米曲霉(Aspergillus oryzae)植酸酶的分离纯化及性质研究

从5株霉菌中筛选出1株产胞外植酸酶最高的菌株(Aspcrgillusoryxae;简称霉菌3号)。经发酵,硫酸铵分级沉淀,Sephadex G—100凝胶过滤、SE—Sephadex G—50层析和电泳分离,获得2种植酸同工酶.此两种酶的分子量为40000d,等电点分别为4.5和4.8,最适pH为2.7和5.6,最适温度为50℃,K_m值为50μmol/L。SDS、Fe_^(2+)对酶活力无影响;Mn^(2+)、Ca^(2+)、Mg^(2+)有激活作用;Cu^(2+)有抑制作用。

国标法测定植酸酶活性存在问题的探讨

利用国标法测定植酸酶活性过程中发现,植酸钠底物溶液pH为6.48,高于酶活性单位定义中pH5.5。为进一步探讨植酸钠底物溶液pH对植酸酶活性的影响,本试验研究了调节与不调节植酸钠底物溶液pH对样品空白的吸光值以及植酸酶活性的影响。结果表明:将植酸钠溶液pH由6.48调至5.5对酶活测定中的样品空白无显著影响(P>0.05),但极显著影响植酸酶活性(P<0.01),未调节pH组植酸酶活性仅相当于调节pH组的66%,利用不同的酸调节植酸钠溶液pH,对植酸酶活性无显著影响(P>0.05)。

植酸酶的激活及其催化植酸钠水解提取肌醇

以脱脂米糠为原料提取肌醇,用离子交换树脂吸附植酸,再用NaOH洗脱,得到植酸钠溶液,采用植酸酶阳离子激活提高酶活后催化植酸钠水解,水解液最后用CaCO3溶液破坏水解平衡的原理辅助水解,从而制得得率高达11.5%的肌醇。

滴定法快速测定发酵液中植酸酶活性

目前植酸酶发酵液中植酸酶活测定方法主要采用比色法,但此方法受到发酵液中磷的严重干扰,大大降低了检测的准确性。为避免传统方法中磷对检测过程的影响,笔者基于酶活性可用单位时间、单位体积中底物的减少量来表示的原理,通过自动滴定检测植酸钠浓度变化并建立分析模型计算出植酸酶活性。结果显示:在200~1000 U/mL范围内,不同酶活单位的标准植酸酶酶解底物前后滴定时间差值与酶活单位大小成正相关(R^(2)=0.9905)。此外,利用滴定法和国标法同时测定植酸酶酶活性,两者呈明显线性相关(R^(2)=0.9728)。本研究建立的植酸酶活性测定方法耗时短、简单、易操作,对工业生产中植酸酶活性快速、准确测定具有重要意义。