Comparison on Several Methods for Extracting DNA from Raccoon Dog Hair Follicle

[Objective] This study aimed to investigate a reliable method for DNA ex- traction from Wusuli raccoon dog＇s hair. [Method] Several DNA extraction methods were used to extract DNA from Wusuli raccoon dog hair, including Chelex-100 method, PCR buffer method, organic phenol-chloroform method and centrifugal col- umn type kit method. The extracted DNA was analyzed by using PCR amplification and electrophoresis to compare these four DNA extraction methods. [Result] Accord- ing to the results of spectrophotometer detection and gel electrophoresis, nucleic acid extracted by Chetex-100 method had proteins and other impurities; nucleic acid ex- tracted by PCR buffer method was low in concentration; however, DNA extracted by organic phenol-chloroform method and centrifugal column type kit was high in con- centration with no impurity band. [Conclusion] This study had laid the strong founda- tion of scientific theory to further explore the efficient and simple method for extracting DNA from Wusuli raccoon dog hair follicle.

应用实时荧光定量PCR方法检测血小板制品细菌污染

目的应用实时荧光定量PCR方法检测血小板制品中细菌的探讨。方法选取金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏杆菌,用改良的Chelex-100法抽提细菌基因组DNA,进行荧光定量PCR检测。并应用过滤法去除反应体系中潜在的细菌及其基因组DNA污染。结果针对16srRNA基因保守序列进行扩增的荧光定量PCR方法具有较高的特异性和灵敏度,与人类淋巴细胞及病毒等的基因组无交叉反应。在金黄色葡萄球菌检测中,应用过滤法后最低含菌量组与阴性对照组Ct值有极显著差异(P<0.001)。该方法对金黄色葡萄球菌的最低检出量为0.3CFUs/PCR,与阴性对照Ct值有显著差异(P<0.01),在大肠埃希氏杆菌中该法可检测出0.1CFUs/PCR,与阴性对照Ct值有显著性差异(P<0.01)。结论改良Chelex-100法抽提细菌基因组及后续的荧光定量PCR分析用于检测血小板制品中的细菌污染,检测实验缩短到3-4h,操作简单,灵敏性高,特异性好,为在临床标本大规模检测中的应用提供理论基础和实验数据。

2017~2019年葫芦岛市中心医院耐碳青霉烯肠杆菌科细菌耐药性监测结果分析

目的分析葫芦岛市中心医院耐碳青霉烯肠杆菌科细菌耐药性监测结果。方法采用EDTA协同试验、改良Hodge试验、纸片扩散法(K-B法)联合Phoenix-100全自动细菌鉴定/药敏系统对2017年1月~2019年12月葫芦岛市中心医院耐碳青霉烯肠杆菌科细菌检出情况、分布情况以及耐药性进行检测。结果2017年~2019年共分离出肠杆菌科细菌9220株,其中耐碳青霉烯肠杆菌科细菌菌株510株,总检出率5.53%(510/9220)。2017年、2018年、2019年三年检出率分别为32.55%(166/510)、34.51%(176/510)及32.94%(168/510),差异无统计学意义(P>0.05)。510株耐碳青霉烯肠杆菌科细菌菌株中的标本最主要来源为痰382株(74.90%),其他标本来源分别为胸水标本3株(0.59%),胆汁标本5株(0.98%),分泌物标本7株(1.37%),腹水标本9株(1.76%),引流液标本11株(2.16%),尿液标本20株(3.92%),导管尖端标本22株(4.31%),血液标本51株(10.00%)。2017~2019年耐碳青霉烯肠杆菌科细菌菌株对常用抗菌药物美罗培南、亚胺培南、氨曲南、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢他啶、头孢唑林、哌拉西林/三唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦耐药,对替加环素及多黏菌素敏感。结论院内耐碳青霉烯肠杆菌科细菌感染率较高,最为常见的菌株为肺炎克雷伯菌,且对多数抗菌药物耐药,对替加环素、多黏菌素、复方磺胺甲噁唑、阿米卡星、庆大霉素有一定的敏感性,临床在选择用药时,应结合实际情况选择相应的抗菌药物。

三种无形态损伤提取粉螨DNA方法的改进与评估

【目的】改进和评估无形态损伤提取粉螨DNA并保留完整凭证标本的方法。【方法】用改良Chelex-100法,STE法和碱裂解法提取单只椭圆食粉螨Aleurolyphus ovatus基因组DNA,并进行凭证标本回收和形态观察。超微量分光光度计测定DNA的纯度。通过对COⅠ基因的扩增,验证所提取的DNA是否满足PCR扩增。【结果】3种方法处理后的凭证标本整体保持完整,但碱裂解法处理后,躯体刚毛易脱落,凭证标本透明过度,影响标本的形态鉴定。改良Chelex-100法的A_(260)/A_(280)比值为1.95,其余两种方法A_(260)/A_(280)均低于1.8。3种方法所提单只螨DNA均满足PCR扩增,但STE法的扩增效果较差。【结论】改良Chelex-100法保存凭证标本完整,不影响标本的形态鉴定;提取的DNA纯度高,可以满足PCR扩增和后续相关分子生物学研究,且简单高效,适于单只粉螨DNA的无形态损伤提取。