超声弹性成像联合血清miR-26b-5p及环氧化酶-2检测对早期子宫肌瘤的临床诊断价值

目的:探讨超声弹性成像联合血清微小RNA-26b-5p(miR-26b-5p)、环氧化酶-2(COX-2)检测对早期子宫肌瘤的诊断价值。方法:选取2020年10月至2022年9月在无锡联勤保障中心第九〇〇医院诊断的228例疑似子宫肌瘤患者,以病理切片检查结果为“金标准”,将其分为阳性组(124例)和阴性组(104例),两组均行超声弹性成像检查,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测患者血清miR-26b-5p表达水平,酶联免疫吸附法检测血清COX-2水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC),分析血清miR-26b-5p、COX-2对子宫肌瘤的诊断价值,采用四表格法分析超声弹性成像以及超声弹性成像联合血清miR-26b-5p、COX-2对子宫肌瘤的诊断价值。结果:经病理切片检查,228例患者中子宫肌瘤阳性124例,阴性104例;超声弹性成像结果显示阳性117例,阴性111例,超声弹性成像检查诊断的灵敏度为74.19%,特异度为75.96%,准确率为75.00%。阳性组患者血清miR-26b-5p水平明显低于阴性组,COX-2水平明显高于阴性组,两组比较差异有统计学意义(t=4.519、5.601,P<0.05)。血清miR-26b-5p诊断子宫肌瘤的AUC为0.749,灵敏度为95.97%,特异度为46.15%,最佳截断值为1.10;血清COX-2诊断子宫肌瘤的AUC为0.835,灵敏度为66.13%,特异度为84.62%,最佳截断值为40.58 mg/L;超声弹性成像联合血清miR-26b-5p、COX-2诊断的灵敏度为93.55%,特异度为86.54%,准确率为90.35%,与单独诊断比较差异有统计学意义(χ^(2)=23.158、17.169,P<0.05)。结论:超声弹性成像联合血清miR-26b-5p、COX-2诊断早期子宫肌瘤具有较高的效能。

miR-92b-5p、HMGB1与2型糖尿病肾病患者肾功能的相关性

目的探讨微小核糖核酸-92b-5p(miR-92b-5p)、血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与2型糖尿病肾病患者肾功能的相关性。方法选取2021年1月至2023年12月期间河南省驻马店市中心医院内分泌科收治的212例2型糖尿病肾病患者作为肾病组,另选取同期来本院就诊的单纯2型糖尿病患者95例作为2型糖尿病组。比较二组患者的肾功能相关指标以及miR-92b-5p、HMGB1水平;以Pearson相关性分析评估2型糖尿病肾病患者血清miR-92b-5、HMGB1水平与肾功能的相关性;以单、多因素Logistic回归分析2型糖尿病患者并发肾病的危险因素,并绘制受试者工作特性曲线(ROC)进一步评估miR-92b-5p、HMGB1二者联合检测对2型糖尿病患者并发肾病的预测价值。结果两组糖尿病病程、BUN、Scr、eGFR、miR-92b-5p以及HMGB1水平的比较差异有统计学意义(P<0.05);Pearson分析显示,HMGB1与BUN、Scr呈正相关,与eGFR呈负相关(r=0.570,0.646,-0.485,P<0.05);miR-92b-5与BUN、Scr呈负相关,与e GFR呈正相关(r=-0.526,-0.562,0.442,P<0.05)。多因素回归分析显示,糖尿病病程增加、BUN、Scr、HMGB1水平升高、eGFR、miR-92b-5p水平降低均是2型糖尿病患者并发肾病的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,miR-92b-5p、HMGB1以及二者联合检测曲线下面积为0.898、0.932、以及0.961(P<0.05)。结论2型糖尿病肾病患者肾功能异常可能与血清中miR-92b-5p表达量下降、HMGB1表达量上升有关,二指标可作为2型糖尿病肾病的有效预测指标。

miR-let-7b-5p靶向调控LIMD2对胃癌细胞间质-上皮转化的影响

目的:探究微小RNA(miR)-let-7b-5p靶向调控含LIM域2蛋白(LIMD2)对胃癌(GC)细胞间质-上皮转化(MET)的影响。方法:采用qRT-PCR检测GES-1、SCG-7901、MGC-803、BGC-823细胞中miR-let-7b-5p相对表达水平;构建绿色荧光蛋白(GFP)和miR-let-7b-5p稳定过表达细胞株,qRT-PCR法检测miR-let-7b-5p过表达效率;生物信息学和双荧光素酶实验预测并验证miR-let-7b-5p与LIMD2靶向关系;构建pcDNA5-LIMD2过表达载体,将细胞分为NC组、miR-let-7b-5p组、miR-let-7b-5p-pcDNA5组和miR-let-7b-5p-LIMD2组,Western Blot检测各组细胞中LIMD2、Vimentin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达;Transwell法检测miR-let-7b-5p对MGC-803细胞侵袭能力的影响。结果:与GES-1相比,SCG-7901、MGC-803、BGC-823细胞中miR-let-7b-5p相对表达水平明显下降(P<0.05)。与NC组相比,miR-let-7b-5p组miR-let-7b-5p相对表达量升高(P<0.05),转染LIMD2-WT的细胞相对荧光素酶活性明显降低(P<0.05),LIMD2、Vimentin、N-cadherin蛋白表达下调(P<0.05),而E-cadherin蛋白表达上调(P<0.05),细胞侵袭个数减少(P<0.05)。与miR-let-7b-5p组相比,miR-let-7b-5p-LIMD2组LIMD2、Vimentin、N-cadherin蛋白表达上调(P<0.05),而E-cadherin蛋白表达下调(P<0.05),细胞侵袭个数增多(P<0.05)。结论:过表达miR-let-7b-5p可靶向下调LIMD2促进胃癌细胞的MET,从而有效改善肿瘤细胞的侵袭。

长链非编码RNA alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1靶向微小RNA-106b-5p调控氧化型低密度脂蛋白诱导的人脑微血管内皮细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1(A2M-AS1)靶向微小RNA(miR)-106b-5p对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的影响。方法用ox-LDL诱导人脑微血管内皮细胞设为ox-LDL组,正常培养细胞为对照(Ctrl)组;A2M-AS1过表达(pcDNA-A2M-AS1组)、空载体(pcDNA组)、miR-106b-5p抑制剂(anti-miR-106b-5p组)、阴性对照(anti-miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与对照mimic NC(miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与miR-106b-5p模拟物(miR-106b-5p mimics组)转染细胞后加ox-LDL处理,n=9;Real-time PCR检测A2M-AS1与miR-106b-5p表达;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测A2M-AS1与miR-106b-5p靶向关系;Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达量。结果与Ctrl组比较,ox-LDL组A2M-AS1表达水平、SOD和CAT活性、Bcl-2蛋白水平降低,miR-106b-5p表达水平、MDA水平、凋亡率、Bax蛋白水平升高(P<0.05);过表达A2M-AS1或干扰miR-106b-5p降低ox-LDL诱导细胞后MDA水平、凋亡率与Bax蛋白水平,升高SOD、CAT活性和Bcl-2蛋白水平(P<0.05);A2M-AS1靶向miR-106b-5p;上调miR-106b-5p逆转过表达lncRNA A2M-AS1对ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的作用。结论A2M-AS1通过靶向miR-106b-5p减轻ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤。

miR-4433b-5p及SP-A在老年COPD患者病情严重程度及频繁加重风险中的价值

目的分析青海地区老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血浆miR-4433b-5p、基质金属蛋白酶(MMP)-2及肺泡表面活性蛋白(SP)-A表达水平变化及其临床意义。方法随机选取出院后定期随访的60岁以上COPD患者和健康体检者作为COPD组及对照组。所有受试者采集清晨空腹静脉血留取血浆。选择5例对照组及COPD组患者进行高通量测序。选择两组各35例为对照验证组和COPD验证组,收集血浆提取RNA后用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测miR-4433b-5p表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中MMP-2及SP-A的浓度,完善肺功能检查并进行为期1年的随访。结果以P值≤0.05且差异倍数(FC)≥2为判断标准,共筛选出老年COPD患者差异表达的miRNAs 159个,其中上调53个,下调106个,差异表达miRNAs靶基因信号通路主要富集于神经生长因子(NGF)等信号通路;与对照验证组相比,COPD验证组血浆MMP-2及SP-A浓度明显升高(P<0.05);血浆miR-4433b-5p与第1秒用力呼力量占预计值百分比(FEV1%)预计值呈显著正相关(r=0.429,P<0.05),而与1年急性加重次数呈显著负相关(r=-0.455,P<0.05);血浆MMP-2及SP-A与FEV1%预计值呈显著负相关(r=-0.462、-0.422,P<0.01、P<0.05),与1年急性加重次数呈显著正相关(r=-0.422、0.429,均P<0.05);二元Logistic回归分析显示,血浆miR-4433b-5p及SP-A可作为老年COPD频繁加重风险评估指标;受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)结果显示血浆miR-4433b-5p及SP-A联合预测AUC、灵敏度分别为0.866、82.6%,在预测老年COPD频繁加重风险评估中优于单标志物。结论老年COPD血浆中miR-4433b-5p表达降低,血浆miR-4433b-5p及SP-A可作为老年COPD患者严重程度评估及未来急性加重风险的危险因素。miR-4433b-5p可能通过调控MMP-2调控COPD病理学过程。

黄芪-丹参药对通过下调miR-466b-5p改善高血压肾损害

目的:探讨黄芪-丹参药对通过调节微小核糖核酸-466b-5P(miR-466b-5p)改善高血压肾损害的机制。方法:基于微RNA(miRNA)测序寻找自发性高血压大鼠与Wistar-京都鼠(WKY)的差异基因,构建腺相关病毒转染小鼠,24只C57BL/6小鼠,随机选取12只尾静脉注射小鼠腺相关病毒miR-466b-5P(rAAV-miR-466b-5P)构建miR-466b-5p过表达组,余12只作为空白对照组注射腺相关病毒-9(AAV-9)空载体,转染6周后再各随机分为2组,每组6只,A组(黄芪-丹参+miR-466b-5P过表达组)和C组(黄芪-丹参+空白对照组)以黄芪配方颗粒:2.036 g/kg+丹参配方颗粒:0.255 g/kg灌胃;B组(miR-466b-5P过表达组)和D组(空白对照组)以相同体积生理盐水灌胃;灌胃28 d后观察各组小鼠尿β2-微球蛋白(β2-MG)、N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)、微量白蛋白(mALB),血清胱抑素C(Cys-C)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、C反应蛋白(CRP)水平和肾脏病理,进行实时荧光定量(RT-qPCR)与蛋白质印迹法(Western Blotting)寻找其靶基因。结果:1)基于前期miRNA测序选定了miR-466b-5p;2)与D组比较,B组小鼠尿β2-MG、NAG、mALB、血清Cys-C、AngⅡ、CRP均显著升高(P<0.01);与B组比较,A组小鼠血清Cys-C、CRP明显升高(P<0.05),尿β2-MG、NAG、mALB、血清AngⅡ无明显改变(P>0.05);3)与D组比较,B组小鼠出现明显肾小球硬化、小管纤维化,A组较B组有明显改善;4)与D组比较,B组小鼠透明质酸酶2(HAS2)明显下调,而经黄芪-丹参干预后有所回调。结论:miR-466b-5p的过表达会导致高血压肾损害的发生,黄芪-丹参药对通过靶向HAS2下调miR-466b-5p改善高血压肾损害。

卵巢癌组织中miR-125B-5p通过调控己糖激酶-2降低肿瘤能量代谢和抑制肿瘤细胞增殖

背景与目的细胞内能量代谢异常是肿瘤的十大特征之一,微小RNA(microRNA,miRNA)可能通过调节有氧糖酵解相关酶的表达来介导有氧糖酵解,从而调控肿瘤细胞代谢和增殖。本研究对卵巢癌患者肿瘤组织中miR-125B-5p和己糖激酶-2(hexokinase-2,HK2)的表达水平与肿瘤能量代谢和增殖的关系进行了初步研究。方法采用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(reverse transcription quantitative real-time PCR,RT-qRCR)法检测了10例原发性卵巢癌患者的癌组织和配对的癌旁组织中HK2的mRNA和miR-125B-5p的表达水平。采用RT-qRCR法检测了人正常卵巢上皮细胞IOSE80和卵巢癌细胞SKOV3中miR-125B-5p的表达水平。采用MTT法检测转染了miR-125B-5p模拟物(miR-125B-5p mimics)或模拟对照miRNA(miR-125B-5p NC)的SKVO3细胞在不同时间点的增殖情况。采用RT-qPCR法检测转染了miR-125B-5p mimics或miR-125B-5p NC的SKVO3细胞中HK2的mRNA表达水平。采用流式细胞术分析转染了miR-125B-5p mimics或miR-125B-5p NC的SKVO3细胞的凋亡情况。检测转染了miR-125B-5p mimics或miR-125B-5p NC的SKVO3细胞中葡萄糖、乳酸和ATP水平。结果与配对的癌旁组织相比,在卵巢癌组织中miR-125B-5p表达下调,HK2的mRNA表达上调(P<0.05)。与转染miR-125B-5p NC的SKVO3细胞相比,在miR-125B-5p mimics转染12、36和72 h后,过表达miR-125B-5p的SKVO3细胞的增殖率显著降低(P<0.05),细胞活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡升高(P<0.05),HK2的mRNA表达下调(P<0.05),葡萄糖相对消耗量、乳酸相对生成量和ATP浓度降低(P<0.05)。结论miR-125B-5p通过负调控HK2降低卵巢癌细胞的糖酵解,从而抑制肿瘤细胞生长。

5'-氮杂-2'-脱氧胞苷对HT-29和LoVo结直肠癌细胞株中p16基因甲基化状态、mRNA表达及蛋白表达的影响

目的探讨甲基化酶抑制剂5'-氮杂-2'-脱氧胞苷(5'-Aza-2'-deoxycytidine,5'-Aza-CdR)对结直肠癌细胞株HT-29和LoVo中p16基因甲基化状态、mRNA及蛋白表达的影响。方法应用Taq Man探针为基础的实时定量PCR法、SYBR Green PCR法及蛋白印迹实验(Western blot)检测不同浓度5'-Aza-CdR处理前后HT-29和Lo Vo细胞中p16基因的甲基化状态、mRNA和蛋白表达。结果 Taq Man探针为基础的实时定量PCR法检测HT-29和Lo Vo细胞中p16蛋白在药物作用后异常甲基化得到逆转;实时荧光定量PCR和Western Blot检测到0.5、1.0、1.5μM 5'-Aza-CdR处理后p16基因mRNA和蛋白均重新表达,具有统计学意义(P均<0.05)。结论结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中p16启动子甲基化可能是导致该基因表达下调甚至失活的主要原因。5'-Aza-CdR能够较成功的逆转结直肠癌细胞株HT-29和Lo Vo中p16基因的甲基化状态,并能恢复mRNA及蛋白重新表达。

激素性股骨头坏死患者微小核糖核酸、骨形态发生蛋白-2、1型纤溶酶原激活物抑制剂表达水平及其临床意义

目的探讨激素性股骨头坏死患者血清微小核糖核酸-672-5p(miR-672-5p)、微小核糖核酸-29b(miR-29b)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达水平及其对激素性股骨头坏死的预测价值。方法选取2020年3月至2023年3月河南科技大学第一附属医院收治的116例激素性股骨头坏死患者作为病例组,根据国际骨循环研究会(ARCO)分期标准将其分为Ⅰ期组(41例)、Ⅱ期组(30例)和Ⅲ期组(45例),另选本院同期125例健康体检者作为对照组。比较病例组和对照组及不同ARCO分期激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1水平,利用受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标的预测价值。结果病例组患者的血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于对照组,血清BMP-2水平低于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ期组患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组高于Ⅰ期组(P<0.05);Ⅲ期组患者血清BMP-2水平低于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组低于Ⅰ期组(P<0.05)。激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平与ARCO分期呈正相关,BMP-2与ARCO分期呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1预测激素性股骨头坏死的AUC值均大于0.8(P<0.05),表明均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。结论激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1呈高表达,而血清BMP-2呈低表达,四者均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。

微小核糖核酸-125b-5p抑制Caspase 2蛋白酶活性缓解脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的研究

目的:MicroRNAs是一种转录后调控靶基因的非编码小RNA,被认为是心脏功能和疾病的重要调节剂,心脏损伤伴随着MicroRNAs表达的动态变化。本研究以脂多糖(LPS)诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,探究miR-125b-5p对Caspase 2蛋白酶活性和LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。方法:采用LPS诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,将miR-125b-5p转染于LPS诱导的H9c2心肌细胞中。RT-PCR检测miR-125b-5p和Caspase 2的表达水平;荧光素酶报告实验确定miR-125b-5p和Caspase 2的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹检测Caspase-2,Caspase-3,Caspase-9,Survivin,Bax/Bcl-2的蛋白表达;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果:用LPS诱导处理能显著降低miR-125b-5p的表达水平(P<0.05),促进Caspase 2表达(P<0.05)。荧光素酶报告实验表明Caspase 2上存在miR-125b-5p的结合位点,miR-125b-5p能靶向抑制Caspase 2活性(P<0.05)。miR-125b-5p可显著抑制Caspase 2蛋白表达水平(P<0.05)。miR-125b-5p能明显促进H9c2心肌细胞增殖(P<0.05)。miR-125b-5p能显著抑制H9c2心肌细胞凋亡(P<0.05)。同时,miR-125b-5p还能显著抑制裂解的caspase-3、caspase-9和Bax/Bcl-2蛋白水平(P<0.05),促进Survivin的蛋白表达(P<0.05)。miR-125b-5p可明显降低培养液中LDH活性和细胞内MDA、GSH含量、增加胞内SOD活性(P<0.05)。结论:miR-125b-5p通过抑制Caspase 2蛋白酶活性,促进心肌细胞增殖,降低心肌细胞凋亡率,缓解了LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激,表明miR-125b-5p对LPS造成的心肌细胞损伤具有保护作用。

HMGA23'-UTR双荧光素酶报告载体构建及与miR-33b-5p的靶向验证

目的:构建野生型及突变型HMGA2基因3’-非编码区(3’-UTR)的双荧光素酶报告基因载体,验证miR-33b-5p与HMGA2之间的靶向关系。方法:生物信息学相关软件预测miR-33b-5p与HMGA2之间的靶向关系;PCR扩增HMGA2的基因片段,构建HMGA2野生型和突变型双荧光素酶报告载体;将miR-33b-5p和阴性对照物分别与野生型GV272-HMGA2-wt-3’-UTR或突变型GV272-HMGA2-mut-3’-UTR双荧光素酶报告载体共转染293T细胞,然后检测荧光素酶的活性。结果:成功构建野生型及突变型HMGA2基因3’-非编码区(3’-UTR)的双荧光素酶报告基因载体,双荧光素酶报告系统的结果显示,加入miR-33b-5p可使野生型GV272-HMGA2-wt-3’-UTR的荧光素酶活性降低,但突变型GV272-HMGA2-mut-3’-UTR的荧光素酶活性与对照组相比则未发生显著变化。结论:野生型及突变型HMGA23’-UTR双荧光素酶报告载体构建成功;miR-33b-5p与HMGA2之间存在靶向关系。

miR-450b-5p调控IL-1β诱导人牙龈上皮细胞粘附和迁移

目的:本研究旨在明确miR-450b-5p对炎症因子IL-1β调控人牙龈上皮细胞(HGEs)粘附与迁移的作用。方法:体外培养HGEs,在对数生长期饥饿培养12 h,5 ng/mL IL-1β刺激3 h,RNAiso Plus提取总RNA,进行small RNA测序以及实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)分析;细胞划痕实验观察IL-1β调控HGEs迁移;转染miR-450b-5p mimic、inhibitor和NC慢病毒质粒,qRT-PCR检测IL-1β调控HGEs中miR-450b-5p、Integrinβ6(ITGβ6)、Lamininγ2(LAMC2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果:测序结果和qRT-PCR示IL-1β诱导miR-450b-5p表达降低;IL-1β诱导ITGβ6、LAMC2和MMP-9表达升高;过表达miR-450b-5p抑制ITGβ6、LAMC2和MMP-9基因表达,部分挽救IL-1β诱导的ITGβ6、LAMC2和MMP-9表达升高,敲低miR-450b-5p则出现相反结果;细胞划痕实验示过表达miR-450b-5p抑制IL-1β诱导的HGEs迁移。结论:miR-450b-5p抑制IL-1β诱导HGEs粘附与迁移,提示miR-450b-5p对维持HGEs稳定、抑制细胞迁移以及保护牙龈上皮屏障有重要作用。

MiRNA-29-2-5p对人胰腺癌细胞SW1990迁移能力的影响

目的研究miR-29b-2-5p在胰腺癌细胞系SW1990中迁移的作用。方法荧光定量PCR方法检测miR-29b-2-5p在胰腺癌细胞系SW1990中的过表达情况,Transwell小室迁移实验和细胞划痕实验观察miR-29b-2-5p对胰腺癌细胞系SW1990的迁移能力的影响。结果在胰腺癌细胞系SW1990中过表达miR-29b-2-5p后,miR-29b-2-5p表达显著上调,胰腺癌细胞系的迁移能力明显下降。通过Targetscan软件预测及免疫蛋白印迹法检测发现miR-29b-2-5p的靶蛋白AKT表达水平明显降低。结论 miR-29b-2-5p显著抑制胰腺癌细胞的迁移能力可能与抑制AKT表达相关,为解明胰腺癌迁移机制及针对胰腺癌迁移的新靶点开发提供依据。

2型糖尿病患者血清miR-29a、miR-342-5p水平检测及其临床意义

目的探讨2型糖尿病患者血清mi R-29a、mi R-342-5p水平检测及其临床意义。方法收集2016年4月-2017年6月在本院确诊初发2型糖尿病患者168例(观察组)和同期在本院健康体检者50例(正常对照组)。比较2组血清mi R-29a、mi R-342-5p水平,外周血中糖脂代谢指标水平的差异。结果观察组患者血清中mi R-29a、mi R-342-5p的水平均高于正常对照组;观察组患者外周血中糖代谢指标空腹血糖(FBP)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的水平高于正常对照组,胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)的水平低于正常对照组;脂质代谢指标甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、载脂蛋白B(Apo B)的含量高于正常对照组,载脂蛋白A1(Apo A1)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量低于正常对照组,上述差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 mi R-29a、mi R-342-5p在2型糖尿病患者血清中高表达,可直接用于患者糖脂代谢异常程度的评估。

CircRNA_017122调控骨髓间充质干细胞放射抗性的机制

采用实时荧光定量PCR检测经不同吸收剂量处理后小鼠骨髓间充质干细胞内circRNA_017122表达水平,利用生物学软件TargetScan和miRanda预测mmu-circRNA_017122生物学功能,荧光素酶报告基因试验检测mmu-circRNA_017122与mmu-miR-29b-2-5p之间的结合情况,并用RNA pull-down试验证实mmu-miR-29b-2-5p与p53特异性结合,检测分别转染mmu-circRNA_017122 siRNA和mmu-miR-29b-2-5p inhibitor后P53的表达水平和细胞增殖情况。结果表明:骨髓间充质干细胞内mmu-circRNA_017122的表达水平受吸收剂量影响;生物学软件预测mmu-circRNA_017122可与mmu-miR-29b-2-5p特异性结合并进一步影响P53的表达;荧光素酶报告基因试验和RNA pull-down试验验证他们彼此之间可特异性结合;转染mmu-circRNA_017122 siRNA和同时转染mmu-miR-29b-2-5p inhibitor后P53表达量均显著降低,且细胞增殖减低。当骨髓间充质干细胞受辐照时,其内mmu-circRNA_017122通过ceRNA机制影响mmu-miR-29b-2-5p对p53的表达调控,从而参与辐照损伤修复,导致骨髓间充质干细胞放射抗性。

LncRNA MIR4435-2HG、miR-125b-5p表达在非小细胞肺癌抗PD-1疗效和预后评估中的价值

目的分析长链非编码RNA MIR4435-2宿主基因(LncRNA MIR4435-2HG)、微小RNA-125b-5p(miR-125b-5p)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者抗程序性死亡受体1(PD-1)疗效和预后评估中的价值。方法本研究为队列研究。采用目的抽样法纳入2022年2月至2023年2月延安市人民医院确诊的96例NSCLC患者作为NSCLC患者组, 以及同期的健康体检人群96名为健康对照组。将96例NSCLC患者根据接受抗PD-1治疗6周后的疗效分为有效组(54例)和无效组(42例), 根据1年预后分为生存组(32例)和死亡组(64例)。采用starbase网站预测LncRNA MIR4435-2HG与miR-125b-5p的靶向关系。比较NSCLC患者组与健康对照组的血清LncRNA MIR4435-2HG、miR-125b-5p水平。比较有效组与无效组患者血清LncRNA MIR4435-2HG、miR-125b-5p水平和PD-L1表达情况。采用Spearman法分析治疗无效NSCLC患者血清LncRNA MIR4435-2HG、miR-125b-5p与PD-L1表达的相关性。分析NSCLC患者血清LncRNA MIR4435-2HG、miR-125b-5p与临床特征(性别、年龄、病理类型、肿瘤长径、TNM分期、分化程度和淋巴结转移)的关系。比较生存组和死亡组患者的血清LncRNA MIR4435-2HG、miR-125b-5p水平。采用单因素和多因素Cox回归分析NSCLC患者预后影响因素。采用受试者操作特征曲线分析血清LncRNA MIR4435-2HG、miR-125b-5p对预后的预测价值。结果 NSCLC患者组中男58例, 女38例;年龄(60.42±10.75)岁, 年龄范围32~76岁。健康对照组中男54名, 女42名;年龄(60.81±10.13)岁, 年龄范围30~78岁。starbase网站预测结果显示, LncRNA MIR4435-2HG与miR-125b-5p存在靶向调节关系。NSCLC患者组血清LncRNA MIR4435-2HG水平高于健康对照组[(1.62±0.40)比(1.01±0.22), t=13.09], miR-125b-5p低于健康对照组[(0.65±0.17)比(1.02±0.23), t=12.68], 差异均有统计学意义(均P<0.001)。无效组血清LncRNA MIR4435-2HG水平和PD-L1阳性比例均高于有效组[(1.94±0.51)比(1.37±0.32), t=6.70;24例(57.14%)比3例(5.56%), χ^(2)=31.10], miR-125b-5p水平低于有效组[(0.52±0.14)比(0.75±0.18), t=6.83], 差异均有统计学意义(均P<0.001)。治疗无效NSCLC患者血清LncRNA MIR4435-2HG与PD-L1呈正相关, miR-125b-5p与PD-L1呈负相关(r值分别为0.542、-0.519, 均P<0.001)。不同性别、年龄、病理类型、肿瘤长径的NSCLC患者血清LncRNA MIR4435-2HG、miR-125b-5p水平比较, 差异均无统计学意义(均P>0.05)。不同TNM分期、分化程度和淋巴结转移的NSCLC患者血清LncRNA MIR4435-2HG、miR-125b-5p水平比较, 差异均有统计学意义(均P<0.05), 其中TNM分期Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的患者血清LncRNA MIR4435-2HG水平更高, miR-125b-5p水平更低。死亡组血清LncRNA MIR4435-2HG水平高于生存组[(1.88±0.49)比(1.10±0.32), t=8.17], miR-125b-5p水平低于生存组[(0.55±0.15)比(0.85±0.17), t=8.83], 差异均有统计学意义(均P<0.001)。多因素Cox回归分析结果显示, 较高的LncRNA MIR4435-2HG水平是NSCLC患者死亡的独立危险因素, 较高的miR-125b-5p水平是NSCLC患者死亡的独立保护因素(均P<0.05)。LncRNA MIR4435-2HG、miR-125b-5p单独及联合预测NSCLC患者死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.859(95%CI:0.780~0.938)、0.865(95%CI:0.787~0.942)、0.934(95%CI:0.882~0.986), 其中联合AUC高于LncRNA MIR4435-2HG、miR-125b-5p单独预测AUC(Z值分别为2.21、2.02, P<0.05)。LncRNA MIR4435-2HG的最佳截断值为1.39, miR-125b-5p的最佳截断值为0.74, 二者单独及联合预测的敏感度分别为82.85%、81.38%、84.42%, 特异度分别为81.24%、75.63%、90.65%。结论 LncRNA MIR4435-2HG、miR-125b-5p可能是抗PD-1治疗NSCLC患者疗效和预后的潜在生物学标志物。

结肠癌潜在早期诊断指标与化疗后晚期预后指标分析

一半的结肠癌患者在后期被临床诊断。 因此,对于增强结肠癌的早期诊断能力具有重要意义。 为了找到早期诊断结肠癌的指标以及发现晚期结肠癌患者的 microRNAs 差异基因。 研究方法:从 GEO 数据库中下载 GSE39845,GSE54632,GSE108153,通过筛选差异基因,神经网络分析方法对数据进行分析和结果可视化。 通过对 GSE54632 数据集做差异基因影响力排序分析,和对 GSE108153 进行多层神经网络训练,发现对测试集的预测准确率为 100% ,同时也对 GSE108153 做了影响力排序分析。 研究结果:miR-143 是最有可能的潜在早期诊断指标,hsa-miR-29c-3p,hsa-miR-145-5p,hsa-miR-26b-5p是评估一线化疗高阶段 CRC 病人的癌组织的特异高表达的指标。 研究结论:miR-143 是候选早期结肠癌诊断指标,对晚期特异性高表达的指标可能为改善预后提供线索。

艾司氯胺酮对肝癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制实验研究

目的:探讨艾司氯胺酮对肝癌细胞恶性生物学行为的影响及可能的作用机制。方法:收集26例肝癌患者的癌组织和癌旁组织。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肝癌组织和细胞微小RNA(miR)-449b-5p和转化生长因子-β诱导因子同源盒2(TGIF2)mRNA表达。选取上述基因变化最显著的细胞进行后续实验。将肝癌SK-Hep-1细胞分为对照组(正常培养)、艾司氯胺酮-L组(1 mmol/L艾司氯胺酮处理)、艾司氯胺酮-H组(2 mmol/L艾司氯胺酮处理)、艾司氯胺酮-H+inhibitor NC组(转染inhibitor NC+2 mmol/L艾司氯胺酮处理)、艾司氯胺酮-H+miR-449b-5p inhibitor组(转染miR-449b-5p inhibitor+2 mmol/L艾司氯胺酮处理)。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞中肿瘤增殖细胞核抗原(Ki-67)、半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)、TGIF2蛋白表达量。双荧光素酶报告基因实验验证miR-449b-5p和TGIF2的靶向关系。结果:肝癌组织和细胞TGIF2 mRNA表达水平升高,miR-449b-5p表达水平降低(均P<0.05)。与对照组比较,艾司氯胺酮-L组、艾司氯胺酮-H组以及艾司氯胺酮-H+inhibitor NC组SK-Hep-1细胞中miR-449b-5p表达水平、细胞凋亡率及Cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,TGIF2 mRNA表达水平、OD_(450)值(24、48 h)、细胞划痕愈合率、细胞侵袭数及Ki-67、MMP-9、VEGF-A、TGIF2蛋白表达水平降低(均P<0.05)。与艾司氯胺酮-H+inhibitor NC组比较,艾司氯胺酮-H+miR-449b-5p inhibitor组SK-Hep-1细胞miR-449b-5p表达水平、细胞凋亡率及Cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,TGIF2 mRNA表达水平、OD_(450)值(24、48 h)、细胞划痕愈合率、细胞侵袭数及Ki-67、MMP-9、VEGF-A、TGIF2蛋白表达水平升高(均P<0.05)。miR-449b-5p mimic+TGIF2-WT组荧光素酶活性低于miR-NC+TGIF2-WT组(P<0.05)。结论:艾司氯胺酮通过上调miR-449b-5p/TGIF2轴抑制肝癌细胞的恶性生物学行为。

特发性肺纤维化血清生物指示物的研究

目的:探讨Human Napsin-A(NASPA)、肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)及肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)、外泌体hsa-miR-21-5p、血清中hsa-miR-29b-3和hsa-miR-30c-5p在特发性肺纤维化中的变化及其临床意义。方法:选取2015年2月至2019年8月于河南省胸科医院就诊的50例特发性肺纤维化患者(特发性肺纤维化组)资料进行回顾性研究,将同期体检健康者20名作为健康对照组。对比2组患者在NASPA、SP-A、SP-D、hsa-miR-21-5p、hsa-miR-29b-3和hsa-miR-30c-5p表达水平等项目之间的差异。结果:2组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05),特发性肺纤维化组NASPA、SP-D、hsa-miR-21-5p的表达均要明显高于健康对照组(P<0.05),SP-A、hsa-miR-29b-3的表达均较健康对照组显著降低(P<0.05)。结论:血浆中SP-D检测能够作为特发性肺纤维化患者的潜在诊断指标;血浆中NASPA、外泌体hsa-miR-21-5p、血清中hsa-miR-29b-3检测可以作为特发性肺纤维化患者肺部疾病诊断的候选标志物,为临床诊断提供一定的指导作用。