MITF基因缺失突变致Waardenburg综合征2A型1例

Waardenburg综合征(Waardenburg syndrome,WS)是一种常染色体显形遗传疾病,以毛发、皮肤、眼睛色素异常以及感音神经性听力障碍为特征。本文报告1例8月龄男患儿,表现为先天性耳聋伴双侧虹膜灰蓝色、毛发颜色偏黄、内眦外移。患儿及其家系成员均进行基因测序分析。基因检测结果表明患儿存在MITF基因的c.970_972del(p.R324del)杂合变异,为新生变异;患儿父母该位点均无变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会(American College of Medical Genetics and Genomics,ACMG)指南判读该变异为致病变异。MITF基因c.970_972del(p.R324del)在WS2A型中为一新发突变位点,是导致该患儿患病的致病基因。

MITF基因在B16-F10细胞中的表达分析

实验研究B16-F10细胞增殖、分化过程中MITF基因的表达情况,探究小眼畸形相关转录因子(MITF)对黑色素细胞增殖、分化的影响。结果显示:在增殖阶段前期,B16-F10细胞快速生长,MITF基因相对表达量也快速增加,在3 d、5 d、7 d的表达量极显著高于1 d(P<0.01);在分化阶段,B16-F10细胞的数量越来越少,黑色素分泌越来越多,MITF基因相对表达量先下降后上升,5 d时极显著低于1 d和3 d(P<0.01),显著低于7 d(P<0.05)。推测MITF基因高表达对黑色素细胞的增殖和分化均有促进作用。

新疆山羊皮肤组织中MC1R·Agouti和MITF基因的差异表达研究

[目的]研究MC1R、Agouti和MITF基因在不同毛色新疆山羊皮肤组织中的差异表达,为确定其与新疆山羊毛色形成的相关性提供依据。[方法]采用实时荧光定量PCR技术,检测3种不同毛色(白色、褐色、黑色)新疆山羊皮肤组织中MC1R、Agouti和MITF基因mRNA的表达差异。[结果]MC1R、Agouti及MITF基因mRNA在不同毛色新疆山羊皮肤组织中均有表达;MC1R、MITF基因mRNA在黑色新疆山羊皮肤组织中的表达量高于褐色和白色新疆山羊(P>0.05),Agouti基因mRNA在白色新疆山羊皮肤组织中的表达量显著高于褐色和黑色新疆山羊(P<0.05)。[结论]MC1R、Agouti和MITF基因对新疆山羊毛色形成有一定影响,为今后新疆山羊毛色选育与品种改良提供了参考。

坝上长尾鸡MITF基因核心启动子鉴定与分析

旨在探明坝上长尾鸡小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)基因启动子活性区与结构,为研究MITF基因在毛囊组织中的表达调控提供依据。本研究采用双荧光素酶表达载体的方法,构建了6个含有不同长度坝上长尾鸡MITF基因启动子片段的pGL3-Basic表达载体及4个核心启动子区突变载体,转染DF1细胞48h后检测双荧光素酶活性。结果,确定了鸡MITF基因启动子的核心区域为-660^+200bp。其中突变位点-579bp、-505bp、-274bp、-220bp、-203^-202bp、-98bp、-46bp、-14bp、+1bp、+28bp对MITF基因启动子活性有较大影响,在突变区域预测到HOX家族(HOXA3、HOXD8、HOXD9、HOXD10、HOX11)、NF-1、DBP、TFIID和TFIIB与MITF序列的结合性发生了变化。

Waardenburg综合征Ⅱ型患者MITF基因突变分析

Waardenburg综合征(WS)是临床上常见的常染色体显性遗传性耳聋综合征,MITF基因突变与部分Waardenburg综合征Ⅱ型(WS2)病例的发病有关。MITF属于碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链转录因子家族,能调节酪氨酸酶基因,参与黑色素细胞的分化。文章报道了1个携带MITF基因点突变的3代Waardenburg综合征Ⅱ型中国家系。先证者表现为先天性重度感音神经性聋、虹膜异色、面部雀斑;其他家系成员除一名仅表现为先天性耳聋外,均表现为颜面、上肢雀斑和/或早白发。患者可检测到c.639delA杂合突变,该突变在MITF基因第7外显子上产生了终止密码子(p.I220X),突变产生的截短的MITF蛋白没有DNA结合活性。该突变是WS2病例中第3个位于MITF第7外显子的突变,尚未见报道。该突变与已报道的位于第7外显子其他两个突变仅相差1个碱基,氨基酸改变十分相似,但在表型上有显著差别,提示遗传背景对WS临床表型有重要影响。

不同物种Mitf基因编码区生物信息学分析

[目的]对不同物种Mitf基因编码区(CDS)进行生物信息学分析。[方法]采用生物信息学方法分析了小家鼠、褐家鼠、人、黑猩猩、狨、毛猩猩、猕猴、家马、大熊猫、野猪、原鸡和非洲爪蟾Mitf基因编码区的遗传多样性,并对Mitf氨基酸序列、组成成分、导肽、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、蛋白质二级结构和结构域进行预测和推断。[结果]在12个物种的37条Mitf基因CDS序列中,共检测到466个多态位点,生成16种单倍型,Mitf基因序列编码区在种内及种间存在丰富的遗传多样性;Mitf蛋白理论等电点均低于7,呈酸性,N端无信号肽,无跨膜结构域,肽链表现为亲水性;蛋白质二级结构的主要元件为α-螺旋和无规则卷曲,有2个保守结构域。[结论]该研究为探明Mitf基因在不同种间和种内的遗传分化,进而为相关黑色素基因的遗传学和进化分析奠定了基础。

Waardenburg综合征II型中国家系MITF基因突变分析

目的探讨Waardenburg综合征II型中国家系的临床和分子遗传学特征。方法收集两个Waardenburg综合征II型中国家系详细的临床资料并绘制家系图谱,签署知情同意书获取血样。聚合酶链反应扩增MITF基因编码区的全部外显子,在ABI3100自动测序仪上进行正反向测序,利用GeneTool软件及遗传学网站的信息分析数据。结果Waardenburg综合征II型临床表现变异较大,不是所有的患者均满足Waardenburg综合征II型的诊断标准,眼睛色素分布异常(蓝虹膜)和正常的内眦间距是临床上最常见的表型特征。MITF基因第1、7号外显子在两个家系中分别检测到一个错义突变和一个缺失突变,50例正常对照组均未检测到这两种突变。结论本文对两个Waardenburg综合征II型家系做出分子水平的基因诊断,其详细的临床资料有助于对该综合征的进一步认识;新的基因突变位点不仅丰富了人类基因突变数据库,而且为更好地了解MITF基因的功能提供了新的线索。

鹌鹑MITF基因的克隆、表达及启动子甲基化研究

【目的】研究MITF基因在鹌鹑胚胎发育过程中的表达变化及其与羽色形成的关系,分析启动子甲基化对MITF基因表达的影响。【方法】利用RT-PCR克隆鹌鹑MITF基因mRNA的CDS区域并进行DNA测序,对得到的序列进行BLAST比对等生物信息学分析。利用RT-qPCR分析MITF基因在栗羽朝鲜鹌鹑和北京白羽鹌鹑胚胎发育第6、8、10、12和14天的表达变化。克隆朝鲜鹌鹑和北京白羽鹌鹑MITF基因的启动子区域并进行DNA测序,利用BS-PCR分析启动子CpG岛的甲基化水平。【结果】鹌鹑MITF基因与日本鹌鹑同源基因相似度达99%,包含1476 bp的开放阅读框,编码蛋白由492个氨基酸残基组成,没有信号肽和明显的跨膜区,成熟蛋白位于细胞核中。在胚胎发育的6~12 d,朝鲜鹌鹑MITF基因m RNA表达水平显著或极显著高于北京白羽鹌鹑(P<0.05或P<0.01)。鹌鹑MITF基因启动子区域包含丰富的顺式作用元件和1个346 bp的CpG岛,朝鲜鹌鹑MITF基因启动子区域的平均甲基化水平为18.52%,北京白羽鹌鹑的平均甲基化水平为29.63%,两者差异显著(P<0.05)。【结论】北京白羽鹌鹑MITF基因启动子区域高甲基化状态导致其表达水平下降,这与其羽色白化有一定的关系。

MITF基因对家畜色素沉积性状影响的研究进展

家畜的身体着色性状不仅是其重要的天然表型特征,也对经济效益和遗传育种极具意义,色素沉积性状由黑色素的种类、含量及分布决定,而MITF基因在调控黑色素合成的多个生物学途径中发挥着显著作用。就MITF基因对家畜色素沉积有关性状影响的研究进展进行综述,旨在增进对家畜身体色素沉积性状机制的理解,为深入探索动物皮肤色素沉积性状形成的分子机制、人类色素沉积相关疾病的诊断与治疗提供参考。

MITF基因在软组织透明细胞肉瘤中的表达及意义

目的:通过RT-PCR及免疫组织化学染色检测小眼畸形相关转录因子(MITF)mRNA及MITF蛋白的表达来探讨透明细胞肉瘤(CCS)的组织发生与起源。方法:收集5例CCS冰冻新鲜组织标本,24例福尔马林固定石蜡包埋组织标本。RT-PCR方法检测5例冰冻组织标本MITF基因mRNA的表达;24例CCS石蜡组织标本采用过氧化物酶染色(SP)方法进行免疫组化染色,检测S-100、HMB-45、MITF蛋白的表达。管家基因GAPDH为内参照。结果:4例CCS冰冻组织标本中检测到GAPDH mRNA表达,100%(4/4)检测到MITF mRNA表达。24例CCS石蜡组织标本中S-100、HMB-45及MITF总阳性率分别为79.2%(19/24)、70.8%(17/24)、83.3%(20/24)。结论:CCS中MITF在基因和蛋白水平高表达为神经嵴组织起源学说提供了依据。

MITF基因突变对听力损伤患儿内耳发育的影响

目的 探讨MITF基因突变对听力损伤患儿内耳发育的影响。方法 选取2019年1月—2020年6月在我院诊治的听力损伤患儿140例作为观察组研究对象,同期选择听力正常儿童140例作为对照组研究对象。采用MRI对研究对象的蜗神经直径、横截面积、横截面周长进行测量,同时提取研究对象血液中基因组DNA,检测MITF基因突变情况。结果观察组研究对象的MITF基因突变率为13.6%,高于对照组的0.7%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组研究对象的蜗神经直径、横截面积、横截面周长均小于对照组,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MITF基因突变可影响儿童的蜗神经直径、横截面积、横截面周长,从而导致内耳发育异常,其与听力损伤的发生与发展相关。

北极狐MITF基因启动子及转录因子的研究

为了对北极狐小眼畸形相关转录因子（MITF）基因启动子进行预测及对转录因子进行分析,以家犬MITF基因序列为参考,设计引物并利用PCR扩增获得北极狐MITF基因启动子区,通过TSSW和TSSG等软件对北极狐MITF基因启动子、转录因子等进行预测和分析。结果表明：北极狐MITF基因的-2 154 bp处为候选启动子区,核心启动子区在-242--193 bp处,转录起始位点在-202 bp处;北极狐MITF基因的启动子区无CpG岛,结构较为简单,无甲基化现象,但存在与毛色有关的Sp1、CREB和ATF等转录因子,推测这些转录因子可能影响北极狐毛色的代谢通路。

一个非综合征型聋家系MITF基因致病性新突变

目的研究一个非综合征型聋家系的致病基因突变。方法通过家系调查、临床检查和遗传学特征分析,对一个非综合征型聋家系的临床表型及致病原因进行分析,提取家系成员的外周血DNA,应用遗传性耳聋基因芯片结合耳聋基因靶向测序筛选致病基因,然后利用Sanger测序对发现的致病基因位点进行验证,分析该突变位点在各物种中的保守性及该突变位点所在的结构域;通过Swiss model工具进行同源建模模拟蛋白质的三维结构,观察MITF基因突变前后对蛋白功能的影响;利用蛋白功能预测软件REVEL进行变异致病性的预测。结果该家系包含3代15人,先证者(Ⅲ-4)、姐姐(Ⅲ-3)、母亲(Ⅱ-4)及外婆(Ⅰ-4)4人被诊断为先天性双侧感音神经性聋,未发现皮肤毛发色素改变、虹膜异色、内眦间距异常、上肢异常、巨结肠等;父亲(Ⅱ-3)及其他家属(Ⅱ-5)表型正常。9项遗传性耳聋基因芯片筛查未发现致病突变;耳聋基因靶向测序结果显示先证者携带MITF基因的一个单杂合变异MITFc.730G>A(p.Gly244Arg,NM_000248),Sanger测序结果验证了先证者(Ⅲ-4)、患者Ⅰ-4、Ⅱ-4、Ⅲ-3的MITF基因c.730G>A(p.Gly244Arg,NM_000248)突变,变异来源于母亲,父亲未发现该位点的变异;该变异为杂合错义突变,在各物种中高度保守并位于bHLH-Zip结构域。Swiss model预测的蛋白质三维结构图显示,该位点突变可能通过影响MITF基因与非特异性DNA的结合从而影响该蛋白质的功能。REVEL分析结果为D(预测为有害),提示可能为一个潜在的致病位点。结论MITF基因c.730G>A(p.Gly244Arg,NM_000248)位点可能为该非综合征型聋家系的致病突变。

MITF基因在瓦登伯格综合征Ⅱ型中的突变分析

目的探讨1例瓦登伯格综合征(WS)家系遗传性致病因素,以期通过遗传咨询而实现WS型耳聋的一级预防。方法纳入三代5名家系成员(汉族)为研究对象,详细询问病史,采集外周静脉血并抽提DNA,采用Sanger测序对3大常见耳聋基因和瓦登伯格综合征候选基因进行全序列筛查。结果MITF基因截短突变c.C763T(p.R255X)在该家系内呈现基因型-表型共分离。结论截短突变c.C763T导致第255位精氨酸密码子突变为终止密码子,蛋白质合成提前终止,很可能为该家系的遗传性致病因素。MITF蛋白正常功能丧失所致的单倍体剂量不足很可能为该突变的致病机制。遗传咨询、婚育指导和产前诊断技术的应用,可避免由该突变导致的后代耳聋。

中华鳖(Pelodiscus sinensis)MITF基因的生物信息学及表达差异研究

小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)是一种黑色素细胞重要的转录因子。本研究通过中华鳖(Pelodiscus sinensis)的肝脏组织进行转录组测序,获得MITF基因的全长序列,生物信息学分析结果显示中华鳖MITF基因5’和3’非编码区分别为32bp和175bp,开放阅读框1512bp,编码503个氨基酸,预测蛋白分子质量为56kDa,理论等点电为6.06。中华鳖MITF蛋白二级结构预测显示,α-螺旋(Alpha helix)占25.37%,延伸链(Extended strand)占20.90%,β-转角(Beta-turn)占7.76%,无规则卷曲(Random coil)占45.97%。氨基酸序列多重比对分析显示,中华鳖MITF基因核苷酸序列与绿海龟、西部锦龟、美国短吻鳄、非洲爪蟾和人的同源性分别为93%、93%、85%、58%和76%。构建进化树分析表明,中华鳖与西部锦龟、绿海龟MITF基因分子进化距离最近,亲缘关系最密切。实时荧光定量PCR对中华鳖8个组织MITF基因表达差异性研究结果表明,该基因在中华鳖的肌肉表达量最高,心脏次之,二者存在显著性差异,肝脏、脾脏、肺、肾脏、眼、皮肤等组织表达量相对较少,显著低于肌肉和心脏。这些研究结果不仅为研究中华鳖MITF基因在黑色素合成过程中的重要作用提供理论基础,还有助于了解龟鳖类体色调控的内在机理,同时也可为中华鳖等爬行动物的遗传育种提供参考。

SCF基因参与哺乳动物肤色和毛色表型形成的研究进展

毛色作为动物重要表型之一一直是人们的研究热点。干细胞因子(stem cell factor, SCF)基因参与动物细胞发育(包括毛色形成),在启动子水平调节黑色素细胞特异性小眼转录因子(protein and melanocyte-specific microphthalmia-related transcription factor, MITF)的mRNA表达,且在不同物种中参与机体内外环境刺激(主要是紫外线辐射)导致的色素沉着过程,在黑色素细胞迁移和存活、斑点(roan)表型及某些疾病中起重要作用。笔者对SCF基因的结构性质及在哺乳动物黑色素合成及肤色和毛色形成中的作用机制研究进展进行综述,旨在为进一步探究SCF基因的分子机制提供思路和见解。

MITF基因的新突变导致Waardenburg综合征Ⅱ一例

患者男，15岁。出生后即被家人发现双侧虹膜为亮蓝色，皮肤白，头发淡黄（图1），至1岁时发现不会讲话且对外界声音刺激无反应。无耳外伤史、中耳炎史、耳毒性药物性接触史。5岁时出现早白发，6-7岁时面部、颈背和四肢等阳光暴露部位逐渐出现大量黄褐色雀斑（图1）。无家族史。15岁就诊时外耳，外耳道，鼓膜正常，双耳极重度感音神经性聋。耳声发射：双侧未通过，声导抗示双侧“A”型图，脑干诱发电位（正常听力级）示双侧103dB及40Hz相关电位均无诱发波。

大鲵MITF基因的克隆、序列分析与表达分析

MITF转录因子影响动物的体色和毛色。为研究MITF在两栖动物体色形成过程中的作用,本研究结合转录组分析和电子克隆技术得到大鲵(Andrias davidianus)MITF基因部分cDNA序列,并对其进行了生物信息学分析,使用实时荧光定量PCR检测了大鲵MITF基因在皮肤、肝脏等10个组织中的表达情况,并检测了4种不同体色大鲵皮肤组织中MITF基因的表达量。数据分析显示,大鲵MITF基因CDS区序列长1560 bp,编码519个氨基酸。蛋白质同源性分析表明,与其他物种一致,大鲵MITF蛋白具有保守bHLH-zip结构域,其蛋白质序列与两栖类和爬行类序列相似性较高,与哺乳动物和鸟类相似性较低。系统进化分析显示,大鲵MITF单独形成一支。实时定量PCR分析表明,MITF基因在大鲵不同组织中均有表达,以性腺组织中的表达量最高。4种不同类型体色大鲵皮肤组织中,黑色皮肤中的MITF基因mRNA表达量高于其他体色的。大鲵MITF基因独特的序列特征及其表达的组织特异性暗示了其在两栖动物体色形成过程中可能具有与其他物种不同的调控机制。这些数据为进一步研究MITF在大鲵体色形成过程中的作用提供了基础资料。

MITF基因表达与绵羊季节性发情及产羔数关系初探

为初步探究MITF基因表达和绵羊季节性发情及产羔数的关系,本试验以季节性发情的苏尼特羊(Sunite sheep,SNT)和常年发情的小尾寒羊(Small Tail Han sheep,STH)为研究对象,利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析SNT在不同光照条件下(短光照、长光照)及STH不同繁殖时期(卵泡期、黄体期)的下丘脑等组织中MITF基因的表达差异及该基因在STH单、多羔母羊卵泡期繁殖器官(卵巢、子宫体、输卵管)中的表达差异。结果表明:1)MITF基因在2个绵羊品种的不同组织中广泛表达且繁殖器官(卵巢、子宫体和输卵管)中该基因表达量较高;2)在长光照条件下SNT垂体中MITF表达量极显著高于短光照条件下表达量(P<0.01);3)STH卵巢中MITF表达量在卵泡期极显著高于黄体期(P<0.01),而子宫体、输卵管中该基因表达量在黄体期显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于卵泡期;4)单羔组STH子宫体、输卵管中MITF表达水平极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)高于多羔组。综上,MITF基因表达与绵羊季节性发情及产羔数存在一定关联,需要进一步进行生物学功能验证。

中国人Waardenburg氏综合征Ⅱ型MITF突变基因分析

目的 :研究中国人Waardenburg综合征Ⅱ型MITF突变基因特点 ,从分子水平对Waardenburg综合征进行鉴别诊断 ,深化Waardenburg氏综合征的分子病理。方法 :利用SSCP分析PAX3及MITF所有外显子的PCR扩增产物。结果 :1个家系 9人份血样中PAX3均正常 ,而先证者MITF基因第 7号外显子DNA双链整段缺失。结论 :该项研究表明尚属首次报道的MITF基因外显子 7上的缺失突变 ,丰富了Waardenburg氏综合征的病因学内容 ,为该病的病因学研究和临床研究提供了有用的资料。