基因芯片和比例法药物敏感性试验检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的比较研究

目的比较基因芯片和比例法药物敏感性试验在检测结核分枝杆菌(MTB)对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性中的应用,探讨快速诊断耐多药结核病(MDR-TB)的方法。方法从改良罗氏培养基上分离的327株菌株,分别用基因芯片检测MTB对RFP和INH耐药相关的rpoB、katG和inhA基因上8个位点的基因突变,从而判断其耐药性;同时用比例法药物敏感性试验检测MTB对RFP和INH耐药性,比较2种方法的符合率。进一步从二者RFP或/和INH结果不符的标本中随机选出16株菌株做DNA序列测定,比较二者与DNA测序的符合率。结果基因芯片和比例法药物敏感性试验检测MTB对RFP耐药性符合率为93.27%,对INH耐药性符合率为95.11%,RFP和INH的总符合率为90.52%;二者对MDR-TB的检出率分别为18.65%和18.96%。基因芯片与DNA测序比较,RFP耐药性符合率为81.25%,INH耐药性符合率为100.00%;比例法药物敏感性试验与DNA测序比较,RFP耐药性符合率为50.00%,INH耐药性符合率为37.50%。结论基因芯片检测MTB对RFP和INH的耐药性较比例法药物敏感性试验有更高的敏感性和特异性,对MDR-TB的快速诊断具有重要临床价值。

最低抑菌浓度法在耐药结核分枝杆菌药敏试验中的应用

目的分析最低抑菌浓度法(MIC法)在耐药结核分枝杆菌药敏试验中的应用价值。方法对129例临床培养阳性的结核分枝杆菌进行抗结核药物敏感性检测,以改良罗氏比例法药敏试验结果为金标准,分析微量MIC法的灵敏度、特异度、阴性预测值、阳性预测值及诊断符合率。结果以改良罗氏比例法药敏试验为金标准,MIC法药敏试验对于链霉素(SM)药敏检测的灵敏度为100.0%,特异度为97.1%,阳性预测值为89.6%,阴性预测值为100.0%,诊断符合率为97.7%;对异烟肼(INH)药敏检测的灵敏度为96.3%,特异度为98.0%,阳性预测值为92.8%,阴性预测值为99.0%,诊断符合率为97.7%;对利福平(RFP)药敏检测的灵敏度为95.0%,特异度为99.1%,阳性预测值为95.0%,阴性预测值为99.1%,诊断符合率为98.4%;对乙胺丁醇(EMB)药敏检测的灵敏度为83.3%,特异度为99.1%,阳性预测值为90.9%,阴性预测值为98.3%,诊断符合率为97.7%;对卡那霉素(KAN)药敏检测的灵敏度为38.5%,特异度为100.0%,阳性预测值为100.0%,阴性预测值为93.5%,诊断符合率为93.8%;对氨基水杨酸(PAS)药敏检测的灵敏度为50.0%,特异度为100.0%,阳性预测值为100.0%,阴性预测值为96.8%,诊断符合率为96.9%;对卷曲霉素(CPM)药敏检测的灵敏度为66.6%,特异度为100.0%,阳性预测值为100.0%,阴性预测值为98.4%,诊断符合率为98.4%。结论与改良罗氏比例法药敏试验比较,MIC法药敏试验对于4种一线抗结核药物链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇和3种二线抗结核药物卡那霉素、对氨基水杨酸、卷曲霉素的药物敏感性检测符合率较高,同时也是一种快速、操作方便、定量和准确的方法,结合药物的MIC值可以为临床个体化用药精准治疗提供依据,同时也有利于新药的研究和开发,更好的满足临床需求。

基因芯片技术检测贵州省结核分枝杆菌耐药基因KatG和inhA

目的了解本地区结核分枝杆菌(MTB)异烟肼(INH)相关耐药基因katG和inhA的突变特征,评价基因芯片法对MTB INH耐药性检测的临床应用价值。方法应用基因芯片法对经PCR-荧光探针法鉴定为MTB阳性的2 738例病人标本进行INH耐药性检测,分析其相关耐药基因katG和inhA的突变特征,同时应用比例法检测上述同期送检的相同病人的同类型标本经罗氏培养MTB阳性菌株的INH耐药性,比较两种方法的检测结果。结果 2 738例MTB核酸阳性标本经基因芯片法检测,INH耐药465例,耐药率16.98%,其中以katG315(AGC→ACC)突变为主,基因突变率为78.06%,其次为inhA-15(C→T),katG315(AGC→AAC),突变率分别为16.13%和5.59%。上述病人同期送检的同类型标本有1 493例经罗氏培养MTB阳性,比例法检测,INH耐药255例,耐药率17.08%,对应的基因芯片法检测结果为INH耐药249例,耐药率16.68%。以比例法结果为判断标准,基因芯片法测定INH耐药性的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)及准确性分别为85.49%、97.50%、87.55%、97.03%和95.45%。结论本地区INH耐药以katG315(AGC→ACC)和inhA-15(C→T)突变类型为主;基因芯片对MTB INH耐药性检测具有高敏感性、特异性、准确性和快速性,可用于本地区MTB INH耐药性的快速检测。

聚中性红修饰玻碳电极的制备及其在抗菌药物有效性检测中的应用

采用电聚合法制备了聚中性红修饰玻碳电极(PNR/GCE),运用循环伏安法(CV)对修饰电极进行表征,并以CV图中的峰电流为指标,研究了中性红浓度、扫描段数、缓冲液pH值及支持电解质NaNO_3浓度对聚合过程的影响,筛选了最佳聚合条件。继而借助中性红可作为电子媒介体的特性,以E.coli为模型微生物,通过考察E.coli活性与抗菌药物浓度的关系,构建了一种新型体外药效检测的方法,用于抗菌药物有效性的快速检测。以中性红浓度0.5 mmol/L,扫描段数Segment 30,缓冲液pH 7.0,NaNO_3浓度0.5 mol/L为最佳电极修饰条件。选择菌悬液吸光度(OD_(600)) 0.5,反应时间40 min,以标准葡萄糖-谷氨酸溶液(GGA,BOD^(220))为营养物质,此时检测抗菌药物有效性的灵敏度最高。在最佳实验条件下,头孢哌酮、阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星4种抗菌药物对E.coli的半数抑菌浓度分别为34.15、27.98、8.83、11.49 mg/L;作为抗革兰氏阳性菌的万古霉素对E.coli的抑菌效果较差。上述结果与经典纸片扩散法具有良好一致性。

某三级甲等医院铜绿假单胞菌感染的科室分布及耐药性分析

【目的】分析某三级甲等医院铜绿假单胞菌感染的科室分布特点及耐药性,为临床合理应用抗感染药物提供参考。【方法】对2009年1月-12月分离得到的合格菌株用法国生物梅里埃公司API鉴定系统进行菌株鉴定,同时用K-B纸片扩散法进行药敏实验。【结果】共检测出680株铜绿假单胞菌:其中呼吸科210株,构成比为30.9%I;CU分离到164株,构成比为24.1%;心内科108株,构成比为15.9%;普外63株,构成比为9.2%;其它135株,构成比为19.9%。药敏结果显示铜绿假单胞菌对阿米卡星、庆大霉素、头孢他啉及复方新诺明的耐药率分别达46.0%、67.6%、59.8%和70.7%,呈高水平耐药。【结论】铜绿假单胞菌在我院以呼吸系统感染为主,加强抗感染药物合理应用及控制耐药菌株的产生和传播都有助于减少医院感染的发生。

微量液体培养基最低抑菌浓度法与罗氏比例法在结核分枝杆菌药敏试验中的价值比较

目的比较微量液体培养基最低抑菌浓度(MIC)法与罗氏比例法在结核分枝杆菌药敏试验中的临床价值。方法以100株结核分枝杆菌菌株(由辽宁省结核实验室提供)为研究样本,分别采用罗氏比例法与微量液体培养基MIC法检测结核分枝杆菌的药物敏感性。结果微量液体培养基MIC法与罗氏比例法检测结核分枝杆菌对乙胺丁醇、二卡那霉素、利福平、异烟肼、氧氟沙星、卷曲霉素药物的敏感性比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论微量液体培养基MIC法应用于结核分枝杆菌药敏试验中与罗氏比例法有着良好的一致性,且检测速度快,经济适用性好,能够为临床指导结核病用药提供帮助。

均匀分散的抗菌类药品供试液及其上清液对菌落回收的影响

目的比较抗菌类药品供试液上清液及均匀分散的供试液对菌落回收的影响。方法选取3种抗菌类药品,参照2015年版《中国药典(四部)》测定金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收比值。结果敏感菌株同一稀释级回收比值,供试液上清液高于均匀分散的供试液;非敏感菌株,2种供试液回收比值无明显差异。结论抗菌类药品均匀分散的供试液抑菌性强于供试液上清液。进行微生物限度检查时,应按适用性试验确定的方法进行供试液制备,以保证检验结果的准确性。

实时荧光定量PCR法分析结核分枝杆菌耐药性的价值观察

目的探究实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法在结核分枝杆菌(MTB)耐药性中的应用价值。方法选择2018年10月至2020年11月我院收治的结核病患者84例,采用FQ-PCR法分析,以罗氏药敏比例法作为检测MTB耐药性的“金标准”,分析FQ-PCR法在MTB耐药性中的应用价值。结果FQ-PCR法分析MTB耐药性中各药物灵敏度、特异度、阳性预测值比较差异有统计学意义(P<0.05);而准确度及阴性预测值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。kappa检验显示:对阿米卡星检测一致性不佳(kappa值为0.279);对利福平、异烟肼、莫西沙星及乙胺丁醇一致性尚可(kappa值分别为0.637、0.631、0.578、0.623);对链霉素一致性良好(kappa值为0.815)。结论FQ-PCR法在MTB耐药性分析中具有较高的临床应用价值,优势明显,可为临床诊断及用药提供可靠依据。

2017~2019年葫芦岛市中心医院耐碳青霉烯肠杆菌科细菌耐药性监测结果分析

目的分析葫芦岛市中心医院耐碳青霉烯肠杆菌科细菌耐药性监测结果。方法采用EDTA协同试验、改良Hodge试验、纸片扩散法(K-B法)联合Phoenix-100全自动细菌鉴定/药敏系统对2017年1月~2019年12月葫芦岛市中心医院耐碳青霉烯肠杆菌科细菌检出情况、分布情况以及耐药性进行检测。结果2017年~2019年共分离出肠杆菌科细菌9220株,其中耐碳青霉烯肠杆菌科细菌菌株510株,总检出率5.53%(510/9220)。2017年、2018年、2019年三年检出率分别为32.55%(166/510)、34.51%(176/510)及32.94%(168/510),差异无统计学意义(P>0.05)。510株耐碳青霉烯肠杆菌科细菌菌株中的标本最主要来源为痰382株(74.90%),其他标本来源分别为胸水标本3株(0.59%),胆汁标本5株(0.98%),分泌物标本7株(1.37%),腹水标本9株(1.76%),引流液标本11株(2.16%),尿液标本20株(3.92%),导管尖端标本22株(4.31%),血液标本51株(10.00%)。2017~2019年耐碳青霉烯肠杆菌科细菌菌株对常用抗菌药物美罗培南、亚胺培南、氨曲南、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢他啶、头孢唑林、哌拉西林/三唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦耐药,对替加环素及多黏菌素敏感。结论院内耐碳青霉烯肠杆菌科细菌感染率较高,最为常见的菌株为肺炎克雷伯菌,且对多数抗菌药物耐药,对替加环素、多黏菌素、复方磺胺甲噁唑、阿米卡星、庆大霉素有一定的敏感性,临床在选择用药时,应结合实际情况选择相应的抗菌药物。

一株香味类香味菌碳青霉烯酶基因及其感染的临床治疗研究

目的 探讨一株香味类香味菌碳青霉烯类药物的耐药基因及治疗方案.方法 菌株分离自2013年5月上海交通大学医学院附属新华医院一例尿路感染患者的右肾造瘘引流液样本.采用MicroflexTM MALDI-TOF MS和16S rDNA基因测序方法对菌株进行鉴定,用Vitek 2 Compact全自动微生物分析仪联合浓度梯度（E-test）法进行药敏试验,改良Hodge试验及亚胺培南/亚胺培南-金属酶抑制剂（IP/IPI） E-test法进行耐药表型筛查;采用PCR方法检测blaMUS-1、blaVIM-1、blaVIM-2、blaIMP-1、blaIMP-2、blaNDM-1、blaOXA-48和blaGES等碳青霉烯酶基因,并对阳性片段进行基因测序.结果 该菌株经鉴定为香味类香味菌,它对常规的17种抗菌药物均耐药,其中亚胺培南的最低抑菌浓度（MIC）为≥16μg/mL;但对米诺环素敏感（MIC为0.38 μg/mL）,美罗培南中介（MIC为6μg/mL）.菌株改良Hodge试验阴性,金属酶抑制试验阳性（IP/IPI＞8）,PCR产物测序证实该菌株携带有金属β-内酰胺酶MUS-1基因（blaMUS-1）.美罗培南联合米诺环素治疗有效.结论 该株香味类香味菌携带blaMUS-1基因可能是对碳青霉烯类药物耐药的原因,对该菌的感染,临床上应结合药敏试验制订治疗方案.

一株高度耐碳青霉烯类药物的肺炎克雷伯菌耐药性研究

目的了解从临床患者病灶中分离到的一株高度耐碳青霉烯类药物的肺炎克雷伯菌的耐药机制。方法药敏试验采用微量肉汤稀释法与etest法,碳青霉烯酶表型检测采用改良Hodge试验和双纸片增效法,其基因型测定采用多组碳青霉烯耐药相关基因引物PCR并测序,由北京大学临床药理研究所负责完成。结果药敏测试结果除对阿米卡星和多粘菌素敏感外,对临床常用亚胺培南(mic>32ug/ml)、美罗培南(mic>32ug/ml)、一至四代的头孢菌素类、硅诺酮类以及庆大霉素、头孢西丁、氨曲南、复方新诺明、四环素、美满霉素、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/棒酸、头孢哌酮/舒巴坦,均表现为耐药。碳青霉烯酶表型检测试验改良Hodge试验阳性,双纸片增效法阳性,碳青霉烯耐药基因为blaIMP-4。结论产IMP-4型金属β内酰胺酶的肺炎克雷伯菌已证实在我院存在,其泛耐药性,应引起我们足够的重视。

结核菌罗氏培养基药敏试验结果判读时间分析

目的分析结核菌罗氏培养基药敏试验结果的合理判读时间,从而使药敏实验的准确性得到提高。方法选择2013年4月—2016年12月期间淮安市疾病预防控制中心收治的2 371例肺结核患者作为研究对象,其中新涂阳初治患者2 136例,复治涂阳患者235例。患者痰标本均在实验室质控下完成检测,作为标准结果,同时在本院进行罗氏培养基药敏试验,分别培养4周和6周后,将检测结果与标准结果进行对比分析,分别统计比对培养4周和6周的结果准确率。结果初治患者培养4周药敏试验结果准确率异烟肼(98.60%)、链霉素(95.22%)、利副平(96.54%)、乙胺丁醇(95.88%)与培养6周准确率(94.48%、96.54%、97.94%、97.24%)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。复治患者培养4周异烟肼药敏试验准确率(98.30%)与培养6周准确率(93.62%)比较差异具有统计学意义(P<0.05);培养4周链霉素(94.89%)、利副平(96.60%)、乙胺丁醇(96.32%)药敏试验准确率与培养6周准确率(95.74%、97.87%、97.02%)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。初治和复治患者:4周和6周的准确率比较差异无统计学意义。结论结核菌罗氏培养基药敏试验结果准确性与判读时间存在一定联系,应根据具体药物选择具体时间。