粗柄羊肚菌蛋白质及氨基酸分析

本文对粗柄羊肚菌的菌盖，菌柄及液体培养菌丝中的可溶性蛋白组分及氨基酸含量进行了测定和分析，结果表明，菌丝的可溶性蛋白含量最高其电泳带颜色也较深，菌盖次之，菌柄居第三位，但电泳条带菌柄最多，菌盖次之，菌线最少。氨基酸含量的测定表明，菌丝中必需氨基酸含量最高，鲜味氨基酸以菌盖中最高，尤其是谷氨酸含量明显高出菌柄和菌丝，而甜味甜基酸则三者相差不大。

羊肚菌抗氧化肽的制备、纯化和鉴定

以羊肚菌蛋白为原料,采用超声辅助复合酶法制备抗氧化多肽,通过单因素和响应面实验确定抗氧化多肽的最佳制备工艺。结果表明,以DPPH自由基清除率为抗氧化指标确定制备羊肚菌抗氧化多肽的最佳制备工艺为:酶解时间60 min、酶解温度55.69℃,酶解pH值7.95,加酶量4000 U/g;在此条件下得到的酶解多肽的DPPH自由基清除率最大,为89.09%。将所得多肽依次经过超滤、DEAE-32、Sephadex G-25筛选得到DPPH自由基清除率最高的多肽组分,其清除率达到96.71%,经质谱鉴定,其氨基酸序列为FPLIPGH。

羊肚菌菌丝体蛋白的理化特性及抗氧化活性

为了探讨羊肚菌菌丝体蛋白在食品和保健品行业中应用的可能性,以液态发酵生产的羊肚菌菌丝体为原料,采用碱溶酸沉法提取菌丝体蛋白,对其理化特性和体外抗氧化活性进行了研究。结果表明,羊肚菌菌丝体蛋白具有良好的乳化性、乳化稳定性、起泡性与泡沫稳定性,其等电点为4.1,含有7种人体必需氨基酸,占氨基酸总含量的38.09%;羊肚菌菌丝体蛋白的总抗氧化能力和还原力的半抑制浓度(IC50)分别为(6.93±0.05)和(4.24±0.16)mg·m L^(-1),抗坏血酸(VC)当量分别为(11.74±0.48)和(10.15±0.48)mg·g^(-1),对DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基及ABTS自由基具有不同效果的清除活性。羊肚菌菌丝体蛋白可作为功能性食品和保健品开发的良好基料。

羊肚菌蛋白抗氧化肽的制备及抗运动疲劳活性研究

该研究以羊肚菌蛋白为原料,采用酶解法制备羊肚菌蛋白抗氧化肽,通过单因素试验响应面法优化其酶解工艺条件,并考察其抗氧化活性及抗运动疲劳活性。结果表明,最佳的水解酶为食用菌水解酶A1,最佳酶解工艺条件为食用菌水解酶A1添加量0.15%、底物质量分数4.80%、酶解温度49℃、酶解时间116 min、酶解pH值4.4。在此优化条件下,羊肚菌蛋白抗氧化肽对DPPH·、·OH和·O_(2)-的清除率分别为91.34%、85.04%、63.90%。抗运动疲劳活性试验结果表明,与空白对照组相比,高剂量组小鼠的力竭游泳时间、爬杆时间和耐缺氧时间延长最长,分别延长15.67 min、53.99 min和28.51 min;且其体内的血糖和糖原水平升高,血清尿素氮含量降低2.3 mmol/L、血乳酸含量降低2.93 mmol/L,表明羊肚菌蛋白抗氧化肽具有一定的抗运动疲劳作用。相关性试验表明,羊肚菌蛋白抗氧化多肽的抗氧化与抗疲劳作用具有一定相关性。

药膳类佛菇食疗配方的实验研究

以“食药兼性”药品组成膳食类佛菇食疗配方，进行营养成份分析及试验。结果表明，三大产热营养素产热比分别为：蛋白质１２．３４％、脂肪５．６２％、碳水化合物８２．０％；本方水提取物对胃癌７９０１和Ｋ５６２细胞系集落形成的ＩＣ５０分别为３．５９ｇ／Ｌ和２５．７４ｍｇ／Ｌ，对７９０１和Ｋ５６２细胞的最大抑制率为５３．２％和５８．９％；水提取物对小鼠移植性肿瘤ＨｅｐＡ和Ｓ１８０最大抑制率为３５．３％和３５．０％。

羊肚菌蛋白的硒化修饰及其体外抗氧化活性

借助响应面法优化微波辅助下羊肚菌蛋白(MEP)的硒化修饰工艺,制备得到硒化修饰的羊肚菌蛋白(SeMEP)。利用FTIR、SEM和DSC对Se-MEP进行了表征,通过测定总抗氧化活性和对2,2'-联氮-二-(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基、羟基自由基和H_2O_2的清除活性来评价Se-MEP的体外抗氧化活性。结果表明,MEP的最佳硒化修饰工艺为:pH=4.50,m(亚硒酸钠)∶m(MEP)=2.2∶1.0,反应时间9.0 min。FTIR结果显示,Se-MEP中含有Se—O—C键,实现了MEP的硒化。DSC结果表明,Se-MEP的峰值温度(Tp)是MEP的1.06倍,热焓值(ΔH)比MEP提高了45.57%,热稳定性优于MEP。此外,在本文设定的样品最大测试质量浓度条件下,Se-MEP的总抗氧化活性是MEP的1.33倍,对ABTS自由基、羟基自由基和H_2O_2的清除活性分别比MEP提高了71.62%,11.11%和18.26%,表明微波辅助的硒化修饰能够提高MEP的体外抗氧化活性。

响应面法优化羊肚菌中蛋白质的提取工艺

目的采用响应面法优化羊肚菌蛋白质的提取工艺。方法通过超声波辅助提取羊肚菌蛋白,以蛋白得率为指标,考察超声温度、超声时间、料液比和pH对羊肚菌蛋白得率的影响。在单因素的基础上通过Box-Behnken试验对提取工艺试验进行优化试验。结果超声波辅助提取羊肚菌蛋白的最佳工艺条件为:料液比1:50(g:mL)、超声时间60 min、提取温度60℃、pH 12,在此条件下蛋白得率为(32.56±0.50)%,与预测值32.99%接近。通过响应面分析得到的多元二次回归方程Y=32.56+0.97A 1.21B+1.24C-0.2AB-1.07AC-1.45BC-1.86A^24.26B^2-1.87C^2,该模型可较好地预测羊肚菌蛋白得率,其中各因素对蛋白质得率影响的大小依次为:pH>超声温度>超声时间。结论本研究为羊肚菌蛋白的提取提供基础。

羊肚菌固态发酵玉米蛋白粉的研究

以玉米蛋白粉为主要原料,采用羊肚菌对其进行固态发酵培养,确定羊肚菌固态发酵玉米蛋白粉的培养基配方以及培养条件。结果表明:羊肚菌固态发酵玉米蛋白粉最适培养基配方为玉米蛋白粉30 g、葡萄糖2.5%、Mg SO4·7H2O 0.15%、KH2PO40.25%、含水量65%;最佳培养条件为接种量14%、培养温度25℃、初始p H 6、发酵时间20 d。此条件下,得蛋白转化率为22.36%,菌丝体生物量为0.136 9 g/g。对发酵前后玉米蛋白粉进行氨基酸分析,结果表明:发酵后亲水性氨基酸含量比发酵前提高12.75%。对玉米蛋白粉原料和发酵后玉米蛋白粉进行扫描电镜观察,发酵后的玉米蛋白紧密的结构被打开,表面积增加,表面凹凸加剧,孔洞更为明显。

响应面优化羊肚菌子实体蛋白质提取工艺及其抗氧化性研究

以新疆克孜勒苏柯尔克孜自治州的六妹羊肚菌为试验材料,采用超声波辅助碱提酸沉法提取羊肚菌蛋白质,测其抗氧化活性,以蛋白质提取率为指标,选择料液比、超声时间、超声温度和pH为影响因素进行单因素试验,采用响应面法优化提取条件,并用优化后工艺提取来自不同地区的羊肚菌蛋白质。结果显示,通过响应面法优化的羊肚菌蛋白质最佳提取条件为:料液比1︰20(g/mL)、超声时间20 min、超声温度40℃、pH 11,该条件下蛋白质提取率为(32.94±0.39)%。对蛋白质粗提物进行DPPH和ABTS自由基清除试验,结果清除率同蛋白质浓度呈正相关且具有一定的抗氧化活性;优化提取工艺对5个不同地区的六妹羊肚菌蛋白质提取结果均较好。

羊肚菌蛋白抗坏血酸化修饰工艺优化

以总抗氧化活性为考察指标对羊肚菌(Morchella esculenta)蛋白(MPI)进行抗坏血酸化修饰,在单因素试验的基础上,借助响应面法优化了MPI的抗坏血酸化修饰工艺。结果表明,MPI抗坏血酸化修饰的最佳修饰工艺为:pH 12.20,抗坏血酸与MPI质量比4∶1,加热时间130min,该条件下MPI的总抗氧化活性可达0.876。

羊肚菌转录因子分类和生物信息学分析

首次根据Genbank中已知的7237条羊肚菌序列,对所有编码转录因子的序列进行了功能分类,并重点对羊肚菌中的锌指蛋白(ZFP)编码序列进行了生物信息学分析。结果表明,Genbank中所有7237条羊肚菌来源的核苷酸序列,有167条是编码转录因子的序列,其中88条序列编码了锌指蛋白。这些序列都含有相应的保守基序,编码蛋白质的二级结构以α-螺旋为主,三级结构极为相似,功能上以亲水性蛋白为主。

羊肚菌蛋白水解物及其硒化衍生物的细胞保护作用和安全性研究

该文研究羊肚菌蛋白水解物(morchella protein hydrolysate,MPH)及其硒化衍生物(Se-MPH)的细胞保护作用和安全性。利用H_(2)O_(2)诱导的Caco-2细胞氧化损伤模型研究了MPH和Se-MPH的细胞保护作用。结果显示,MPH和Se-MPH可通过减轻氧化应激和抑制细胞凋亡来保护Caco-2细胞免受氧化损伤,这种保护作用可能主要归因于Nrf2信号通路的激活和凋亡相关蛋白表达的调节。通过细胞毒性试验、红细胞溶血实验、细菌回复突变(bacterial reverse mutation,Ames)试验以及鸡胚绒毛尿囊膜(chick embryo chorioallantoic membrane,CAM)试验研究了MPH和Se-MPH的安全性。结果证实,MPH和Se-MPH没有细胞毒性、溶血活性和致突变潜力,在CAM实验中未观察到明显的血管形态学变化及出血现象。所有这些研究表明,MPH和Se-MPH具有显著的细胞保护作用和良好的安全性,有望作为潜在的营养性、功能性或药物性成分得到开发利用。

响应面法优化羊肚菌清蛋白的提取及其抗氧化性

以山西省安泽县野生羊肚菌子实体为原料,采用超声辅助Osborne分级提取法提取羊肚菌清蛋白,并对提取工艺进行响应面优化。研究结果表明:羊肚菌中总蛋白中分离得到的清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白的含量分别是54.10%,9.24%,5.13%和11.34%。响应面法优化羊肚菌清蛋白的最佳提取条件为提取温度40℃、提取时间25 min、料液比1︰25(g/mL),此条件下清蛋白得率为15.11%±0.14%;羊肚菌清蛋白对DPPH自由基、羟自由基具有较强的清除能力,且与其相应的蛋白浓度呈正相关,当清蛋白质量浓度为1.2 mg/mL时,相应的DPPH自由基和羟自由基清除率较高,且均高于同等浓度的粗蛋白溶液,分别为77.13%和64.52%。

梯棱羊肚菌镉胁迫响应基因ATX1功能分析

梯棱羊肚菌Morchella importuna是一种可以大田覆土栽培的珍稀食用菌,而土壤重金属污染状况日益严重,对梯棱羊肚菌菌丝生长和子实体产品质量安全构成了潜在的威胁。本研究先采用镉离子胁迫处理梯棱羊肚菌菌丝体,RT-PCR检测发现候选基因ATX1的表达量显著下调。克隆梯棱羊肚菌ATX1基因,对ATX1p蛋白结构进行功能预测,发现ATX1p可能与铜离子转运及重金属胁迫相关。然后分别构建ATX1的超表达和RNAi基因沉默载体,采用农杆菌介导的转化方法,将其转入梯棱羊肚菌同核体菌株A50中,分别筛选到4个ATX1表达显著上调的超表达转化子和4个ATX1表达显著下调的RNAi基因沉默转化子,镉敏感性检测发现ATX1的RNAi基因沉默转化子表现为镉抗性增强,而ATX1超表达转化子则表现为镉抗性减弱。结果表明,梯棱羊肚菌ATX1基因表达与镉抗性呈负相关,ATX1p可能在梯棱羊肚菌镉胁迫响应过程中发挥着某种重要作用。