线粒体损伤对山羊-绵羊异种核移植胚早期发育的影响

【目的】研究线粒体损伤对核移植胚早期发育的影响。【方法】用经光敏化染料罗丹明-123损伤的山羊胎儿成纤维细胞和绵羊卵母细胞,构建山羊-绵羊异种体细胞核移植胚,于38.5℃、相对湿度100%、体积分数5%CO2条件下培养,统计其2-细胞期、8-细胞期和囊胚期的发育率。【结果】山羊核供体线粒体损伤并不影响囊胚期前核移植胚的发育率(P>0.05);绵羊卵母细胞线粒体损伤,使核移植胚2-细胞期的发育率下降(P<0.05),但不影响8-细胞期和囊胚期的发育率(P>0.05);核供体和卵母细胞线粒体都损伤的核移植胚发育率的变化规律与卵胞质受体线粒体损伤的核移植胚一致。【结论】在异种核移植胚的早期发育中,核供体线粒体损伤不影响核移植胚的发育,但卵母细胞受体线粒体损伤明显影响核移植胚的发育率。

人-牛异种克隆胚构建及其线粒体来源

通过人-牛异种核移植技术获得异种克隆囊胚,便于在不消耗人类卵母细胞的情况下从异种克隆胚中分离出人类干细胞。通过透明带下注射法将人胎儿成纤维细胞和牛胎儿成纤维细胞分别注入去核牛卵母细胞中构建异种和同种胚胎,并比较两者之间的融合率、卵裂率、8-细胞发育率以及囊胚率。并对处于2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑椹胚、囊胚阶段的异种克隆胚的线粒体DNA来源进行检测。结果表明,异种克隆胚体外各个阶段的发育率均低于同种克隆胚,尤其是8-细胞到囊胚阶段的发育率,以及囊胚率都显著低于同种克隆胚(P<0.05)。异种克隆胚在2-细胞到桑椹胚阶段检测到人、牛线粒体DNA共存,囊胚阶段只检测到牛线粒体DNA。结果表明:牛卵母细胞可以重编程人胎儿成纤维细胞,完成异种克隆胚植入前的胚胎发育,异种克隆胚由于核质相互作用的不谐调,影响其发育能力,使其囊胚率显著低于同种克隆胚。牛线粒体DNA存在于植入前异种胚胎发育的各个阶段。异种克隆胚胎用于人类胚胎干细胞分离具有可行性。

绵羊-绵羊和山羊-绵羊体细胞克隆胚的构建及体外发育研究

【目的】以绵羊卵母细胞为受体，构建绵羊一绵羊和山羊一绵羊体细胞克隆胚，比较其体外发育能力，探讨绵羊卵母细胞对异种体细胞核的再程序化能力。【方法】以体外成熟的绵羊卵母细胞为核受体，分别以绵羊及山羊胎儿成纤维细胞为核供体，经卵母细胞去核、注核、重构胚电融合、激活等一系列操作，构建同种绵羊一绵羊及异种山羊一绵羊体细胞的克隆胚，比较其体外发育能力。【结果】同种间克隆胚的囊胚发育率（16．0％）高于异种间克隆胚（7．4％）。异种间克隆胚在8-细胞到16-细胞及16-细胞到桑椹胚期间的发育能力显著低于同种间克隆胚。2种克隆胚在2-细胞到8-细胞期间的发育速度基本相同，但异种间克隆胚在8-细胞到囊胚期间的发育速度明显低于同种间克隆胚，两者相差12～24h。【结论】绵羊卵母细胞对异种体细胞核具有再程序化能力，但这种再程序化能力明显低于其对同种体细胞核的再程序化能力。