我院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌碳青霉烯酶不同检测方法的比较

目的探讨评价碳青霉烯酶的不同检测方法,为实验室检测及临床诊疗提供依据。方法选用EDTA碳青霉烯灭活方法(mCIM/eCIM)检测耐碳青霉烯类肠杆菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)菌株耐药表型,以两种免疫层析碳青霉烯酶检测试剂盒、荧光定量PCR法检测CRE菌株基因型。统计学方法采用Kappa一致性检验,比较各种检测方法的临床可操作性。结果经荧光定量PCR扩增后基因测序显示73株肺炎克雷伯菌中71株携带KPC基因,2株携带NDM基因;7株大肠埃希菌中6株携带NDM基因,1株携带KPC基因;mCIM联合eCIM检测KPC的灵敏度为68.1%(49/72),检测NDM的灵敏度为100.0%(8/8);NG-test Carba 5和免疫显色试剂盒检测KPC和NDM灵敏度为100.0%、特异性为100.0%。结论NG-test Carba 5和免疫显色试剂盒检测可以成为检测我国最常见碳青霉烯酶的快速、方便的诊断工具,从而有助于控制产碳青霉烯酶的分离株在医院间的传播,为院感防控工作起到至关重要的意义。

碳青霉烯类抗菌药物灭活试验筛查产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的效能评价

目的评估碳青霉烯类抗菌药物灭活试验(CIM)快速筛查产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的应用价值。方法以碳青霉烯酶基因聚合酶链反应(PCR)及测序结果为金标准,用CIM在154株肠杆菌科细菌(分离于临床样本)中筛查产碳青霉烯酶的细菌,并与改良Hodge试验结果进行比较。结果 CIM的符合率、特异性和敏感性分别为99.4%、96.6%和100.0%,改良Hodge试验的符合率、特异性和敏感性分别为98.7%、93.1%和100.0%。结论与改良Hodge试验相比,CIM具有符合率和特异性高、结果易于观察等优势,适合在各级医院的微生物实验室中推广使用。

mCIM与eCIM检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的临床评价

目的评价改良碳青霉烯灭活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)和EDTA碳青霉烯灭活试验(EDTA-carbapenem inactivation method,eCIM)对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的检测性能。方法收集2017年1月至2018年9月重庆市16家区县医院临床分离的136株碳青霉烯耐药或敏感的肠杆菌科细菌,采用PCR方法检测碳青霉烯酶基因,mCIM和eCIM筛选碳青霉烯酶表型,并对基因检测结果与表型筛选试验结果进行分析和评价。结果85株碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌中79株检出碳青霉烯酶基因,共表达A类和B类碳青霉烯酶基因8株,占比10.13%(8/79),碳青霉烯酶表型筛选试验mCIM阳性78株,eCIM阳性44株。51株碳青霉烯敏感菌株未检测到碳青霉烯耐药基因且mCIM均为阴性。mCIM筛选肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的灵敏度为98.7%(95%CI:92.2~99.9),特异性为100.0%(95%CI:92.1~100.0),Kappa值为0.985;eCIM筛选金属酶灵敏度为85.7%(95%CI:72.1~93.6),特异性为94.4%(95%CI:80.0~99.0),Kappa值为0.787;eCIM筛选丝氨酸酶灵敏度为89.5%(95%CI:74.3~96.6),特异性为100.0%(95%CI:90.6~100.0),Kappa值为0.904。结论mCIM联合eCIM检测可有效筛选产碳青霉烯酶菌株,但随着共表达A类和B类碳青霉烯酶菌株的分离率增加会降低对金属酶筛选的灵敏度。

mCIM与eCIM在产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌表型筛查中的价值

目的分析改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)与乙二胺四乙酸碳青霉烯灭活试验(eCIM)对产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌表型筛查的效能及应用价值。方法收集碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)117株(实验组)、碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌50株(对照组)。分别采用改良Hodge试验(MHT)、mCIM和eCIM进行表型筛查,采用聚合酶链反应(PCR)检测常见碳青霉烯耐药基因,统计表型筛查试验结果与基因检测结果的一致性。结果以PCR检测出碳青霉烯酶基因为金标准,MHT筛查碳青霉烯酶的敏感性为87.0%、特异性为100.0%,mCIM筛查碳青霉烯酶的敏感性、特异性均为100.0%,eCIM筛查金属酶的敏感性为82.4%、特异性为100.0%。结论mCIM筛查碳青霉烯酶的敏感性比MHT高,mCIM与eCIM联合检测能更有效地筛查碳青霉烯酶,且可区分碳青霉烯酶类型,从而有效指导临床用药。

imCIM检测B类碳青霉烯酶的效果评价

目的评价抑制剂增强改良碳青霉烯失活法(im CIM)在B类碳青霉烯酶检测中的应用价值,并与EDTA纸片增效试验(EDPT)进行比较分析。方法收集碳青霉烯类抗生素不敏感菌株181株,其中肺炎克雷伯菌44株、大肠埃希菌44株、鲍曼不动杆菌43株、铜绿假单胞菌50株;碳青霉烯类抗生素敏感菌株83株,其中肺炎克雷伯菌25株、大肠埃希菌16株、鲍曼不动杆菌25株、铜绿假单胞菌17株。采用im CIM和EDPT对上述264株菌株进行B类碳青霉烯酶的筛查,以PCR结果作为金标准。应用一致性检验、Wilcoxon符号秩和检验、独立样本Kruskal-Wallis H检验及ROC曲线进行统计学分析。结果 181株碳青霉烯类抗生素不敏感菌株中144株PCR扩增耐药基因阳性,A、B、D类碳青霉烯酶分别为39株、77株、28株;im CIM检测70株阳性,111株阴性,其中166株与PCR结果一致;EDPT检测72株阳性,109株阴性,其中134株与PCR结果一致。碳青霉烯类抗生素敏感菌株83株,PCR扩增耐药基因、im CIM及EDPT检测结果均为阴性。im CIM敏感性和特异性分别为85.71%(66/77)和97.86%(183/187),与PCR结果一致性Kappa值为0.859;EDPT敏感性和特异性分别为66.23%(51/77)和88.77%(166/187),Kappa值为0.561。im CIM抑菌圈差值(Δdim CIM)与EDPT抑菌圈差值(ΔdEDPT)有差别,差异有统计学意义(Z=-6.941,P<0.05)。采用im CIM检测B类碳青霉烯酶的Δdim CIM水平与A、D类酶Δdim CIM总体分布位置不同,差异有统计学意义(χ2=108.887,P<0.05)。im CIM与EDPT的ROC曲线下面积分别为0.988(95%CI:0.977~0.999)和0.936(95%CI:0.909~0.963)。结论 im CIM是一种准确、高效、便捷的碳青霉烯酶表型筛选方法,敏感性、特异性较高,适合用于流行病学监测。

武警某部医院碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因分析

目的检测临床碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(carbapenemresistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)感染的耐药基因,为治疗和防控提供依据。方法采用回顾性调查方法,收集2017-08至2020-03分离自武警四川总队医院13个科室的32株CRKP,用Microscan.Walk Away96全自动细菌鉴定药敏分析仪进行常规药敏试验,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合酶抑制剂增强试验判断其产金属β-内酰胺酶和丝氨酸碳青霉烯酶的情况。Gene-Xpert Carba-ⅩⅤⅠR2全自动病原体快速检测系统检测耐药基因。结果药敏结果显示我院CRKP对碳青霉烯类、头孢类、头霉素类、单环类、喹诺酮类、氨基糖苷类等抗菌药物均表现出较高耐药性。32株CRKP mCIM结果30株阳性;酶抑制剂增强试验结果表明,1株肺炎克雷伯菌产A类丝氨酸酶加B类β-内酰胺酶,其余29株产A类丝氨酸酶;GeneXpert检测耐药基因,30株mCIM试验结果阳性的菌株中1株肺炎克雷伯菌产KPC+NDM,其余29株均产KPC,没有产IMP,VIM,OX-48的菌株。结论该院CRKP对常用抗菌药物表现出高水平耐药,耐药机制主要为产碳青霉烯酶,耐药基因型主要为KPC型。在没有条件进行基因型分析的基层单位mCIM试验协同酶抑制剂增强试验能够满足临床需要。

CIM法应用于鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类检测的价值

目的:探讨改良Carba NP法和碳青霉烯酶失活(CIM)法应用于鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类抗菌药物快速检测中的价值。方法:纳入东莞市长安医院2020年3月至2021年3月期间临床分离的88株铜绿假单胞菌及88株鲍曼不动杆菌为研究对象,所有菌株均采用改良Carba NP法和CIM法检测,后以基因检测作为金标准,观察两种方法的检测价值(灵敏度、特异度、阴性预测值与阳性预测值)。结果:铜绿假单胞菌通过CIM法检测的灵敏度(96.15%)、阴性预测值(75.00%)均高于改良Carba NP法(84.62%、29.41%),差异均具有统计学意义(P<0.05);特异度(90.00%)、阳性预测值(98.68%)与改良Carba NP法(50.00%、92.96%)比较,差异均无统计学意义(P>0.05);鲍曼不动杆菌通过CIM法检测的灵敏度(90.67%)、特异度(92.31%)、阴性预测值(63.16%)及(98.55%)均高于改良Carba NP法(78.67%、53.85%、30.43%、90.77%),差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:CIM法应用于鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类抗菌药物快速检测的价值比改良Carba NP法更高。

mCIM与eCIM筛选肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的效果评价

目的评价改良碳青霉烯类失活法(modified carbapenem inactivation method,m CIM)和EDTA碳青霉烯类失活法(EDTAcarbapenem inactivation method,e CIM)对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型的筛选能力。方法分别收集碳青霉烯类耐药和敏感肠杆菌科细菌102株和53株,采用m CIM和e CIM进行碳青霉烯酶表型筛选试验,PCR法检测blaKPC-2、blaNDM-1、blaIMP-4、blaVIM-1和blaOXA-48耐药基因,并对表型筛选试验结果与基因检测结果的一致性进行统计分析。结果 102株碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌中97株检出耐药基因,包括51株blaKPC-2基因、38株blaNDM-1基因、5株blaIMP-4基因以及3株同时携带blaKPC-2和blaNDM-1基因;m CIM检出阳性98株,阴性4株。98株m CIM阳性菌中,e CIM阳性46株,阴性52株。53株碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌耐药基因检测及m CIM试验均为阴性。m CIM试验筛选碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌碳青霉烯酶产生的敏感性为99.0%,特异性为96.6%,与PCR结果一致性Kappa值为0.959;e CIM筛选金属酶敏感性为93.5%,特异性为94.6%,Kappa值为0.881;e CIM筛选丝氨酸碳青霉烯酶敏感性为92.6%,特异性为95.8%,Kappa值为0.882。结论 m CIM试验与e CIM试验联合检测,不仅可以有效筛选碳青霉烯酶产酶株,而且可同时区分碳青霉烯酶类型,对流行病学调查研究及疾病治疗有重要意义。

肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶的检测及基因型分析

目的分析耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药情况,检测常见的碳青霉烯酶的发生情况及基因型别,为临床治疗该类菌提供依据。方法采用VITEK-2型全自动微生物检测系统进行细菌鉴定和药敏试验;改良Hodge试验(MHT)、Carba NP试验和改良碳青霉烯灭活试验(m CIM)对碳青霉烯酶进行表型检测,EDTA协同试验检测金属酶;并采用聚合酶链反应(PCR)方法检测KPC碳青霉烯酶耐药基因,以及ERIC-PCR对耐药株的同源性分析。结果药敏试验显示25株CRKP仅对复方新诺明和米诺环素敏感率较高; MHT试验、Carba NP试验和m CIM试验结果一致,24株(96%) CRKP产碳青酶烯酶,1株CRKP未检出碳青霉烯酶,协同试验未检测出B类碳青霉烯酶(金属酶); 25株CRKP中有23株检测出bla KPC-2基因; ERIC-PCR分型可分为8型,其中Ⅱ型为主要的流行株,共14株,Ⅰ型3株,Ⅲ型和Ⅶ型各2株,Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅷ型各1株。结论 CRKP多药耐药情况严重,其碳青霉烯酶以产KPC-2型为主;改良Hodge试验、Carba NP试验和m CIM试验结果与PCR法有高度的一致性,且快速、简单,为临床提供了可靠的筛选方法。

改良Hodge试验、CNPt及mCIM筛选肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶的价值

目的探讨改良Hodge试验(MHT)、Carba NP试验(CNPt)及改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)检测肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶的价值。方法收集某院2016年12月—2017年11月临床分离的117株肺炎克雷伯菌,所有菌株进行药敏试验,其中碳青霉烯类耐药57株,敏感60株。以PCR法检测碳青霉烯酶基因为标准,评价3种方法检测肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶的价值。结果 57株对碳青霉烯耐药的菌株中,PCR阳性40株,包括39株KPC,1株NDM-1,未检出其他耐药基因。MHT、CNPt、mCIM阳性率分别为87.7%(50/57)、89.5%(51/57)、91.2%(52/57)。60株敏感菌PCR均未检出碳青霉烯酶基因,3种表型筛选试验结果均为阴性。以PCR为金标准,MHT、CNPt、mCIM灵敏度分别为97.5%(39/40)、100%(40/40)和100%(40/40),特异度分别为85.7%(66/77)、85.7%(66/77)和84.4%(65/77)。结论 CNPt是一种可靠的表型筛选方法,可用于流行病学和医院感染的监测。mCIM操作简单,结果判断明确,更适合临床微生物实验室常规开展。

mCIM试验与eCIM试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能

目的 分析改良碳青霉烯类失活法(mCIM)试验与EDTA-碳青霉烯类失活法(eCIM)试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能。方法 80株对碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科菌株,采用PCR法检测碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM),采用mCIM试验与eCIM试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型。以碳青霉烯酶基因检测结果为金标准,计算mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的敏感性和特异性,计算eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶、丝氨酸碳青霉烯酶菌株的敏感性和特异性,分析mCIM试验与eCIM试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能。结果 80株菌株中,59株碳青霉烯酶基因阳性菌株,其中57株试验菌株mCIM试验结果阳性,即mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的敏感性为96.6%(57/59)。21株碳青霉烯酶基因阴性菌株,mCIM试验结果均阴性,即mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的特异性为100.0%(21/21)。33株金属-β-内酰胺酶基因(blaNDM、blaVIM、blaIMP基因)阳性,其中28株试验菌株eCIM试验结果阳性,即eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶菌株的敏感性为84.8%(28/33)。47株金属-β-内酰胺酶基因阴性,eCIM试验结果均阴性,即eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶菌株的特异性为100.0%(47/47)。27株丝氨酸碳青霉烯酶基因(blaKPC基因)阳性,eCIM试验结果均阴性,即eCIM试验检测产丝氨酸碳青霉烯酶菌株的敏感性为100.0%(27/27)。53株丝氨酸碳青霉烯酶基因阴性,其中51株试验菌株eCIM试验结果均阳性,即eCIM试验检测产丝氨酸碳青霉烯酶菌株的特异性为96.2%(51/53)。结论 mCIM与eCIM联合实验检测产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型的敏感性和特异性较高。

CRE耐药性分析及eCIM联合mCIM的临床应用

目的了解武汉大学人民医院碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)的临床感染特点和耐药性,探讨乙二胺四乙酸-碳青霉烯类失活法(eCIM)联合改良碳青霉烯类失活法(mCIM)的临床应用,为有效防控院内感染和合理使用抗菌药物提供依据。方法分析分离自不同类型临床样本的非重复CRE的药物敏感性试验数据。另随机选取80株亚胺培南和/或美罗培南敏感性降低[最小抑菌浓度(MIC)≥2μg/mL]的CRE,联合mCIM和eCIM判断其产金属β-内酰胺酶和丝氨酸碳青霉烯酶的情况。结果共检出329株CRE,以肺炎克雷伯菌为主(59.0%),分布科室广泛,其中重症医学科和神经外科分别占16.4%和16.1%,感染部位多见于呼吸道(39.2%)。CRE总体对米诺环素和替加环素耐药率较低,分别为25.1%和2.9%,对其他常用抗菌药物的耐药率均高于50.0%。随机选取的80株CRE中有57株产碳青霉烯酶,其中产金属β-内酰胺酶的CRE 28株。结论武汉大学人民医院CRE耐药形势严峻,应随时监测,并根据药物敏感性试验结果合理用药。eCIM联合mCIM检测成本低、操作简单,是一种经济、高效的表型筛选方法。

双浓度联合改良碳青霉烯灭活试验筛查CRE的临床应用价值

目的评估双浓度联合改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)筛查碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)的临床应用价值。方法以VITEK 2 Compact N335卡的体外药物敏感性试验结果为标准,采用双浓度联合mCIM在231株分离自临床样本的肠杆菌科细菌中筛查CRE。结果VITEK 2 Compact N335卡筛选出CRE阳性菌株52株,阴性菌株179株,阳性检出率为22.5%;mCIM筛出CRE阳性菌株52株,双浓度联合mCIM筛出CRE阳性菌株53株,阴性菌株178株,阳性检出率为22.9%。以VITEK 2 Compact检测结果为参考,符合率为98.7%,敏感性为98.1%,特异性为98.9%;将mCIM检测阳性的52株CRE继续进行乙二胺四乙酸改良碳青霉烯灭活试验(eCIM),结果显示有13株肠杆菌科细菌金属-β-内酰胺酶为阳性,金属-β-内酰胺酶占碳青霉烯酶的25%。结论双浓度联合mCIM筛查CRE具有操作简单、不需要特殊仪器、结果易于观察等优点,适合在各级医院的微生物实验室中推广使用。对mCIM阳性菌株加做eCIM非常必要,有利于临床个性化用药。

改良Carba Np试验和mCIM/eCIM快速鉴定产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌表型的临床应用

目的评估改良Carba Np试验与碳青霉烯灭活试验(mCIM)/乙二胺四乙酸碳青霉烯灭活试验(eCIM)在检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型中的应用价值。方法收集136株肠杆菌科细菌临床分离株,其中耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)86株,碳青霉烯敏感株50株。分别采用改良Carba Np试验、mCIM/eCIM进行检测,并进行表型分析和分类,以聚合酶链反应(PCR)碳青霉烯酶基因鉴定结果为标准,评价2种改良方法检测结果的差异。结果86株CER中,耐药基因阳性81株;50株敏感菌株均未检出耐药基因。改良Carba NP试验阳性82株,mCIM/eCIM阳性78株。以PCR结果为标准,改良Carba NP试验和mCIM/eCIM检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的敏感性、特异性分别为96.3%、92.7%和92.6%、94.5%,Kappa值分别为0.935和0.917。改良Carba NP试验丝氨酸碳青霉烯酶检出率为97.7%,金属碳青霉烯酶检出率为100.0%。mCIM/eCIM检测金属碳青霉烯酶的敏感性为91.2%、特异性为90.4%。改良Carba NP试验与mCIM/eCIM碳青霉烯酶阳性检出率差异无统计学意义(χ^(2)=1.65,P>0.05)。结论改良Carba NP试验可快速、准确地鉴定CRE表型;mCIM/eCIM操作简便、干扰因素少。2种改良方法可以优势互补,有较大的临床应用价值。

mCIM、eCIM对碳青霉烯酶检测能力评估及CRE耐药特点分析

目的:评估碳青霉烯酶失活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)、EDTA碳青霉烯酶失活试验(EDTAcarbapenem inactivation method,eCIM)及改良Hodge试验对肠杆菌科细菌不同基因型碳青霉烯酶的检测能力,分析碳青霉烯类耐药的肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对临床常用药物最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),便于临床合理选择用药。方法:收集华北理工大学附属医院2018年6月至12月临床标本中分离的CRE菌株40株,经VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定/药敏系统进行鉴定及药敏试验,E-test法检测亚胺培南、美罗培南、替加环素、阿米卡星、左氧氟沙星、复方新诺明对CRE的MIC,微量肉汤稀释法检测多粘菌素的MIC。用mCIM、eCIM和改良Hodge试验检测CRE菌株产碳青霉烯酶的情况,用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测碳青霉烯类耐药基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM、blaOXA-48)、超广谱β-内酰胺酶基因(SHV、TEM、CTX、OXA-1)、AmpC酶编码基因(FOX)及膜孔蛋白ompK35、ompK36基因。结果:40株CRE中38株确定携带碳青霉烯酶基因,其中携带blaKPC35株,包括同时携带blaNDM7株,blaKPC+blaNDM4株。改良Hodge试验和mCIM、e CIM试验对KPC型碳青霉烯酶的阳性率均为100%(38/38);mCIM、eCIM试验对NDM型碳青霉烯酶的阳性率为100%(3/3),改良Hodge试验对NDM型碳青霉烯酶的阳性率为0。耐药性分析:40株CRE菌株对临床常用抗菌药物如三代、四代头孢菌素,酶抑制剂复合制剂,氨曲南,亚胺培南及美罗培南的耐药率均为100%,对左氧氟沙星、阿米卡星、复方新诺明的耐药率分别为90.0%、60.0%和42.5%,尚未发现对替加环素及多黏菌素耐药的菌株。结论:mCIM、eCIM试验和改良Hodge试验对KPC型碳青霉烯酶的敏感度高,mCIM、eCIM试验对NDM型的敏感性高于改良Hodge试验;不同基因型的CRE菌株耐药情况不同,建议针对不同耐药表型的CRE感染,合理选择抗菌药物。

耐碳青霉烯类的肺炎克雷伯菌的感染特点及耐药基因分析

目的了解该院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的感染特点、药物敏感性和碳青霉烯酶基因携带情况。方法收集该院2018年1月至2019年2月临床标本中分离的非重复耐碳青霉烯类的肺炎克雷伯菌,采用VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定仪进行细菌鉴定及药敏检测,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)和EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)检测碳青霉烯酶表型、聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶常见基因型。结果共收集95株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,细菌对多种临床常用抗菌药物均显著耐药。改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)91株阳性,EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)3株阳性。PCR结果显示92株携带碳青霉烯酶基因,未检测出耐药基因有3株,其中有86株携带KPC基因(93.4%),3株携带NDM基因,3株既携带KPC基因又携带NDM基因。结论耐碳青霉烯类的肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物耐药,对四环素、多西环素、替加环素相对敏感,而产KPC型碳青霉烯酶是该院肺炎克雷伯菌碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因。因此临床应根据药物敏感性结果合理选用抗菌药物,做好院感监测及防护,以防止耐药菌株的传播和流行。

某院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的临床分布特点及药物敏感性分析

目的分析该院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的临床分布特点及药物敏感性,为临床合理有效治疗CRE菌株提供理论依据。方法收集医院2019年全年临床标本中分离的肠杆菌科细菌(共计2435株),采用VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统进行细菌鉴定、药敏试验,对筛选出的CRE菌株采用K-B药敏纸片扩散法对亚胺培南进行复核,并采用改良碳青霉烯灭活(mCIM)试验和EDTA改良碳青霉烯灭活(eCIM)试验进行碳青霉烯酶表型分析。所有实验数据采用WHONET5.6和SPSS17.0软件进行统计分析处理。结果共分离出213株CRE菌株,以肺炎克雷伯菌为主(161株);标本来源以呼吸道痰液标本为主(41.3%);54.5%的标本分离自重症监护室(ICU),CRE菌株在ICU的分离率明显高于普通病房(χ^2=81.00,P<0.01)。药敏结果显示,CRE菌株除对替加环素比较敏感(耐药率为2.8%),对阿米卡星(51.6%)和四环素(52.0%)的耐药率低一些外,对其余大多数抗菌药物的耐药率均在80%以上。与碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌(CSE)的耐药率相比,CRE菌株对除四环素以外的其他抗菌药物的耐药率均明显高于CSE菌株(P<0.01)。mCIM和eCIM试验结果显示,213株CRE菌株中,170株为丝氨酸酶阳性,43株为金属酶阳性,且43株产金属酶的CRE菌株中,22株都来源于ICU,占比超过50%。不同细菌种类的CRE菌株中,耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌和耐碳青霉烯类大肠埃希菌产金属酶的比例均≥50%。结论CRE菌株对多种抗菌药物高度耐药,其临床分离率逐年增高,给临床治疗带来困难。因此应加强抗菌药物的管理,合理选择和使用抗菌药物,注重医院感染的预防和监测,防止医院内感染的传播和流行。

改良CarbaNP法和CIM法在耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌检测中的应用价值分析

目的探讨改良CarbaNP法和碳青霉烯酶失活法(CIM)在耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌检测中的应用价值。方法收集2014年1月~2015年6月河北省邢台市第三医院临床分离的120株鲍曼不动杆菌和100株铜绿假单胞菌。采用全自动微生物仪进行细菌鉴定和药敏试验;采用改良CarbaNP法和CIM法检测细菌碳青霉烯酶,后采用基因检测进行验证。结果120株鲍曼不动杆菌中,碳青霉烯类抗生素耐药株和敏感株分别占61.67%和38.33%;100株铜绿假单胞菌中,碳青霉烯类抗生素耐药株和敏感株分别占60.00%和40.00%。在鲍曼不动杆菌中,OXA-23基因携带率为94.59%(70/74),以其为标准,改良CarbaNP法和CIM法与基因检测法比较,差异无统计学意义(P>0.05)。改良CarbaNP法和CIM法分别与基因检测结果比较,CIM法的敏感性和特异性均略高于改良CarbaNP法,但差异无统计学意义(P>0.05)。在铜绿假单胞菌中,VIM-1阳性携带率为93.33%(56/60),以其为标准,改良CarbaNP法和CIM法与基因检测法比较,差异无统计学意义(P>0.05)。改良CarbaNP法和CIM法分别与基因检测结果比较,CIM法的敏感性和特异性均略高于改良CarbaNP法,但差异无统计学意义(P>0.05)结论改良CarbaNP法和CIM法在鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类抗生素快速检测中均具有一定价值,以后者检测效能较好。

临床克雷伯菌属碳青霉烯酶三种检测方法的实验比较研究

目的对聚合式酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、改良碳青霉烯酶灭活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)+EDTA碳青霉烯酶灭活试验(EDTA-carbapenem inactivation method,eCIM)和GeneXpert三种方法检测碳青霉烯酶的性能进行了比较,为临床选择合适的检测方法提供依据。方法收集2019年1月~2021年5月临床分离的43株碳青霉烯类抗生素耐药及37株碳青霉烯类抗生素敏感克雷伯菌属菌株,用PCR法和GeneXpert试验检测碳青霉烯酶基因,mCIM+eCIM试验检测碳青霉烯酶。以PCR法为金标准,对三种试验方法检测结果进行比较。结果43株耐碳青霉烯克雷伯菌属经PCR扩增检测有40株携带碳青霉烯耐药基因,blaKPC 30株,blaNDM 8株,blaIMP 2株;37株碳青霉烯类敏感克雷伯菌属经PCR扩增均未检出碳青霉烯酶基因。与PCR法结果相比,mCIM+eCIM试验检测丝氨酸酶及金属酶表型结果敏感度和特异度均为100%,Kappa值为1;GeneXpert技术敏感度和特异度分别为94.9%,97.6%,Kappa值为0.925。结论mCIM+eCIM试验和GeneXpert与PCR结果一致程度强,但鉴于临床诊断的时效性,GeneXpert技术操作简单,耗时短,结果准确可信且易于判读,对于有条件的医院,可以用于临床微生物实验室常规开展。

肺炎克雷伯菌耐药表型及分子分型特征分析

目的探讨肺炎克雷伯菌耐药表型及通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术分析其分子分型,为完善肺炎克雷伯菌分子流行病学特征提供依据。方法收集2018年1-12月肇庆市第二人民医院非重复分离的51株肺炎克雷伯菌为研究对象,采用微量肉汤法进行药敏试验;采用改良产碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)检测CRKP表型;采用PFGE进行分子分型,建立PFGE DNA指纹图谱数据库,并运用Bionumeries6.6生物软件进行聚类分析。结果51株肺炎克雷伯菌根据耐药谱可以分为4个耐药表型,其中产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(产ESBLsKP)28株(54.9%)、耐碳青霉烯酶类肺炎克雷伯菌(CRKP)4株(7.8%)、多重耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)9株(17.7%)、高毒力肺炎克雷伯菌(HvKP)10株(19.6%)。PFGE聚类分析结果显示,51株菌株间相似度为47.8%~100.0%,可分为47个PFGE型别,PFGE型别相似度>85.0%共10株,其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型具有100.0%相同PFGE图谱,可以视为4个具有分子流行病学意义的单一克隆群。结论肇庆市第二人民医院肺炎克雷伯菌耐药表型以产ESBLsKP为主,PFGE分型呈多样性,并存在院内散发感染风险,需要注意菌株型别变异趋势。