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鮟鱇鱼皮活性肽的分离纯化及其对HK-2细胞损伤保护的作用
1
作者
许珂
缪秉陶
+3 位作者
曹洪杰
任祥雨
李航婷
杨最素
《广东海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期1-10,共10页
【目的】为探讨鮟鱇(Lophius litulon)鱼皮活性肽(Monkfish skin peptides,MSP)对棕榈酸(Palmitic acid,PA)诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2细胞)损伤保护的作用。【方法】以新鲜鮟鱇鱼皮为材料,选取加酶量、提取时间、pH、温度和料...
【目的】为探讨鮟鱇(Lophius litulon)鱼皮活性肽(Monkfish skin peptides,MSP)对棕榈酸(Palmitic acid,PA)诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2细胞)损伤保护的作用。【方法】以新鲜鮟鱇鱼皮为材料,选取加酶量、提取时间、pH、温度和料液比为因子,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)清除率为响应值,分别进行单因素实验和响应面实验,优化鮟鱇鱼皮肽的提取工艺;对得到的鮟鱇鱼皮肽经过超滤、葡聚糖凝胶过滤层析和全自动高压制备分离纯化得到MSP;利用液相二级质谱和多肽从头(de novo)测序技术对其进行结构分析,筛选抗氧化活性较强的肽段;通过构建PA诱导的HK-2细胞损伤模型,测定MSP对HK-2细胞中氧化应激指标、脂质代谢指标和炎症因子水平的影响。【结果】确定酸性蛋白酶与胃蛋白酶质量比2∶1的复配比例,加酶量3 800 U/g、pH 3、酶解时间4 h、温度50℃和料液比1 g∶10 mL为鮟鱇鱼皮活性肽的最佳酶解条件,此条件下制备的鮟鱇鱼皮肽对DPPH·的清除率为78.84%;经超滤,酶解多肽中<3 ku组分抗氧化活性最强,收集该组分进行凝胶色谱分离后,得到F1、F2和F3共3个峰,其中F1组分DPPH·清除率最高。F1组分经高效液相色谱法(HPLC)分离纯化后得到6个吸收峰,其中H2组分吸收峰强度最高,经氨基酸序列鉴定,从中筛选出3种寡肽,分别为Phe-Glu-Ala-Thr-Ser-Gln-Glu-Leu(FEATSQEL,FL-8)、Leu-Val-Ser-Cys-Ser-Ser-Leu(LVSCSSL,LL-7)和Pro-Leu-Glu-Asn-Tyr(PLENY,PY-5)。3条多肽在HK-2细胞脂质损伤模型中的修复作用各不相同:FL-8和PY-5能提高HK-2细胞模型的抗氧化能力,使细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和总抗氧化能力(T-AOC)显著升高,降低细胞中活性氧的荧光强度,并显著降低丙二醛(MDA)水平,而LL-7能降低GSH-Px活性与T-AOC能力,能显著降低MDA的含量;在调节细胞的脂质代谢方面,FL-8与PY-5分别在不同程度上降低总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白-胆固醇含量,并显著增加高密度脂蛋白-胆固醇含量,而LL-7则会加剧细胞内的脂质蓄积;FL-8与PY-5显著降低炎症因子白细胞介素-18(IL-18)的水平,而LL-7则相反(α=0.05)。【结论】制备的MSP对PA诱导的HK-2具有保护作用,可为鮟鱇鱼皮活性肽的利用和缓解脂质肾毒性产品的开发提供理论基础和实验依据。
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关键词
鮟鱇鱼皮
活性肽
分离纯化
HK-2细胞
保护
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职称材料
基于响应面法的(鱼安)(鱼康)活性肽制备工艺
被引量:
1
2
作者
王雪芹
滕李超
+2 位作者
于华华
邢荣娥
李鹏程
《海洋科学》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期42-53,共12页
(鱼安)(鱼康)是一种低脂肪高蛋白的优质海洋生物资源,其氨基酸含量丰富,蛋白质含量高达75.30%。本实验选用胰蛋白酶,胃蛋白酶,木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶水解(鱼安)(鱼康)鱼糜,比较各酶解产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除...
(鱼安)(鱼康)是一种低脂肪高蛋白的优质海洋生物资源,其氨基酸含量丰富,蛋白质含量高达75.30%。本实验选用胰蛋白酶,胃蛋白酶,木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶水解(鱼安)(鱼康)鱼糜,比较各酶解产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除率,确定木瓜蛋白酶为最佳用酶。在单因素实验基础上进行响应面优化实验,确定酶解反应的最佳条件为:加酶量829.51 U/g, pH值7.37,酶解温度47.09℃,酶解时间5.86 h,液固比5.79∶1。在最优条件下验证其DPPH自由基清除率为80.22%±0.63%,接近预测值80.55%。经响应面法实验制备的(鱼安)(鱼康)活性肽粉末呈淡黄色,具有较好的抗氧化活性,其羟自由基清除能力的IC_(50)值为1.69 mg/mL,可作为潜在的抗氧化剂。
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关键词
(鱼安)(鱼康)
酶解反应
木瓜蛋白酶
DPPH自由基清除率
响应面分析
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职称材料
鮟鱇鱼子低分子质量肽的制备及其抗氧化活性评价
3
作者
任哲昕
姚思佳
+2 位作者
叶韩薇
陈媛媛
唐云平
《湖北农业科学》
2022年第23期150-154,189,共6页
以鮟鱇鱼(Lophius litulon)子为原料,利用复合酶解法制备低分子质量肽并对其抗氧化活性进行评价。利用胃蛋白酶和胰蛋白酶对鮟鱇鱼子进行酶解,超滤后得到分子质量小于1 kDa的鮟鱇鱼子肽(MRP),并对其在体外的自由基(DPPH、ABTS及·OH...
以鮟鱇鱼(Lophius litulon)子为原料,利用复合酶解法制备低分子质量肽并对其抗氧化活性进行评价。利用胃蛋白酶和胰蛋白酶对鮟鱇鱼子进行酶解,超滤后得到分子质量小于1 kDa的鮟鱇鱼子肽(MRP),并对其在体外的自由基(DPPH、ABTS及·OH)清除能力进行测定。此外,通过测定细胞活性、MDA、SOD、MDA和GSH-Px水平,研究其对H_(2)O_(2)诱导的RAW 264.7细胞损伤的保护作用。结果表明,MRP对DPPH、ABTS和·OH具有良好的清除作用,且能保护H2O2对RAW 264.7细胞的氧化损伤,可提高细胞活性及细胞中CAT、SOD、GSH-Px的活力,下调MDA的含量水平。结果表明,MRP具有较好的抗氧化能力,可作为添加剂用于抗氧化相关产品研发。
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关键词
鮟鱇鱼(Lophius
litulon)子
低分子质量肽
过氧化氢
RAW
264.7细胞
抗氧化
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职称材料
题名
鮟鱇鱼皮活性肽的分离纯化及其对HK-2细胞损伤保护的作用
1
作者
许珂
缪秉陶
曹洪杰
任祥雨
李航婷
杨最素
机构
浙江海洋大学食品与药学学院
出处
《广东海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期1-10,共10页
基金
浙江省公益技术研究项目(LGN21D060002)。
文摘
【目的】为探讨鮟鱇(Lophius litulon)鱼皮活性肽(Monkfish skin peptides,MSP)对棕榈酸(Palmitic acid,PA)诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2细胞)损伤保护的作用。【方法】以新鲜鮟鱇鱼皮为材料,选取加酶量、提取时间、pH、温度和料液比为因子,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)清除率为响应值,分别进行单因素实验和响应面实验,优化鮟鱇鱼皮肽的提取工艺;对得到的鮟鱇鱼皮肽经过超滤、葡聚糖凝胶过滤层析和全自动高压制备分离纯化得到MSP;利用液相二级质谱和多肽从头(de novo)测序技术对其进行结构分析,筛选抗氧化活性较强的肽段;通过构建PA诱导的HK-2细胞损伤模型,测定MSP对HK-2细胞中氧化应激指标、脂质代谢指标和炎症因子水平的影响。【结果】确定酸性蛋白酶与胃蛋白酶质量比2∶1的复配比例,加酶量3 800 U/g、pH 3、酶解时间4 h、温度50℃和料液比1 g∶10 mL为鮟鱇鱼皮活性肽的最佳酶解条件,此条件下制备的鮟鱇鱼皮肽对DPPH·的清除率为78.84%;经超滤,酶解多肽中<3 ku组分抗氧化活性最强,收集该组分进行凝胶色谱分离后,得到F1、F2和F3共3个峰,其中F1组分DPPH·清除率最高。F1组分经高效液相色谱法(HPLC)分离纯化后得到6个吸收峰,其中H2组分吸收峰强度最高,经氨基酸序列鉴定,从中筛选出3种寡肽,分别为Phe-Glu-Ala-Thr-Ser-Gln-Glu-Leu(FEATSQEL,FL-8)、Leu-Val-Ser-Cys-Ser-Ser-Leu(LVSCSSL,LL-7)和Pro-Leu-Glu-Asn-Tyr(PLENY,PY-5)。3条多肽在HK-2细胞脂质损伤模型中的修复作用各不相同:FL-8和PY-5能提高HK-2细胞模型的抗氧化能力,使细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和总抗氧化能力(T-AOC)显著升高,降低细胞中活性氧的荧光强度,并显著降低丙二醛(MDA)水平,而LL-7能降低GSH-Px活性与T-AOC能力,能显著降低MDA的含量;在调节细胞的脂质代谢方面,FL-8与PY-5分别在不同程度上降低总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白-胆固醇含量,并显著增加高密度脂蛋白-胆固醇含量,而LL-7则会加剧细胞内的脂质蓄积;FL-8与PY-5显著降低炎症因子白细胞介素-18(IL-18)的水平,而LL-7则相反(α=0.05)。【结论】制备的MSP对PA诱导的HK-2具有保护作用,可为鮟鱇鱼皮活性肽的利用和缓解脂质肾毒性产品的开发提供理论基础和实验依据。
关键词
鮟鱇鱼皮
活性肽
分离纯化
HK-2细胞
保护
Keywords
monkfish
skin
active peptide
isolation and purification
HK-2 cells
protection
分类号
TS201.4 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
基于响应面法的(鱼安)(鱼康)活性肽制备工艺
被引量:
1
2
作者
王雪芹
滕李超
于华华
邢荣娥
李鹏程
机构
中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室海洋大科学中心
青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室
中国科学院大学
出处
《海洋科学》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第5期42-53,共12页
基金
2020年度省新旧动能转换重大工程重大课题攻关项目(2020-1220)
中国科学院STS项目(2021T3038)。
文摘
(鱼安)(鱼康)是一种低脂肪高蛋白的优质海洋生物资源,其氨基酸含量丰富,蛋白质含量高达75.30%。本实验选用胰蛋白酶,胃蛋白酶,木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶水解(鱼安)(鱼康)鱼糜,比较各酶解产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除率,确定木瓜蛋白酶为最佳用酶。在单因素实验基础上进行响应面优化实验,确定酶解反应的最佳条件为:加酶量829.51 U/g, pH值7.37,酶解温度47.09℃,酶解时间5.86 h,液固比5.79∶1。在最优条件下验证其DPPH自由基清除率为80.22%±0.63%,接近预测值80.55%。经响应面法实验制备的(鱼安)(鱼康)活性肽粉末呈淡黄色,具有较好的抗氧化活性,其羟自由基清除能力的IC_(50)值为1.69 mg/mL,可作为潜在的抗氧化剂。
关键词
(鱼安)(鱼康)
酶解反应
木瓜蛋白酶
DPPH自由基清除率
响应面分析
Keywords
monkfish
enzymatic hydrolysis
papain
DPPH radical scavenging activity
response surface methodology
分类号
P745 [天文地球—海洋生物学]
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职称材料
题名
鮟鱇鱼子低分子质量肽的制备及其抗氧化活性评价
3
作者
任哲昕
姚思佳
叶韩薇
陈媛媛
唐云平
机构
浙江海洋大学食品与药学学院/浙江省海洋生物医用制品工程技术研究中心
出处
《湖北农业科学》
2022年第23期150-154,189,共6页
基金
国家自然科学基金青年项目(41806153)
浙江省新苗人才计划项目(2021R411034)。
文摘
以鮟鱇鱼(Lophius litulon)子为原料,利用复合酶解法制备低分子质量肽并对其抗氧化活性进行评价。利用胃蛋白酶和胰蛋白酶对鮟鱇鱼子进行酶解,超滤后得到分子质量小于1 kDa的鮟鱇鱼子肽(MRP),并对其在体外的自由基(DPPH、ABTS及·OH)清除能力进行测定。此外,通过测定细胞活性、MDA、SOD、MDA和GSH-Px水平,研究其对H_(2)O_(2)诱导的RAW 264.7细胞损伤的保护作用。结果表明,MRP对DPPH、ABTS和·OH具有良好的清除作用,且能保护H2O2对RAW 264.7细胞的氧化损伤,可提高细胞活性及细胞中CAT、SOD、GSH-Px的活力,下调MDA的含量水平。结果表明,MRP具有较好的抗氧化能力,可作为添加剂用于抗氧化相关产品研发。
关键词
鮟鱇鱼(Lophius
litulon)子
低分子质量肽
过氧化氢
RAW
264.7细胞
抗氧化
Keywords
monkfish
(Lophius litulon)roe
low molecular mass peptides
H2O2
RAW 264.7 cell
antioxidant
分类号
TS201.2 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鮟鱇鱼皮活性肽的分离纯化及其对HK-2细胞损伤保护的作用
许珂
缪秉陶
曹洪杰
任祥雨
李航婷
杨最素
《广东海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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职称材料
2
基于响应面法的(鱼安)(鱼康)活性肽制备工艺
王雪芹
滕李超
于华华
邢荣娥
李鹏程
《海洋科学》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
下载PDF
职称材料
3
鮟鱇鱼子低分子质量肽的制备及其抗氧化活性评价
任哲昕
姚思佳
叶韩薇
陈媛媛
唐云平
《湖北农业科学》
2022
0
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职称材料
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