基于CX3CL1/NF-κB信号通路探讨补肾强督方抑制M1巨噬细胞极化治疗强直性脊柱炎的机制研究

目的:观察补肾强督方对CX3CL1/NF-κB信号通路介导的M1型巨噬细胞极化的影响,从而阐明其治疗强直性脊柱炎的分子机制。方法:采用脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞构建细胞模型,并给予补肾强督方含药血清和CX3CL1抑制剂AZD8797进行干预。采用酶联免疫吸附试验检测细胞炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-17)的含量;采用流式细胞术检测CD86的表达;采用蛋白印迹检测iNOS、破骨分化标记蛋白(TRAP、Calcitonin和p-NFATC1β)及CX3CL1/NF-κB信号通路中相关蛋白的表达;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测iNOS mRNA的表达。结果:与模型组相比,与空白组相比,模型组巨噬细胞TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-17的含量和CD86+巨噬细胞的比例显著增加,iNOS、CX3CL1、p-P65、p-IKKα/β、p-IkBα、TRAP、Calcitonin和p-NFATC1β蛋白和iNOS mRNA的表达显著上调,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,补肾强督方能够显著降低巨噬细胞TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-17的含量和CD86+巨噬细胞的比例,下调iNOS、CX3CL1、p-P65、p-IKKα/β、p-IkBα、TRAP、Calcitonin和p-NFATC1β蛋白和iNOS mRNA的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:补肾强督方通过抑制CX3CL1/NF-κB信号通路的激活,从而抑制巨噬细胞M1型极化,实现抑制炎症和破骨细胞的分化的作用。

GEO芯片结合网络药理学及分子对接研究升降龙莲汤治疗子宫内膜癌的作用机制

目的 研究基于网络药理学、基因芯片和分子对接探讨验方升降龙莲汤治疗子宫内膜癌的作用机制。方法 通过口服生物利用度和类药性在TCMSP数据库中挖掘升降龙莲汤的有效成分,利用GEO中GSE115810数据集、OMIM和GeneCards数据库获取子宫内膜癌的靶基因。对活性成分和Endometrial cancer的共同靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析。使用STRING建立蛋白相互作用PPI网络,导入Cytoscape后根据度值筛选核心靶点,然后整合差异基因的上调和下调,通过Kaplan Meier-Plotter生存曲线分析,进一步筛出与子宫内膜癌预后关系更紧密的靶基因。最后,利用AutoDock对关键成分与核心靶基因进行分子对接验证。结果 从升降龙莲汤中获取成分66种和289个潜在治疗靶点。通过3个数据平台共获取1048个子宫内膜癌相关靶点,其中交集靶点97个。从PPI网络中获得靶基因12个,经K-M生存曲线进一步筛选得到靶基因7个。GO和KEGG富集结果显示,生物进程方面,尤以细胞迁移的正调控最显著,癌症信号通路富集最多。分子对接验证发现槲皮素、木犀草素、汉黄芩素、山柰酚、黄芩素与靶基因结合较紧密。结论 升降龙莲汤干预子宫内膜癌主要机制是通过多靶点、多信号通路,抑制或提高关键基因的表达,阻滞癌细胞增殖与侵袭,促进肿瘤细胞凋亡。

基于网络药理学和分子对接探究《杨氏家藏方》趁痛散治疗强直性脊柱炎的机制

目的:运用网络药理学和分子对接探究趁痛散治疗强直性脊柱炎的作用机制。方法:通过TCMSP等4个数据库获取趁痛散药物信息,通过GeneCards等5个数据库筛选已知的强直性脊柱炎靶点;利用Cytoscape等工具构建Venny图、相关网络图;利用DAVID对交集靶点进行GO富集分析和KEGG富集分析,并借助微生信对结果可视化;从PDB中获得靶蛋白导入Autodock,进行虚拟分子对接分析。结果:经过筛选趁痛散共有103个中药成分作用于99个交集靶点;构建PPI网络图筛选3个核心靶点;构建中药-靶点网络图筛选3个中药成分;GO功能分析主要涉及对外反应等;KEGG富集分析得到IL-17信号通路等关键通路;分子对接结果表明,趁痛散中的槲皮素等与血清白蛋白等有较好的结合能力。结论:研究预测了趁痛散对强直性脊柱炎的可能作用机制,但还须后续研究验证。

基于网络药理学与分子对接探究麻黄-桂枝药对治疗类风湿性关节炎机制

通过TCMSP数据库检索麻黄、桂枝中的活性成分以及对应的靶点蛋白,在GeneCards数据库中以“rheumatoid arthritis”为关键词检索类风湿性关节炎(RA)的相关靶点,将收集的2类靶点相互映射取交集后通过STRING平台构建PPI网络,利用Cytoscape软件进行可视化分析;借助David 6.8数据库,对交集靶点进行GO与KEGG富集分析;最后利用Schrodinger软件对核心靶点与关键活性成分进行分子对接验证。2类靶点映射得到交集靶点共134个,PPI分析得到核心靶点为AKT1、IL6、TP53、RELA和CCND1。GO与KEGG富集分析得到关键信号通路为TNF信号通路、Toll样受体信号通路和PI3K-Akt信号通路。分子对接结果显示槲皮素、木犀草素、二氢槲皮素与AKT1、IL6、TP53有较好的结合效果。研究推测麻黄-桂枝药对中的活性成分可能通过抑制炎性介质表达、抑制关节滑膜中树突细胞以及巨噬细胞过量增殖等途径来阻止RA病理发展进程。

黄芩射干汤对MRSA抑菌作用及初步作用机制研究

目的 研究黄芩射干汤对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的抑菌作用并采用计算机辅助药物设计法初步揭示其药效物质基础和作用机制。方法 采用琼脂平板打孔法测定抑菌圈直径来评判药物对MRSA的抑菌效力,采用iGemdock软件,以青霉素结合蛋白PBP2a(PDB编号4CJN)活性位点进行分子模拟研究。结果 黄芩射干汤水提取液(1 g生药/mL)对临床分离MRSA菌株有显著抑菌作用,在PBP2a蛋白的活性位点,相对分值>0.8的共计164个,其中可进行后期质量控制研究的化合物有16个。结论 黄芩射干汤可能通过影响PBP2a来发挥对MRSA的抑菌作用,其对接位点信息对药效物质基础和作用机制研究提供参考。

不同直链/支链比的玉米淀粉分子质量及其构象

采用凝胶渗透色谱(GPC)和十八角度激光光散射(MALLS)技术,以二甲基亚砜为流动相测定蜡质玉米淀粉、普通玉米淀粉、直链/支链比1:1的高直链玉米淀粉(G50)、直链/支链比4:1的高直链玉米淀粉(G80)的分子质量及其分布以及在二甲基亚砜(DMSO)溶液中的均方根旋转半径和构象。结果表明:分子质量最大的是蜡质玉米淀粉,其重均分子质量达到了1.416×108g/mol,其次是普通玉米淀粉2.744×107g/mol与G501.026×107g/mol,最小的是G80的3.992×106g/mol;均方根旋转半径也是随着直链淀粉含量的增加依次减小;蜡质玉米淀粉在DMSO溶液中的构象是较为紧密的无规则卷曲型,其他3种玉米淀粉的构象均为球型。

鱼腥草地下茎提取物诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡机制的研究

目的对鱼腥草不同部位提取物诱导SGC-7901细胞凋亡及其机制进行研究。方法将鱼腥草地上茎(AS)、地下茎(SS)、叶(L)的粉末经乙醇提取得浸膏;处理SGC-7901细胞48 h后,采用Alamar blue法检测其对SGC-7901细胞增殖的影响;筛选出较高活性浸膏,光学显微镜、Hoechst33258染色观察细胞形态;DNA Ladder琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况;Caspase-3活性检测试剂盒测定Caspase-3酶活性。Western blot检测凋亡相关因子的表达;Caspase-9抑制剂(Z-LEHD-FMK)验证浸膏调控的信号转导通路。结果各部位浸膏对SGC-7901细胞均有一定的增殖抑制活性,其中SS提取物活性最强;不同浓度的SS提取物作用SGC-7901细胞48 h后,细胞明显凋亡;DNA ladder条带也明显;Caspase-3的活性明显高于对照组;Bax、Bid、Bak、p53、Caspase-9表达上调,Bcl-2表达下调;Caspase-9抑制剂(ZLEHD-FMK)能够逆转SS对SGC-7901细胞的增殖抑制活性。结论 SS对SGC-7901细胞的增殖抑制作用最强,且是通过Caspase-9介导的线粒体凋亡信号转导通路来调控细胞凋亡的。

HPGFC-ELSD法测定商陆多糖的重均相对分子质量

目的 :测定商陆多糖的重均相对分子质量。 方法 :将商陆多糖分离纯化 ,采用 HPGFC- EL SD法测定重均相对分子质量分布。测定条件为 TSK柱 (G2 0 0 0 SW,7.5 mm× 30 0 mm) ;水为流动相 ,流速 1 .0 ml/ min;漂移管温度 4 0℃ ;气体 (N2 )压力 2 .0× 1 0 5Pa。结果 :多糖重均相对分子质量的线性范围为 1 0 0 0 0～ 1 70 0 0 0 (r=0 .973) ,测得商陆多糖重均相对分子质量约为 76 896 .4。 结论

二正丁基锡（IV）基羧酸酯的谱学表征

合成了１０个二正丁基锡（ＩＶ）基羧酸酯化合物｛［￣ｎＢｕ＿２Ｓｎ（Ｏ＿２ＣＲ）］＿２Ｏ｝＿２（Ａ１～Ａ５）和￣ｎＢｕ＿２Ｓｎ（Ｏ＿２ＣＲ）＿２（Ｂ１～Ｂ５）（Ｒ＝１：ＣＣｌ＿３；２：ＣＨＣｌ＿２；３：ＣＨ＿２Ｃｌ；４：ＰｈＣＨ＝ＣＨ；５：２，２，３，３－四甲基环丙基），其中Ａ４、Ａ５和Ｂ５为新化合物，对它们进行了元素分析和ＩＲ及、￣１Ｈ、￣（１３）Ｃ、￣（１１９）ＳｎＮＭＲ谱表征，重点讨论了￣（１３）Ｃ和￣（１１９）ＳｎＮＭＲ谱的谱学特征及化学位移值与母体酸的ＰＫａ值大小的关系，并在此基础上推测了它们分子结构。

肝豆状核变性的系列研究

肝豆状核变性（ＷＤ）是一种较为常见的常染色体隐性遗传、铜代谢障碍性疾病。作者从８０年代初开展ＷＤ的研究，至今已对ＷＤ的临床表现、发病机理、病理改变、遗传学、诊断、治疗等各方面进行了系统研究，研究手段从临床总结开始，接着开展生化、病理、影像学研究，进而采用细胞培养、分子生物学等新技术，紧紧围绕患者早期诊断和杂合子检测这个中心，层层深入，取得了很大进展，尤其是在ＷＤ离体培养皮肤成纤维细胞模型和分子生物学研究方面已达到国际先进水平。

樟子松外生菌根形态类型及分子鉴定

以内蒙古及周边地区樟子松的外生菌根为材料,采用形态解剖学与分子生物学手段相结合的方法,对与樟子松共生的外生菌根真菌多样性进行了全面调查及研究,并将所测序列在Gen Bank中进行比对。结果表明:在内蒙古及周边地区与樟子松共生的外生菌根真菌共19种,担子菌15种,子囊菌4种,分别来自于丝膜菌属(Cortinarius)、丝盖伞属(Inocybe)、牛肝属(Suillus)、蜡壳耳属(Sebacina)、红菇属(Russula)、乳菇属(Lactarius)、棉革菌属(Tomentella)、黏滑菇属(Hebeloma)和空团菌属(Cenococcum)、块菌属(Tuber)、口蘑属(Tricholoma)。表明樟子松外生菌根真菌多样性相对较高,且与利用地上子实体鉴定的外生菌根真菌种类有一定的区别。

壳层悬挂β-环糊精单元的两亲性超支化聚合物的分子包合与识别行为

采用紫外分光光度法研究了两种壳层悬挂β-环糊精单元的两亲性超支化聚合物在缓冲溶液(25℃,pH=11)中的分子包合与识别行为.结果表明,两种聚合物具有来自环糊精单元和两亲性超支化聚合物的双重包合能力,可分别与水溶性染料分子酚酞(PP)、甲基橙(MO)、有机小分子对硝基苯酚(p-NP)等3种客体分子发生单客体包合效应,而且其包合能力强于单一的环糊精或两亲性超支化聚合物;通过客体分子PP和MO证实了这两种聚合物还具有双重识别能力,可以与PP和MO发生双客体包合效应.

STRAP异常表达对胃癌细胞分化的作用

目的:探讨丝苏氨酸激酶受体相关蛋白(serine-threonine kinase receptor-associated protein,STRAP)异常表达对胃癌细胞分化的影响。方法:收集北京大学肿瘤医院消化肿瘤外科于1991年1月至2009年1月手术切除的胃癌标本253例,同时另取103例同批胃癌患者癌旁组织标本作为对照,制备组织芯片。采用免疫组化检测胃癌组织和癌旁组织中STRAP蛋白的表达,分析其表达与胃癌组织细胞分化、临床分期等临床病理因素的关系,采用Kaplan-Meier生存分析探讨STRAP蛋白的异常表达与胃癌患者预后的关系;将STRAP真核表达载体转染胃癌细胞SGC7901,采用Western blotting检测转染后胃癌SGC7901细胞中STRAP蛋白的表达情况,MTT法检测SGC7901细胞的增殖能力,免疫荧光染色法检测胃癌组织细胞分化相关蛋白胃蛋白酶原C(pepsinogen C,PGC)在SGC7901细胞中的表达情况,同时分析碱性磷酸酶(alkaline phosphatases,AKP)在STRAP过量表达细胞中的活性。结果:胃癌组织中STRAP蛋白的阳性表达率明显低于癌旁组织[33.6%(75/223)vs 59.3%(51/86),P<0.01],且其表达水平与胃癌细胞分化程度密切相关(P<0.05),STRAP蛋白表达较高的患者预后生存期明显长于低表达患者(P<0.05)。胃癌SGC7901细胞过表达STRAP蛋白后,其增殖能力明显减弱(P<0.05);胃癌组织细胞分化相关蛋白PGC表达水平显著升高(P<0.05),而AKP活性明显下降(P<0.05)。结论:STRAP蛋白在胃癌组织中的表达水平与胃癌组织细胞分化密切相关,其可能作为分子标志物对胃癌组织细胞分化程度和预后的辅助判断具有良好的临床价值。

二花脸猪产仔数性状的分子标记及其效应分析

采用PCR及PCR-RFLP技术对FSHβ、ESR和PRLR基因在二花脸猪群体内的多态性及对繁殖性状的影响进行了检测与分析。结果表明:108头二花脸猪中检测到FSHβ基因的AA和AB基因型,ESR和PRLR基因的AA、AB和BB 3种基因型。FSHβ基因的AA基因型初产和经产的总产仔数(TNB)和产活仔数(NBA)均显著或极显著高于AB基因型;ESR基因的BB基因型初产及经产TNB和NBA均显著高于AB基因型和AA基因型;PRLR基因的AA基因型和AB基因型初产和经产TNB和NBA均高于BB基因型(P<0.01)。FSHβ基因的AB基因型初产和经产初生质量(BW)和断奶质量(WW)均高于AA基因型(P>0.05);ESR基因的AA基因型初产和经产BW高于AB和BB基因型(P<0.05),WW高于BB基因型;PRLR基因的BB基因型初产和经产仔猪的WW均显著高于AA基因型(P<0.05)。FSHβ、PRLR和ESR基因对二花脸猪繁殖性状有一定影响,可作为二花脸猪繁殖性状辅助选择的标记。

白芨多糖的醇沉分级

目的乙醇梯度沉淀白芨多糖,以期获得不同分子量段的多糖,并对梯度分离效果进行了初步评价。方法水提醇沉法制备白芨粗多糖,采用不同浓度乙醇对所得白芨粗多糖进行梯度沉淀,测定并计算各级产物的黏均分子量和总多糖含量。结果水提醇沉所得白芨粗多糖中总糖含量为67.62%,收率为34.70%。梯度醇沉后所得各分级产物的黏均分子量随乙醇浓度升高而降低。紫外和红外图谱均显示各分级产物与粗多糖波形近似。结论梯度醇沉法用于白芨多糖的分子量分级简便易行、高效可控,并兼有纯化效果。

原位晶化NaY分子筛制备过程中含硅废水的处理工艺研究

以阳离子表面活性剂YC和非离子表面活性剂YN为絮凝剂,采用酸化硫酸铝中和法处理原位晶化制备NaY分子筛工艺中产生的含硅洗涤废水,考察了废水硅浓度,终点pH值,成胶温度和絮凝剂用量对滤液处理效果的影响。结果表明,在室温下,废水硅浓度为20 g/L,终点pH值为7.0,絮凝剂YC,YN用量分别为10×10-65,0×10-6的优化条件下,滤液硅浓度为0.42 g/L,透光率为97.1%。

用CHEF凝胶电泳探测远缘担子菌间原生质体融合后的染色体变异

用电场诱导灰盖鬼伞(Coprinus cinereus Co5104,his^-)和佛罗里达侧耳(Pleurotusflorida Pf67, ade^-)两菌株的原生质体融合,获得了两类属间融合子:一类为不断发生分离的单核体,另一类为稳定的双核异核体。利用等高钳位均匀电场(CHEF)凝胶电泳技术比较融合子与两亲本的染色体长度多型性(CLP),显示出融合子的染色体变异以整条染色体的丢失为主。结合形态观察和DAPI核荧光染色的结果,推测单核融合子在胞质融合后很可能发生了核融合,但来自亲本Pf67的染色体不断丢失,最后融合子的遗传组成以来自Co5104的染色体为主;而双核融合子在质配之后可能并未发生核配,不过,来自各亲本的染色体最终均只有部分得以保留在融合子中。

串珠镰刀菌伏马菌素产毒株分子遗传学研究进展

伏马菌素是一组主要由串珠镰刀菌产生的真菌毒素。伏马菌素B1对某些牲畜有急性毒性及潜在的致癌性 ,如引起马脑白质软化症、猪肺水肿或大鼠肝癌 ,流行病学研究认为其与人类食管癌的高发有关。目前国际上对伏马菌素的研究已经深入到分子水平 ,通过对串珠镰刀菌伏马菌素产毒株的遗传学研究 ,鉴定了 4个与伏马菌素生物合成相关的基因fum1、fum2、fum3和fum4及由 4个基因fum6、fum7、fum8和fum9所组成的伏马菌素生物合成协同调节基因蔟。应用简并PKS引物 ,进行PCR扩增 ,证明fum5为伏马菌素生物合成所必需的多酮肽合成酶基因。并对串珠镰刀菌伏马菌素产毒株进行了分子生物学研究。还通过转基因技术来控制串珠镰刀菌感染及伏马菌素生成 ,以减少对人、动物健康及食品安全的危害。

H(Mg,Co)AlPO_4-5杂原子分子筛的酸性质测定

以红外光谱和程序升温脱附法研究了H(Mg,Co)AlPO_4-5分子筛的酸性,样品红外谱图中的3820和3680cm^(-1)谱峰分别归属于v_(Al—OH)和v_(p—OH),而3660～3568cm^(-1)谱峰则分别归属于HMgAlPO_4-5和HCoAlPO_4-5分子筛的M(OH)P(M=Mg,Co)基团的振动,酸强度顺序为:Co(OH)P>Mg(OH)P>P(OH)>Al(OH),吡啶吸附的红外光谱揭示,H(Mg,Co)AlPO_4-5分子筛具有较高酸强度的B酸和L酸中心。NH_3-TPD表明分子筛的酸强度顺序为H(Co)AlPO_4-5>H(Mg)AlPO_4-5>>AlPO_4-5。