转sck基因水稻中CpTI蛋白的细胞内定位

目的转sck基因水稻中CpTI蛋白细胞内定位。方法运用免疫组织化学方法,应用免疫电镜技术,观察在转sck基因水稻根部细胞、叶片细胞中CpTI蛋白的定位情况。结果在转sck基因水稻根尖部细胞的内质网中和内质网附近有胶体金颗粒大量存在,细胞的质体、叶绿体、细胞质、细胞核中也散在一些胶体金颗粒,在对照水稻的根部内质网和其他部位未发现胶体金颗粒存在。水稻叶片细胞由于有叶泡的存在,内质网不明显,但是细胞核、细胞质和质体内也发现胶体金颗粒,在非转基因水稻的叶片中未发现胶体金颗粒。结论转sck基因水稻中的CpTI蛋白在内质网中大量存在,在细胞的质体、叶绿体、细胞质、细胞核中也存在少量CpTI蛋白。

国槐离体再生及抗虫基因sck的转导

以国槐叶片作为外植体,筛选出诱导不定芽分化的最佳培养基;利用根癌农杆菌介导法将经过修饰的广谱抗虫基因豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck(Signal-CpTI-KDEL)导入国槐。国槐叶片与农杆菌共培养结束后,转移至筛选培养基MS+BA3 mg·L-1+IAA0·05 mg·L-1+G418 8 mg·L-1+Cef 500 mg·L-1上。不定芽在培养基1/2MS+IBA1·0 mg·L-1+G418 10 mg·L-1+Cef 100 mg·L-1上进一步培养获得完整再生植株。通过PCR和Southern blotting检测证明,修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck已成功导入国槐细胞。

转Cry1Ac/Sck基因大米的免疫毒理学评价

为观察转Cry1Ac/Sck基因大米对小鼠免疫功能的影响,将BALB/c小鼠按体重分为4组,即转基因大米组、非转基因大米对照组、AIN93G饲料正常对照组和阳性对照组,相应饲料喂养30d,比较各组小鼠免疫功能改变情况。结果显示,转基因大米组血小板数量显著低于非转基因大米对照组,但是与正常对照组无显著性差异,并且这3组血小板数量均在正常变化范围内;其他观察指标转基因大米组与非转基因大米组相比均无显著性差异;阳性对照组的各项指标,绝大多数均显著低于其他3组。表明转Cry1Ac/Sck基因大米对小鼠免疫功能的影响与非转基因亲本大米基本相同,未对小鼠免疫功能产生不良影响,因此转Cry1Ac/Sck基因大米在小鼠免疫毒理学方面的评价是安全的。

转sck基因水稻目的基因表达特异性

对转sck基因水稻T6代生长发育不同时期的不同组织部位sck基因在转录水平和翻译水平的表达特异性进行了研究，结果显示，转基因植株的叶片、茎部、根部sck基因在转录水平和翻译水平均有表达，其中叶片的表达水平明显高于茎部和根部；在成熟的种子中CpTI外源蛋白含量低于检测低限（〈0．014μg／ml），不能被定量。不同生长发育时期叶片的sck基因表达水平在分蘖期、幼穗发育期、开花结实期差别不大，幼苗期的表达水平明显低于其他时期。可见，所转入的外源基因已经能在T6代转基因水稻的不同生长时期的不同组织部位稳定表达，并且在不同时期的根、茎、叶中可以定量检测。

转修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(sck)玉米(Zea mays L.)植株的获得及其抗虫性分析

利用基因枪法将修饰的豇豆胰蛋白酶基因 (sck)导入玉米优良自交系E2 8及34 0的胚性愈伤组织中 ,经筛选剂PPT 3次筛选及再生过程 ,获得可育的再生植株。经PCR及Southernblot分子检测 ,证实所获得的再生植株为转基因植株。豇豆胰蛋白酶抑制剂抑制活性检测及抗虫结果显示 :外源基因在植物已获表达 ,部分转基因植株具有较强的抗虫活性。

转Cry1Ac/SCK基因糙米作鲤鱼日粮原料营养学评价

利用转CrylAc／SCK基因糙米制作饲料，以亲本糙米为对照组，进行56d饲喂鲤鱼试验；于饲喂28d和56d后，评价转CrylAc／SCK基因糙米对鲤鱼生长性能和肌肉组成成分的影响。结果表明：转CrylAc／SCK基因糙米与亲本糙米相比，水分、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分、粗纤维、氨基酸、钙和总磷等指标均无显著差异（P〉0．05）；在第一生长阶段（1～28d）和第二生长阶段（．29～56d），转CrylAc／SCK基因糙米组与亲本糙米组相比，鲤鱼的生长性能和肌肉营养成分指标未见显著差异（P〉0．05）。

大白菜转修饰豇豆胰蛋白酶抑制剂基因获得抗虫植株

以大白菜 3d苗龄带柄子叶为外植体 ,经根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导 ,将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (sck)导入大白菜自交系‘GP 1 1’和杂交种‘中白 4号’ ,并获得了卡那霉素抗性植株。PCR检测和Southernblot杂交证实 ,sck基因已整合进大白菜基因组中 ;豇豆胰蛋白酶抑制剂活性检测表明 ,大部分转基因植株都对牛胰蛋白酶有一定的抑制活性 ,对照未转化植株抑制活性很低。室内离体叶片饲虫和田间自然抗虫性鉴定进一步证明 ,转基因植株对菜青虫 (PierisrapaeL.)具有一定抗性。

转抗虫基因三系优良保持系的获得

以质粒pBUSCK HPT作抗虫基因供体 ,优良籼型保持系D6 2B为受体 ,采用基因枪转化法 ,获得了转抗虫基因sck的植株。将转基因保持系与不育系D6 2A回交 ,获得转抗虫基因不育系。分子证据表明 ,外源基因能稳定转移到不育系中。蛋白活性测定显示 ,转基因在不育系中得到表达。

抗虫基因在转基因植株中聚合的初步研究

以质粒 pBUSCK HPT ,pCUSBK HPT和pGNA HPT作抗虫基因供体 ,优良籼型三系恢复系SH5 2 7和广亲合系W 2 0 0 8为受体 ,采用基因枪转化法 ,获得了转修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (sck)、修饰的Bt毒蛋白基因 (sbk)和雪花莲凝集素基因 (gna)的植株 .通过人工杂交 ,将外源基因聚合 .分子证据显示 ,作者获得了抗性基因聚合的材料 .蛋白活性测定表明 ,聚合基因的表达因载体结构相似而受到影响 ,但抗虫性却得到提高 .作者还讨论了聚合转基因在水稻育种中的作用和及其相关问题 .

水稻抗虫转基因光温敏核不育系植株的获得

以质粒 pCUBAC HPT作抗虫基因供体 ,优良光温敏核不育系 6 12S为受体 ,采用基因枪转化法 ,获得了转抗虫基因sck和sbk的植株 .分子证据表明 ,外源基因已整合到受体基因组中 .蛋白活性测定和Westernblotting结果显示 ,转基因在受体植株中得到表达 .田间抗虫性测定表明 ,外源基因的转入提高了受体的抗虫性 .本文还讨论了转基因技术在水稻育种中的作用 .图 5表 2参

转抗虫基因杂交稻的配制及田间表现

以质粒 pBUSCK HPT作抗虫基因供体 ,优良籼型恢复系SH5 2 7为受体 ,采用基因枪转化法 ,获得了转抗虫基因sck的植株 .通过自交和选择剂潮霉素B的筛选 ,筛选到选择标记基因纯合的单株 (T2代 ) .将纯合单株与不育系G4 6A ,D6 2A和D70 2A杂交 ,获得转抗虫基因杂交稻 .分子证据和蛋白质测定表明 ,外源基因能稳定地转移到杂交稻中并正确表达 .农艺性状测定显示 ,转基因杂交稻与对照相比 ,抗虫性有所提高 ,其它性状没有发生变化 .作者还讨论了转基因技术在水稻育种中的作用 .