA表达。Western blot法检测Smad7蛋白的表达。双荧光素酶报告基因测法确认HOTAIR和miR-17-5p间的结合。碱性磷酸酶(ALP)活力检测试剂盒与茜素红染色评估细胞的成骨分化;油红O染色评估细胞的成脂分化。结果HOTAIR和Smad7在激素性股骨头坏死组织中表达上调,而miR-17-5p表达下调(P均<0.05)。双荧光素酶报告实验证实hBMSCs中HOTAIR的直接结合靶点是miR-17-5p,而Smad7是miR-17-5p的靶基因。HOTAIR的过表达诱导了hBMSCs的成脂分化和RRAR-γ表达,并抑制了成骨分化和RUNX2表达(P均<0.05)。结论过表达lncRNA HOTAIR直接靶向miR-17-5p并抑制hBMSCs的成骨分化,还能够促进成脂分化和Smad7的表达。

miR-17-5p调控LIMK1/cofilin1通路对子宫内膜异位症发生发展的影响

目的:探究微小核糖核酸-17-5p(miR-17-5p)调控LIM激酶1(LIMK1)/丝切蛋白1(cofilin1)通路对子宫内膜异位症发生发展的影响。方法:选取行子宫切除术的30例子宫内膜异位症患者作为子宫内膜异位症在位内膜组,另选取30例非雌激素依赖性疾病患者作为正常子宫内膜组。对两组患者的在位内膜细胞中LIMK1、cofilin1表达量采用实时荧光定量PCR法检测,对所获取的在位内膜细胞进行转染,Transwell法检测细胞的侵袭能力;CCK-8法检测细胞的增殖能力;ELISA法检测子宫内膜细胞中细胞因子ICAM-1、VEGF、MMP-9表达。结果:在位内膜组患者的miR-17-5p表达水平低于正常子宫内膜组(P<0.05);在位内膜组的LIMK1蛋白及其mRNA、cofilin1蛋白及其mRNA相对表达水平均高于正常子宫内膜组(P<0.05);在位内膜组未转染组(EC组)及转染阴性对照(EC-C组)情况下细胞侵袭能力显著高于正常子宫内膜组(NC组),但转染情况下(EC-miR-17-5p-RNAi组)细胞侵袭能力显著低于正常子宫内膜组(NC-miR-17-5p-cDNA组),两组患者细胞转染阴性对照(EC-C组、NC-C组)与未转染状态(EC组、NC组)差异无统计学意义(P>0.05);转染情况在位内膜组患者(EC-miR-17-5p-RNAi组)细胞侵袭力低于未转染状态(EC组),但正常子宫内膜组(NC-miR-17-5p-cDNA组)高于未转染组(NC组,P>0.05)。EC组细胞增殖能力在24 h、48 h、72 h、96 h均高于NC组细胞(P<0.05);EC-miR-17-5p-RNAi组各时间段细胞增殖能力与EC组相比较均升高(P<0.05);EC组与EC-C组在各时间段的细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);NC-miR-17-5p-cDNA组在各时间段的增殖能力均低于NC组(P<0.05);NC-C组各时间段的细胞增殖能力与NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。基础状态下,EC组ICAM-1、MMP-9和VEGF水平高于NC组,EC-miR-17-5p-RNAi组与EC组比较明显升高(P<0.05);EC组与EC-C组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05);NC组ICAM-1、MMP-9和VEGF水平明显高于NC-miR-17-5p-cDNA组(P<0.05),但与NC-C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-17-5p在内异症细胞中表达水平下调,通过负向调控LIMK1/cofilin1通路抑制细胞增殖、侵袭,在内异症发生及进展过程中发挥基因调节功能。

miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路的影响

目的:观察miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号通路的影响。方法:将大鼠随机数字法分为模型组、miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组。建模后,模型组经尾静脉注射10 mL/kg生理盐水,miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组分别经尾静脉注射7μL miR-17-5p mimics、miR-17-5p inhibitor与RNAi脂质体转染试剂的混合溶液。各组大鼠苏醒后的24 h进行神经功能评分,测定脑梗死体积、大鼠脑组织含水量,检测缺血侧大脑皮质细胞凋亡率,caspase-3、Bax、Bcl-2和ERK1/2蛋白表达。结果:miR-17-5p mimics组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率明显低于模型组,miR-17-5p inhibitor组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率显著高于其他2组;miR-17-5p mimics组大鼠缺血脑组织中caspase-3、Bax蛋白表达明显低于模型组,Bcl-2、p-ERK1/2蛋白表达高于模型组;miR-17-5p inhibitor组大鼠缺血脑组织中caspase-3、Bax、p-ERK1/2蛋白表达显著高于其他2组,Bcl-2蛋白表达低于其他2组。结论:miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的脑损伤具有一定的保护作用,miR-17-5p可抑制ERK1/2信号通路激活。

LncRNA BLACAT1调节miR-17-5p/DDX5轴对子宫内膜癌细胞恶性进展的影响

目的探讨LncRNA BLACAT1调节miR-17-5p/DDX5轴对子宫内膜癌(EC)细胞恶性进展的影响。方法将EC细胞系Ishikawa细胞分为:NC组、si-NC组、si-BLACAT1组、si-BLACAT1+miR-NC、si-BLACAT1+miR-17-5p inhibitor组。qRT-PCR检测BLACAT1、miR-17-5p、DDX5表达水平,CCK-8法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测迁移和侵袭,Western blot检测DDX5、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,荧光素酶实验检测BLACAT1、DDX5与miR-17-5p的靶向关系。结果BLACAT1、DDX5在EC细胞中表达水平升高,miR-17-5p表达降低(P<0.05),选择Ishikawa细胞进行实验。与NC组、si-NC组相比,si-BLACAT1组细胞BLACAT1、DDX5 mRNA、OD450值(24 h、48 h、72 h)、迁移和侵袭数目、Bcl-2表达降低,miR-17-5p、凋亡率、Bax表达升高(P<0.05);抑制miR-17-5p减弱了干扰BLACAT1对Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭的抑制,降低细胞凋亡率(P<0.05);BLACAT1靶向负调控miR-17-5p表达,miR-17-5p靶向负调控DDX5表达。结论干扰BLACAT1可通过调节miR-17-5p/DDX5轴抑制EC细胞恶性进展。

MS相关的hsa-miR-17-5p靶基因预测和关键基因筛选

目的对人类miR-17-5p(hsa-miR-17-5p)靶基因预测和富集分析,并结合基因的差异表达寻找多发性硬化症的生物学标志物。方法利用生物信息学方法,预测hsa-miR-17-5p靶基因,对预测结果进行基因本体数据库(Gene Ontology,GO)、京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genome,KEGG)富集分析,并构建蛋白质互作网络图(Protein-Protein Interaction Networks,PPI)。再结合多发性硬化症患者和健康对照组的差异表达基因,进一步筛选出hsa-miR-17-5p对多发性硬化症影响的关键基因。最后,利用RNA22 v2验证关键基因是否存在结合位点。结果不同网站预测后,取交集获取376个公共靶基因,这些靶基因有复杂的相互作用,主要存在于胞浆与核质,参与多种转录调控和蛋白质磷酸化等生物学过程,同时也与癌症、病毒感染和免疫系统等信号通路相关;靶基因和多发性硬化症患者的相对下调基因有三个共同基因PDLIM5、KCNB1、BTBD7。进一步验证上述关键基因结合位点,发现仅有PDLIM5存在P值小于0.05的结合位点。结论hsa-miR-17-5p靶基因参与多种生物学过程,而且PDLIM5、KCNB1、BTBD7基因很可能是hsa-miR-17-5p对多发性硬化症产生影响的重要桥梁,其中PDLIM5尤为重要。

circZNF652靶向调控miR-17-5p对糖氧剥夺诱导的人脑血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨circZNF652对糖氧剥夺(OGD)诱导的人脑血管内皮细胞(HBVEC)损伤的影响及其对miR-17-5p的调控作用。方法OGD诱导HBVEC建立细胞损伤模型,HBVEC中分别转染si-NC、si-circZNF652、miR-NC、miR-17-5p mim-ics后进行OGD处理,共转染si-circZNF652与anti-miR-NC、si-circZNF652与anti-miR-17-5p后进行OGD处理;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circZNF652与miR-17-5p表达量;根据试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;CCK-8实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测circZNF652与miR-17-5p的靶向关系;Western印迹检测蛋白水解酶(CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-12蛋白表达量。结果OGD诱导的HBVEC中circZNF652表达水平与LDH、MDA水平明显升高,凋亡率与CHOP、Caspase-12蛋白水平明显升高,miR-17-5p表达水平与SOD活性明显降低,细胞存活率明显降低(P<0.05);转染si-circZNF652或转染miR-17-5p mimics后OGD诱导的HBVEC中miR-17-5p表达水平与SOD活性明显升高,细胞存活率明显升高,LDH、MDA水平明显降低,凋亡率与CHOP、Caspase-12蛋白水平明显降低(P<0.05);circZNF652可靶向调控miR-17-5p;共转染si-circZNF652与anti-miR-17-5p可明显逆转转染si-circZNF652对细胞增殖、氧化应激及凋亡的作用。结论干扰circZNF652表达可靶向调控miR-17-5p促进细胞增殖,缓解氧化应激,并通过抑制内质网应激介导的细胞凋亡途径进而减轻OGD诱导的HBVEC损伤。

miR-17-5p在子宫内膜异位症中的研究进展

子宫内膜异位症(EMs)是一种雌激素依赖性疾病,近来的发病人群呈现年轻化趋势,严重影响患者身心健康,但其发病机制仍不明确。最近的研究表明,微小RNA(miRNA)在子宫内膜异位症的发展中起着重要作用。通过对与EMs病理生理相关的miRNA进行研究,了解子宫内膜异位症的发病机制和病理生理机制对于开发新的诊断及治疗方法至关重要。miR-17-5p作为其中一种微小RNA,对照在位的子宫内膜,异位的子宫内膜中miR-17-5p则显著下调,故本篇综述将通过对miR-17-5p的增殖、侵袭、迁移、血管形成、不孕等方面进行文献综述。

miR-17-5p通过靶向HDAC4抑制PMEC细胞凋亡及促进EMT

目的 探讨miR-17-5p在人肺黏液表皮样癌(PMEC)中的作用及其潜在机制。方法 实时荧光定量PCR(qPCR)检测PMEC组织和细胞中miR-17-5p的表达。CCK-8、细胞凋亡和Transwell实验评估miR-17-5p对PMEC细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。生物信息学预测及荧光素酶报告基因检测验证组蛋白去乙酰酶4 (HDAC4)为miR-17-5p靶标。蛋白印迹分析上皮-间充质转化(EMT)相关信号分子N-钙黏蛋白、波形蛋白及凋亡相关信号分子Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3的表达。结果 miR-17-5p和HDAC4在PMEC中高表达。miR-17-5p促进PMEC细胞增殖、迁移、侵袭并抑制细胞凋亡。HDAC4是miR-17-5p的直接靶标。miR-17-5p正向调控HDAC4表达。同时,miR-17-5p通过靶向HDAC4上调N-cadherin、Vimentin和Bcl-2的表达,下调Bax和Cleaved Caspase-3的表达。结论 miR-17-5p在PMEC中通过靶向HDAC4促进细胞增殖和EMT,抑制细胞凋亡。表明miR-17-5p/HDAC4通路参与了PMEC的进展。miR-17-5p有望成为PMEC治疗的靶标。

lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2分子轴调控非小细胞肺癌细胞增殖及迁移

目的:探讨lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2分子轴调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖及迁移的分子机制。方法:收集2017年6月至2018年6月承德市中心医院62例NSCLC组织及对应的癌旁组织标本,以及NSCLC细胞系A549、NCIH1299、H1650、NCI-H460和人肺上皮细胞BEAS-B,用qPCR法检测NSCLC组织及细胞系中HCG18、miR-17-5p及高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的表达水平。分别用Si-HCG18、miR-17-5p、miR-17-5p+HCG18或pcDNA3.1-HMGA2转染A549和NCI-H460细胞,用CCK-8法、Transwell实验、Wb检测转染细胞的增殖、迁移、侵袭和HMGA2及EMT相关蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因验证HCG18对miR-17-5p或miR-17-5p对HMGA2的靶向调控作用。构建敲降HCG18的A549细胞小鼠移植瘤模型,观察对移植瘤的影响。结果:lncRNA HCG18在NSCLC组织和细胞中均高表达(均P<0.01),发生淋巴结转移及晚期NSCLC患者中HCG18的表达显著提高,且HCG18高表达的NSCLC患者预后较差、生存率较低(均P<0.01)。转染Si-HCG18显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭能力(均P<0.01),上调上皮钙黏蛋白的表达(P<0.01)、下调神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达(均P<0.01),小鼠移植瘤体积显著减小(P<0.05)。双荧光素酶报告基因验证了HCG18与miR-17-5p靶向结合,以及miR-17-5p与HMGA2靶向结合。转染miR-17-5p后NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭受到抑制(均P<0.01),促进上皮钙黏蛋白的表达(P<0.01)、抑制神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达(均P<0.01),而转染miR-17-5p+HCG18后可抑制miR-17-5p的作用。结论:HCG18通过调控miR-17-5p/HMGA2分子轴促进NSCLC细胞的增殖及迁移。

miR-125a-3p和miR-17-5p在激素性股骨头坏死中的作用

目的探讨激素性股骨头坏死中miRNA的差异性表达变化。方法取激素性股骨头坏死的坏死区域骨组织为实验组,其股骨颈基底部骨组织为对照组;分别提取总RNA并进行质检;采用miRNA芯片技术检测miRNAs的表达并对其表达谱进行分析;运用实时定量PCR对差异明显的miR-125a-3p和miR-17-5p进行验证。结果对激素性股骨头坏死中miRNA表达谱进行差异性分析。和对照组相比,实验组中倍数大于2倍,P<0.05的miRNA共有11个。8个miRNA表达上调,3个表达下调。实时定量PCR证实miR-125a-3p在坏死标本中高表达,而miR-17-5p呈现低表达,与miRNA芯片结果一致。结论激素性股骨头坏死区域骨组织与对照组相比miRNAs表达发生明显变化,以miR-125a-3p和miR-17-5p差异最为明显。这表明了它们最有可能参与了激素性股骨头坏死病理过程的调控。

miR-17-5p、miR-17-3p和miR-20a-5p在胃间质瘤中表达

目的探讨miR-17-5p、miR-17-3p及miR-20a-5p在胃间质瘤(gastric stromal tumor,GST)中的差异表达及其与临床病理因素的关系。方法提取正常胃组织及GST组织共72例标本的总RNA,应用Real time RT-PCR方法检测miR-17-5p、miR-17-3p及miR-20a-5p的表达,用SPSS 19.0分析其与临床病理因素的关系及3个miRNA间的相关性。结果在GST中,miR-17-3p、miR-17-5p在肿瘤组织中表达较胃正常组织低(P<0.001),但是在低危组和中高危组GST中表达差异无统计学意义(P>0.05);miR-20a-5p表达在胃正常组织、低危组和中高危组之间均有差异表达,且随着恶性度的增加而下降(P<0.001),3种miRNA的表达水平与肿瘤的侵袭、转移、年龄、肿瘤最大直径和核分裂象密切相关,而与瘤体是否破溃无关。结论 miR-17-5p、miR-17-3p、miR-20a-5p在GST中下调并相互作用可能是促进GST发生、发展因素之一。

转染miR-17-5p对PC12细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和形态学影响

目的:观察基因miR-17-5p转染对PC12细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和形态学影响。方法:用质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFP-N1-miR-17-5p表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、miR-17-5p组。应用免疫细胞化学染色法和Western-blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,电镜观察各组细胞超微结构改变。结果:对照组与空载组Bcl-2、Bax蛋白表达无显著性差异,miR-17-5p组与空载组比较,Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.01),而Bax蛋白表达明显增多(P<0.01),Western blot检测其凋亡相关蛋白表达变化与免疫组化结果一致。电镜下观察可见正常对照组与空载组细胞形态无明显差异,细胞形态结构正常,无明显病理改变;miR-17-5p转染组细胞胞体肿胀,线粒体髓样变和空泡样变,胞核扭曲凹陷,异染色质边集。结论:miR-17-5p基因过表达能引起PC12细胞促凋亡的Bax蛋白表达增多,抗凋亡的Bcl-2蛋白表达减少,导致PC12细胞形态学损伤。

miR-17-5p靶向PI3K/AKT信号通路调控皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的机制

目的探讨miR-17-5p靶向磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路调控皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的机制。方法实时荧光定量(qRT)-聚合酶链式反应(PCR)检测HaCaT和A431细胞中miR-17-5p的表达。构建抑制miR-17-5p表达A431细胞株,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测PIK3R1、p-AKT、p-PI3K、细胞周期素(Cyclin)D1、Bax和Bcl-2蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因法和Western印迹验证miR-17-5p和PIK3R1的靶向关系。结果qRT-PCR检测结果显示A431细胞中miR-17-5p的表达显著高于HaCaT(P<0.05)。MTT法、流式细胞术和Western印迹结果证实在抑制miR-17-5p表达的A431细胞中,p-AKT、p-PI3K、CyclinD1和Bcl-2的表达明显下调,PIK3R1和Bax的表达显著上调,细胞的增殖活力减弱,凋亡率增加(均P<0.05)。PI3K/AKT信号通路激活剂胰岛素样生长因子(IGF)-1可以逆转抑制miR-17-5p表达对A431细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论miR-17-5p通过靶向下调PIK3R1激活PI3K/AKT信号通路促进皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖,抑制细胞凋亡。

miR-17-5p在胶质瘤细胞中的作用机制

目的研究miR-17-5p在胶质瘤细胞中的作用机制。方法通过qRT-PCR检测miR-17-5p在胶质瘤细胞中表达及克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞术验证胶质瘤细胞的增殖迁移及放疗敏感性。结果 miR-17-5p在胶质瘤组织样本高于癌旁正常组织,在胶质瘤细胞系高于正常星状细胞。转染miR-17-5p mimics后,促进细胞增殖侵袭;转染miR-17-5p ASO后,降低细胞增殖和侵袭能力。转染miR-17-5p组胶质瘤细胞的凋亡细胞百分比显著低于对照组。结论 miR-17-5p在胶质瘤细胞中促进细胞增殖及迁移,同时具有降低胶质瘤细胞对放疗敏感性的作用。