蒙药黑苏嘎-25促进神经元骨架蛋白表达提高神经递质含量改善阿尔茨海默病小鼠症状

目的探讨蒙药黑苏嘎-25治疗阿尔茨海默(AD)小鼠的效果及机制。方法6月龄快速老化模型SAMP8小鼠分为模型组、[360 mg/(kg·d)]黑苏嘎-25处理组、[90 mg/(kg·d)]黑苏嘎-25处理组、多奈哌齐对照组[0.92 mg/(kg·d)],每组15只,另选择15只6月龄正常衰老SAMR1小鼠作为空白对照组。模型组和空白对照组小鼠常规喂养,生理盐水灌胃,其他给药组按照给药剂量灌胃,所有组灌胃均每天1次,共15 d。给药完成后第1天~第5天,各组取3只小鼠采用Morris水迷宫试验检测各组小鼠逃避潜伏期,穿越平台次数和停留时间。尼氏染色观察尼氏体数量,免疫组织化学染色法检测微管相关蛋白2(MAP-2)、低分子量神经丝蛋白(NF-L)表达和分布,Western blot法检测MAP-2、NF-L蛋白水平。ELISA检测小鼠脑组织(皮层、海马)中神经递质乙酰胆碱(ACh)、五羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)的含量。结果与空白对照组相比,模型组逃避潜伏期延长,穿越平台次数和停留时间减少,尼氏体减少,MAP2和NF-L蛋白表达减少;与模型组比较,黑苏嘎-25给药组逃避潜伏期缩短,穿越平台次数和停留时间增加,尼氏体数量增加,MAP-2和NF-L蛋白表达增加。[360 mg/(kg·d)]黑苏嘎-25处理对上述指标的影响更明显。与空白对照组比较,模型组海马及皮层中ACh、NE、DA及5-HT的含量明显减少,与模型组比较,低剂量组、高剂量组、多奈哌齐对照组ACh、NE、DA及5-HT含量显著增加。结论蒙药黑苏嘎-25治疗可改善AD模型小鼠学习记忆能力,保护小鼠神经功能,可能与促进神经元骨架蛋白表达并提高递质含量有关。

大豆降压肽的研制(Ⅲ)——酶E水解进程参数的研究

对生产降血压活性肽蛋白酶Ｅ的水解参数作一研究，反相ＨＰＬＣ分析表明：产物中至少有１８种肽。

液质联用分析重组人白细胞介素-11的肽图

目的用液质联用技术分析鉴定重组人白细胞介素-11(rhIL-11)的肽图。方法用胰蛋白酶酶解rhIL-11,采用HPLC测定肽图,用电喷雾-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF/MS)技术分析肽段的精确相对分子质量,通过串联质谱(MS/MS)测定肽段的氨基酸序列。结果根据肽段的色谱保留时间、相对分子质量及对其碰撞诱导解离质谱的解析结果,归属出肽图中各肽段所在的色谱峰,已检出肽段的总覆盖率为97%。结论液质联用研究肽图是验证和分析蛋白质结构的高效准确的方法。

不同菌草基质栽培灵芝多指标质量评价

【目的】以水溶性浸出物、灵芝多糖肽、灵芝酸、灵芝甾醇、单糖组成和分子量特征图谱为指标综合评价不同菌草基质栽培灵芝的品质。【方法】采用HPLC法测定多糖肽、灵芝酸、甾醇含量和单糖组成,运用统计学方法比较不同基质栽培灵芝的差异及其相关性。【结果】不同栽培基质的水溶性浸出物含量为14.21%~17.35%,灵芝多糖肽含量为3.80%~6.63%,灵芝酸总量为0.24%~0.53%,甾醇含量为31.43~69.16μg·g^(-1);主成分分析筛选出2个主成分,累计方差贡献率84.63%;相关性分析显示浸出物与活性成分呈正相关;单糖组成主要是葡萄糖和少量甘露糖;分子量特征图谱标定了6个共有峰,组间相似度大于0.98。【结论】不同基质栽培灵芝的活性物质含量存在显著差异,其中灵芝多糖肽和灵芝酸可作为灵芝质量评价重要指标;类芦、芦竹和五节芒栽培灵芝富含活性成分,这为科学利用菌草栽培灵芝提供参考。

棉花6个小分子质量热激蛋白基因的序列、表达与定位

利用棉花纤维cDNA文库,分离到6个小分子质量的热激蛋白基因。序列结构分析发现,它们分别属于3种不同类型的小热激蛋白。RT-PCR分析表明,它们在棉花体内具有不同的转录表达特征,可能行使不同的功能,它们的转录与棉花特定的发育阶段相关,线粒体小热激蛋白和细胞质Ⅰ类小热激蛋白基因受纤维启始和分化的调控,而细胞质Ⅱ类小热激蛋白与棉花叶片的生长发育相关。利用本实验室的四倍体棉花遗传图谱,对这6个小热激蛋白基因进行定位,其中3个被定位在A4、D8和A6染色体上。

应用重组自交系群体定位大豆根重QTL

应用构建的NJRIKY(科丰1号×1138-2)大豆重组自交家系群体,对大豆根重QTL进行8次重复的随机区组分析;以该群体所构成的遗传连锁图谱为基础,采用复合区间作图法(Cartographer V.1.21)检测到3个与根重有关的QTL位于连锁群N3-B1和N6-C2上。其中rw1在N3-B1的端距离是66.31cM,位于A520T～ACCCA-GO5区间,rw2和rw3分别在N6-C2的端距离是169.91cM和179.71cM,并与OPW13和ACGCATO6重叠。LOD值分别是10.34、4.01和3.15,可以解释26.3％、9.2％和6.8％的遗传变异。加性效应估计值分别为-0.514、-0.303和-0.260。

中药多糖定性鉴别与糖谱的研究进展

中医复方疗效与中药质量密切相关,采用科学方法评价中药质量十分必要。定性鉴别与指纹图谱是评价中药质量的主要指标。中药多糖多为不同分子量分布范围的混合物,其生物活性与其单糖组成、分子量大小与分布等结构因素密切相关。目前《中华人民共和国药典》仅采用理化鉴别法对中药中的多糖进行定性鉴别,未收载中药多糖的糖谱分析方法,无法体现各中药多糖的真实状态。本文通过系统查阅文献,归纳国内外中药多糖定性鉴别与糖谱的最新研究内容,主要从多糖分子量分布和多糖的单糖组成两方面开展研究。其中,依据多糖分子量分布的定性鉴别主要采用高效凝胶渗透色谱法(high performance gel permeation chromatography,HPGPC)、质谱法(mass spectrum,MS)和黏度法,依据多糖单糖组成的定性鉴别主要采用气相色谱法(gas chromatography,GC)、高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)、离子色谱法(ion chromatography,IC)、薄层色谱法(thin layer chromatography,TLC)和高效凝胶电泳法(high performance capillary electrophoresis,HPCE)。糖谱是通过多批次样品分析而获取的共性信息建立的图谱,依据多糖整体结构特征的糖谱建立主要采用HPGPC法、红外光谱法(infrared ray,IR)和近红外光谱法(near infrared ray,NIR),依据多糖单糖组成的糖谱的建立主要采用HPLC法,通过归纳总结分析以期为科学合理地评价中药多糖质量,从而保障中医临床疗效提供依据。

培矮64S/93-11重组自交系分子图谱构建及千粒重QTL检测

利用光、温敏核不育系培矮64S与常规品种93-11进行杂交,以单粒传方法建立含217个单株的重组自交系(R ILs)群体。选用775对SSR引物进行亲本多态性筛选,共有170对检测到多态性,频率为21.9%。构建的水稻分子遗传图谱共包含141个标记座位,总图距约2 060.4 cM,标记间平均图距为14.6 cM。群体中标记偏分离情况较严重。以该R ILs群体217个株系为材料,对千粒重性状进行了QTL分析。结果表明:在R ILs群体中检测到3个与千粒重相关的QTL,分别在第1、5、8染色体上,命名为qTGW-1、qTGW-5、qTGW-8,其LOD值为5.51、3.31、4.94,贡献率为17.90%、6.12%、9.59%。qTGW-1控制千粒重的增效基因来自低值亲本培矮64S,qTGW-5和qTGW-8控制千粒重的增效基因来自高值亲本93-11。通过相应的含有154个家系的全基因组染色体片段置换系(CSSLs)群体图示基因型分析,证实了在第1染色体上标记RM315附近存在控制千粒重的增效基因,来源于染色体片段供体亲本培矮64S,使千粒重增加1.03 g;在第5、8染色体上标记RM3663、RM310附近存在控制千粒重的增效基因,来自染色体片段受体亲本93-11,使千粒重分别增加0.63 g和0.80 g。

IgG1型单克隆抗体对照品的一级结构解析

对单克隆抗体药物对照品(IgG1型)进行了全面的结构表征。采用ExactiveplusEMR质谱测定了去N糖前后抗体的精确分子量,并通过计算N糖含量得出其完整分子量为148285.0~149020.8,完整去糖后分子量为145810.4,N糖含量为1.67%~2.15%。优化了全柱成像实时等电聚焦毛细管电泳(WCID-cIEF)检测方法,结果显示该抗体等电点分布在8.21~8.74之间,其中主成分等电点为8.61,相对含量为61.43%。继而使用离子交换色谱检测了电荷异质性,发现碱性峰含量为4.1%,酸性峰含量为23.9%,主峰含量为72.0%,与WCID-cIEF结果吻合,并证明了方法间良好的重现性。通过切糖前后的肽图分析,获得糖肽分布信息,识别出糖修饰位点及重轻链的互补决定区(CDR),甲硫氨酸(M)的氧化位点及氧化率,并通过抗体还原前后的肽图解析出二硫键连接。研究结果同时提示该抗体对照品无C末端糖化修饰现象。

外科皮瓣中纤维囊的组织学及超微结构观察

目的 探讨纤维囊在外科皮瓣中的作用及意义。方法 应用光镜、电镜对６例纤维囊组织进行观察及形态学计量分析。结果 纤维囊主要由成纤维细胞、胶原纤维、成肌纤维细胞所组成，其内的毛细血管数目明显高于正常人真皮内毛细血管数目（Ｐ＜０．０１）。结论 纤维囊对外科皮瓣起支持保护及营养作用，对于填补组织缺损和弹性回缩起一定作用。

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子原液中相关蛋白的定性分析

目的分析鉴定国产重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子原液中的相关蛋白。方法采用液质联用技术,对产品的相关蛋白进行相对分子量测定及肽图分析,分别从分子量及肽段水平进行鉴定。结果对两家生产企业的原液进行检测,相对分子量测定结果显示:样品中存在的相关蛋白有氧化形式、乙酰化形式。肽图分析结果显示:在第1位、第79位或第80位甲硫氨酸上发生了氧化修饰,在第64位或/和第73位赖氨酸上发生了乙酰化修饰。结论为重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的质量研究提供了依据。

中药多糖质量控制体系初探

中药多糖的质量控制对确保其有效性和安全性至关重要,然而多糖结构的复杂性导致多糖质控标准研究进展缓慢。建立中药多糖类产品质控体系,既是对已上市产品质量的保证,更是多糖类新药研发的关键前提。本文对中药多糖质量标准现状、研究现状进行了总结,同时对一些新的研究思路,如多元指纹图谱和糖谱法进行介绍。在此基础上提出了目前中药多糖质控体系亟需解决的问题,旨在为中药多糖质量控制体系的建立提供参考。