改良的多平台水环境法在睡眠剥夺动物模型中的应用与评价

改良的多平台水环境法(modified multi-platform method,MMPM)由单平台及多平台水环境法发展而来,目前多用于制备睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)动物模型。与单平台和早期的多平台水环境相比,MMPM可扩大动物的活动范围,减少群体分离和社会孤立带来的应激,具有易行性和适用性高及造模死亡率低的优点,是国内外较常用的一种SD造模方法。不过,影响SD模型制备的实验因素较多,MMPM在不同研究中的造模效果参差不齐。为提高模型的稳定性和实验的可重复性,本文梳理了MMPM在SD动物模型中的具体应用和评价方法,以供后期相关研究参考。

改良多平台法建立大鼠部分睡眠剥夺模型及其效果评价

目的利用改良多平台法建立一种大鼠部分睡眠剥夺模型,并对该模型进行评价。方法将50只大鼠随机分为正常对照组、大平台对照组、睡眠剥夺1天组、5天组、9天组,共五组,并采用改良后的多平台方法建立相应的模型体系;观察睡眠剥夺各时间段大鼠行为学变化以及睡眠剥夺后血清促肾上腺皮质激素(CORT)、皮质醇(ACTH)、促甲状腺激素(TSH)含量的变化。结果睡眠剥夺组大鼠行为学发生巨大改变,旷场试验中在垂直活动得分以及水平活动得分中NC组和TC组差异无统计学意义,睡眠剥夺1天以及睡眠剥夺5天组垂直活动得分和水平活动得分均高于正常对照组和大平台对照组,而睡眠剥夺9天组两方面得分均低于正常对照组和大平台对照组,且均有统计学差异。与正常对照组和大平台对照组相比,随着睡眠剥夺时间的延长大鼠血清中促肾上腺皮质激素(CORT)、皮质醇(ACTH)、促甲状腺激素(TSH)的含量均呈现先增高后降低的趋势。结论利用改良多平台方法建立相应的大鼠睡眠剥夺模型体系,具有良好的睡眠剥夺模拟效果,可以用来进行睡眠障碍实验的研究。

胃动力障碍型功能性消化不良动物模型的建立

目的建立一种动力障碍型功能性消化不良动物模型。方法采用碘乙酰胺灌胃+改良小平台法。将SPF级30只10 d龄雄性SD幼鼠随机分为正常组、模型Ⅰ组、模型Ⅱ组共3组,每组10只,正常组组给予2%蔗糖溶液灌胃(0.2 m L/d);模型Ⅰ组、模型Ⅱ组均给予0.1%蔗糖碘乙酰胺蔗糖溶液灌胃(0.2 m L/d),连续灌胃6 d。出生后第43 d,模型Ⅱ组给予改良小平台法处理,每日持续14 h,连续14 d。检测抓力、胃排空率、小肠推进率、胃体纵行肌和胃窦环形肌条收缩力,对动物模型进行评价。结果 3组大鼠抓力比较,差异无统计学意义(P>0.05);与正常组比较,模型Ⅱ组胃排空率及小肠推进率明显降低(P<0.05);模型Ⅱ组胃体纵行肌肌条平均振幅、Max振幅、Min振幅、(Max-Min)振幅均降低(P<0.05);模型Ⅱ组胃窦环行肌肌条Max振幅、(Max-Min)振幅、平均周期频率降低(P<0.05)。与模型Ⅰ组比较,模型Ⅱ组胃排空率及小肠推进率降低(P<0.05);模型Ⅱ组胃体纵行肌肌条平均振幅、Max振幅、Min振幅、(Max-Min)振幅均降低(P<0.05);模型Ⅱ组胃窦环行肌肌条Max振幅、Min振幅、平均周期频率降低,(Max-Min)振幅升高(P<0.05)。结论碘乙酰胺灌胃叠加改良小平台法制作出的功能性消化不良动物模型具有胃动力障碍特征。

脾虚1号方对脾虚型FD大鼠胃平滑肌收缩力的影响

目的探讨脾虚1号方对脾虚型FD大鼠胃平滑肌收缩力的影响。方法 70只10日龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组、FD模型组、脾虚型FD模型组、多潘立酮组、脾虚1号低剂量组、脾虚1号中剂量组和脾虚1号高剂量组,每组10只。每天分别给予蒸馏水1 m L/100 g、多潘立酮0.312 5 mg/100 g、脾虚1号方0.127 5 g/100 g、0.255 0 g/100 g、0.510 0 g/100 g,灌胃14天。记录体重、进食量及饮水量变化,并采用Power Lab生物信号采集系统记录离体大鼠胃体纵行肌和胃窦环形平滑肌条的收缩活动。结果与正常组比较,脾虚型FD大鼠胃体纵行肌平均振幅、Max振幅、Min振幅、(Max-Min)振幅降低,平均周期频率方面增加(P<0.01);胃窦环行肌平均振幅、Max振幅、平均周期频率降低(P<0.05,P<0.01)。与脾虚型FD模型组比较,脾虚1号方低、中、高剂量组胃体纵行肌平均振幅、Max振幅、Min振幅均增加,脾虚1号中剂量组平均周期频率降低(P<0.01);脾虚1号中剂量组胃窦环行肌平均振幅、Max振幅、Min振幅、(Max-Min)振幅、平均周期频率均增加,脾虚1号低剂量组平均振幅、Min振幅、平均周期频率方均增加,脾虚1号高剂量组Max振幅、Min振幅、(Max-Min)振幅增加(P<0.05,P<0.01)。结论脾虚1号方具有提高脾虚型FD大鼠胃动力作用,其机制可能是通过对胃体、胃窦平滑肌肌条收缩力和收缩周期频率的调节来实现。

脾虚四号方干预大鼠腹泻模型后结肠黏膜微观结构的变化

[目的]从微观结构的角度,观察脾虚四号方干预大鼠腹泻模型后,大鼠结肠黏膜的变化。[方法]采用水环境小平台站立法复合高乳糖饲料喂养的方法复制腹泻模型,通过透射电镜技术观察中药复方对大鼠腹泻模型结肠黏膜细胞微观结构的影响。[结果]模型组和正常组比较,模型组结肠上皮细胞损伤明显:微绒毛形态不规则且部分缺失;细胞膜破坏,出现裸核;线粒体内脊模糊不清、肿胀、电子密度改变;杯状细胞分泌异常活跃;细胞连接的缝隙连接明显增宽。中药干预组肠黏膜细胞损伤较轻,但仍存在微绒毛形态不规整,长短不齐,线粒体电子密度增高、形态不规则,杯状细胞分泌活跃等情况。另外,中药干预组结肠黏膜细胞出现异常隆起小体。[结论]小平台站立和高乳糖饲料喂养的方法造成的大鼠腹泻模型,其结肠黏膜细胞会出现微绒毛形态改变等微观结构的变化,而中药脾虚四号方干预可以缓解其电镜下黏膜损伤。

平台水环境法构建人类疾病动物模型的应用与思考

平台水环境法是利用啮齿类动物畏水的特点,强迫实验动物长时间站台而无法休息的一种造模方法。此方法可根据不同类型动物模型的需求,调整其应用的时间与节点进行模型构建。目前,平台水环境法的研究热点集中于睡眠剥夺、焦虑抑郁等精神类疾病及疲劳相关动物模型研究中。近年来,随着中医药现代化的发展,此方法也逐渐应用于以“心”“肝”“脾”为中心的中医证候模型与中医病证结合研究中。因为平台水环境法应用的广泛性与造模疾病的多样性,目前仍缺乏此方法的系统论述。本课题组系统归纳国内、外研究,从发展过程、应用现状及问题与发展3个维度探讨平台水环境法在人类疾病动物模型中的应用,并通过分析热点研究的睡眠剥夺、精神类疾病、疲劳、中医证候模型及中医病证结合模型等不同领域,有针对性的深入讨论平台水环境法在各动物模型建立中的构建思路与具体应用,以期为研究者提供有益参考,进而促进研究者对此进一步的探索与研究。