怀菊花茎叶中聚炔类化合物对ox-LDL诱导的HUVECs细胞损伤的保护作用

研究怀菊花茎叶中分离得到的聚炔类化合物对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及初步探讨作用机制。采用ox-LDL(200μg/mL)处理HUVECs细胞建立内皮细胞损伤模型,同时给予聚炔类化合物1~10(100μg/mL)干预;通过CCK-8法检测细胞生存率,筛选出有细胞保护作用的目标化合物;采用目标化合物5和9(12.5、25、50、100μg/mL)干预细胞24 h,CCK-8检测细胞生存率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成率,酶联免疫(ELISA)检测细胞上清液中白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;细胞免疫印迹法(In-Cell Western)检测细胞中核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)2p100/p52与NF-κBp65蛋白的相对表达水平。结果显示:与正常对照组(Con)相比,模型组(ox-LDL)中的细胞生存率明显下降,细胞凋亡率、ROS生成,炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α明显升高(P<0.01);与ox-LDL组相比,聚炔类化合物5和9可以明显提高HUVECs细胞的生存率、降低细胞凋亡率、ROS生成率,炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α的分泌(P<0.05或P<0.01),下调NF-κB2 p100/p52、NF-κB p65蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。综上所述,怀菊花茎叶中聚炔苷类成分可以改善ox-LDL诱导的HUVECs细胞损伤与功能障碍,其作用机制可能与NF-κB信号通路相关。

大亳菊总黄酮的提取及其颗粒剂制备工艺研究

优选大亳菊总黄酮的提取及其颗粒剂制备工艺。采用正交试验,以总黄酮提取率为判断标准,优选大亳菊总黄酮的提取工艺;以成型率为判断标准,优选大亳菊总黄酮颗粒剂的制备工艺。结果表明,优选的大亳菊总黄酮提取工艺为:液料比为25∶1,乙醇体积分数75%,提取温度85℃,回流时间1.25h;优选的制粒工艺为:可溶性淀粉∶糊精=1∶1,浸膏粉∶辅料=1∶3,干燥温度60℃,干燥时间2h。该工艺简便、稳定,可以用于大亳菊总黄酮的提取及其颗粒剂的制备。

菊花中216种农药残留检测分析

目的:建立菊花中216种常用农药残留的快速检测方法。方法:样品经乙腈高速匀浆提取后浓缩,采用液相色谱-质谱法和气相色谱-质谱法,以多反应监测模式进行数据采集,采用空白基质匹配法及校准曲线法进行定量检测。结果:菊花中216种农药的线性关系良好,90%以上农药指标r>0.995,各待测农药指标回收率为70%~115%,符合农药多残留的痕量分析要求;78批菊花中检出农药68种。结论:菊花中农药残留检出率较高、检出品种较多,但检出的多为中低毒性农药。建立的方法有针对性地检测了菊花中高风险的农药品种,涵盖了大多数常用农药品种,检测方法快速、准确,适用于菊花中农药多残留的风险监测和日常快速筛查,可为基质类似的中药材农药多残留检测方法研究提供借参考。

39个传统秋菊品种扦插生根能力综合评价

为了筛选出扦插生根能力较强的传统秋菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)品种,对39个传统秋菊品种扦插12 d的8个根系形态指标进行差异分析、相关性分析和主成分分析,并对这些传统秋菊品种的扦插生根能力进行隶属函数分析和分级。结果显示:供试传统秋菊品种的总根数为3.3~44.0,总根长、平均根长和最长根长分别为2.463~129.174、0.632~4.470和1.610~7.964 cm,根直径为0.200~0.405 mm,根投影面积和根表面积分别为0.102~3.062和0.319~9.619 cm 2,总根体积为0.002~0.079 cm 3,且多数指标以‘火凤凰’(‘Huofenghuang’)最小。这些根系形态指标的变异系数为15.789%~51.605%,其中,总根长的变异系数最大,根直径的变异系数最小,其余指标的变异系数均大于32%。供试传统秋菊品种的多数根系形态指标间存在显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)正相关。主成分分析结果显示:前3个主成分的累计贡献率达97.976%。隶属函数分析和分级结果表明:供试传统秋菊品种的扦插生根能力分为优秀、良好、中等和偏差4个等级,‘龙都春丽’(‘Longdu Chunli’)、‘玉楼人醉’(‘Yulou Renzui’)、‘龙都月华’(‘Longdu Yuehua’)、‘圣光华宝’(‘Shengguang Huabao’)、‘龙都秋枫’(‘Longdu Qiufeng’)、‘龙都春晓’(‘Longdu Chunxiao’)的扦插生根能力优秀,综合得分均大于0.70。根投影面积、根表面积和总根体积在不同等级间差异显著。研究结果显示:不同传统秋菊品种间扦插苗的根系形态指标变异较大,其中,‘龙都春丽’等6个品种的扦插生根能力较强,可作为传统秋菊品种遗传改良的亲本。

药菊苗期抗旱性综合评价及抗旱鉴定指标筛选

为研究干旱胁迫对不同栽培类型药菊苗期生长的影响,并筛选耐旱性较强的药菊栽培类型和适宜的抗旱性鉴定指标,为抗旱药菊种质选择奠定基础,本研究以5个栽培类型药菊为材料,测定其在干旱胁迫下苗期的生长指标和生理生化指标,并使用相关性分析、主成分分析、隶属函数分析相结合的方法对其进行抗旱性综合评价。结果表明,干旱胁迫下药菊苗期植株变矮;随着干旱胁迫加重,其地下部干重、根冠比、总根投影面积等指标呈降低趋势,脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白质含量呈增长趋势。抗旱性综合评价结果表明,怀菊抗旱性综合评价值最大(0.854),皇菊抗旱性综合评价值最小(0.093),5个栽培类型药菊抗旱性为怀菊>滁菊>亳菊>杭菊>皇菊;叶片相对含水量、叶片干重、地下部干重、根冠比、叶绿素相对含量(SPAD值)和过氧化物酶活性等可作为药菊苗期的抗旱性鉴定指标。

5个栽培类型药菊分枝期抗旱性综合评价

为研究干旱胁迫对不同栽培类型药菊分枝期生长的影响,并评价不同药菊种质资源的抗旱性,以5个栽培类型药菊为试验材料,分别测定其农艺性状、生物积累量、生理特性等相关指标,并利用隶属函数法、主成分分析、相关分析进行抗旱性综合评价和抗旱鉴定指标筛选。结果表明,干旱胁迫下药菊分枝期的生长受到抑制,株高降低、茎粗减小、分枝数变少、生物量积累减少;渗透物质脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白含量普遍增加;抗逆酶活性增强,膜脂过氧化程度加剧。抗旱性综合评价表明,各栽培类型药菊在分枝期的抗旱性强弱依次为:怀菊(‘怀白菊’)>滁菊>亳菊>皇菊>杭菊(‘大洋菊’)。研究结果为药菊种质选育、高产高效栽培奠定了基础。

基于响应面法的杭白菊发酵工艺优化

为优化杭白菊发酵工艺条件,采用杭白菊为原料,在单因素试验基础上,以发酵时间、酵母接种量、发酵温度为自变量,以发酵液中的黄酮含量为评价指标,采用Box-Behnken响应面法对杭白菊酵母发酵工艺进行了条件优化.结果表明,酵母发酵杭白菊的最佳工艺条件为:发酵时间4 d、酵母接种量为3%、发酵温度为28℃,在此条件下,发酵液中黄酮含量为0.88 mg/mL.该发酵工艺设计合理可靠,试验结果可为菊花发酵产品开发提供一定的借鉴价值.

杭白菊木脂素类成分研究

目的 研究杭白菊木脂素类成分。方法 采用大孔吸附树脂、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和制备型HPLC对杭白菊80%乙醇提取物进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果 从中分离得到11个化合物,分别鉴定为ssioriside (1)、nudiposide (2)、lyoniside (3)、tortoside A (4), viburfordoside E (5)、tiliamuroside A (6)、开环异落叶松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、异落叶松脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、异落叶松脂醇-9-O-β-D-吡喃木糖苷(9)、5′-甲氧基-异落叶松脂醇-9′-O-β-D-吡喃木糖苷(10)、(7R,8R)-4,7,9,9′-四羟基-3,3′-二甲氧基-8-O-4′-新木脂素(11)。结论 化合物1~11均为首次从该植物中得到。

Protection of Intellectual Property and Authenticity of Chinese Herbal Medicine Chrysanthemum morifolium

This paper first introduced Chrysanthemum morifolium Ramat. and its medicinal value. Then, it studied agricultural intellectual property resources such as geographical indications, trademarks, patents, new plant varieties, biological genetic resources, and traditional knowledge related to C. morifolium . Finally, it summarized poverty-stricken areas ecologically suitable for planting C. morifolium , analyzed the GAP certification of C. morifolium , pollution-free agricultural product certification, green food certification, and organic food certification, and discussed the strategies for C. morifolium intellectual property protection and authenticity protection in the context of TCM development strategy and rural revitalization strategy.

药用菊花种质遗传多样性和群体结构分析

对不同地理来源的64份药用菊花种质进行遗传多样性和群体结构特征分析。结果表明,从80条SCoT引物中共筛选出20条稳定性好、多态性高的SCoT引物,20条引物在64份种质间共检测出129个等位基因变异,平均每个引物可检测6.45个,变化范围为3~9个,其中SCoT29和SCoT8标记等位基因数量最多;PIC值变化范围为0.571~0.866,其中有18条SCoT标记的PIC值大于0.700。有效等位基因数范围为1.418~1.774,均值为1.583;Nei's多样性指数为0.344~0.427,平均值为0.278,Shannon's多样性指数为0.641~0.892,平均值为0.440。群体遗传多样性显示,江苏群体遗传多样性最高,河南次之,山西最低。群体间遗传距离分析表明,河北与河南、江苏和安徽、山西和江西亲缘关系较近。群体遗传结构分析表明,当K=4时,ΔK最高,群体间存在基因交流现象,基因交流程度较高。聚类分析结果表明,64份材料在0.6处被划分为四大类群,类群间的菊花种质来源地并没有明显地分开。该研究明确了64份药用菊花种质的亲缘关系,为指导亲本选配和高效育种提供重要依据。

怀菊花中化学成分的分离与鉴定

目的研究怀菊花Chrysanthemum morifolium Ramat的化学成分。方法怀菊花提取物采用Diaion HP-20、Toyopearl HW-40、MCI Gel CHP-20、ODS、硅胶、半制备液相等进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从怀菊花提取物中分离得到18个化合物,分别鉴定为3β-hydroxy-β-ionone-3-O-β-D-glucopyranoside(1)、pisumionoside(2)、(2E)-2-methyl-2-butene-1,4-diol-1-O-β-D-glucopyranoside(3)、(Z)-5′-hydroxyjasmone-5′-O-β-D-glucopyranoside(4)、(2E,8E)-十四烯-4,6-二炔-1,12,14-三羟基-1-O-β-D-葡萄糖苷(5)、对羟基苯丙醇(6)、3,4-二羟基苯乙醇(7)、6,7-二羟基香豆素(8)、对羟基苯乙酮(9)、芝麻素(10)、2-methylphenyl-O-β-D-xylopyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranoside(11)、chakyunglupalin B(12)、(R)-vicianin(13)、尿嘧啶(14)、胸腺嘧啶(15)、尿嘧啶核苷(16)、2′-脱氧胸腺嘧啶核苷(17)、L-苯丙氨酸(18)。结论化合物1~17为首次从该植物中分离得到。

药用菊花起源与演化规律研究

基于文献整理,分析药用菊花的历史发展过程,通过地理分布特点及主要类型形态特征分析、比较,探讨药用菊花起源和演化规律。结果表明,药用菊花存在由野生到栽培的发展过程,宋代以前药用种类均来源于野生菊类。栽培菊出现于唐代,宋代是药用菊花形成、发展的关键时期,明清后逐渐发展成为现代药用类型。菊花是由毛华菊、野菊等多种菊属植物杂交后经人工选育、引种形成的不育类型,河南南阳及大别山区是菊花的重要起源地。不同种类菊花演化进程存在差异,小洋菊、大洋菊、福白菊及滁菊属原始平瓣菊类型;亳菊、济菊、祁菊源于怀菊,为后期进化类型;贡菊为过渡类型。菊花的种植类型与规模受商业影响在不断变化,需加强药材质量控制和资源保护,新品种的发现对扩充种质资源具有重要意义。

药用菊花常见病害及其发病规律与防治措施研究进展

菊花是我国传统大宗药材之一,在药品、食品等方面被广泛使用。近年来,随着市场需求逐步增加,人工集约化种植面积不断扩大,菊花病害发生日益严重,已严重威胁到菊花产业的健康可持续发展。其中,菊花枯萎病是最主要的病害,其次为菊花根腐病,叶部病害以黑斑病最为严重。根据目前药用菊花病害研究进展,对菊花栽培中其常出现的根部病害(枯萎病、根腐病、白绢病)、叶部病害(黑斑病、霜霉病、叶枯病、炭疽病、病毒病)的病原物、危害特征、发病规律及防治措施等进行综述,旨在为我国药用菊花的田间病害防控提供参考。

皇菊元气茶的冲泡工艺与生物活性研究

目的 以金丝皇菊为主要原料,辅以玫瑰花、枸杞子、红枣、桂圆,研制皇菊元气茶,确定最佳复配比例和最佳冲泡工艺,并评价其抗氧化和降血糖活性。方法 以茶汤的感官评分为评价指标,确定最佳的复配比例;通过单因素和正交试验确定茶水比、冲泡温度、冲泡时间对茶品质的影响,以此获得皇菊元气茶的最佳冲泡工艺。通过测定茶对DPPH、ABTS和超氧阴离子自由基的清除率以及α-葡萄糖苷酶的抑制率,评价其抗氧化和降血糖活性。结果 皇菊元气茶的感官评价得分最高的原料配比为金丝皇菊0.9 g,玫瑰花0.8 g,红枣1.0 g,枸杞子1.2 g,龙眼肉1.2 g。选用80 mL 90℃的蒸馏水冲泡皇菊元气茶15 min时,茶汤中黄酮、多酚等有效成分的含量最高,且对DPPH、ABTS和超氧阴离子的清除率分别为46.36%、44.44%、44.00%,对α-葡萄糖苷酶的抑制率为40.00%。结论 优化复配比例与冲泡工艺得到的黄菊元气茶各项指标最佳,具有一定的抗氧化和降血糖功效。

茎叶处理除草剂对菊花田杂草防除效果及安全性评价

杂草是菊花田主要有害生物之一,为筛选菊花田适用除草剂,采用室内盆栽法测定不同茎叶处理除草剂对菊花的安全性。选择安全性高的除草剂进行防除菊花田杂草田间药效试验,确定其田间实际防效,为菊花田杂草防除提供技术支撑。安全性试验表明,茎叶处理除草剂精喹禾灵对移栽后菊花安全性较好;噻吩磺隆等7种药剂药害较严重,导致菊花黄化、枯死;乳氟禾草灵等5种除草剂导致菊花不开花。田间药效试验结果表明,精喹禾灵在30~45 g·hm^(-2)的有效剂量下,对菊花田一年生禾本科杂草防除效果较好,持效期在30 d以上。综上,精喹禾灵可作为防除菊花田禾本科杂草的优选药剂。

一测多评法同时测定菊花配方颗粒中8个成分的含量

目的:建立一测多评法(QAMS)同时测定菊花配方颗粒中绿原酸、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、芦丁、木犀草苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量。方法:采用高效液相色谱法进行含量测定,色谱柱为Agilent TC-C_(18) (250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,检测波长为348 nm,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃,进样量为10μL。以木犀草苷为内标物,采用多点校正法计算其他7个成分的相对校正因子,测定8个成分的含量,并比较与外标法测定结果的差异。结果:8个成分在一定质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率为96.7%~102.1%,RSD为1.8%~2.9%。QAMS与外标法测定7批菊花配方颗粒中8个成分含量差异无统计学意义。结论:建立的QAMS简便快速,可以更全面地控制菊花配方颗粒的质量。

高效液相色谱法同时测定不同品种菊花中绿原酸和木犀草苷及异绿原酸A含量

采用Alphasil VC-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱分离,乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,选择348 nm作为检测波长,柱温为30℃,进样量为5μL,建立同时测定不同品种菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)中绿原酸、木犀草苷、异绿原酸A含量高效液相色谱(HPLC)法。结果表明,绿原酸、木犀草苷、异绿原酸A在相应的进样浓度范围内与对应的峰面积呈良好的线性关系(r≥0.9929);平均加样回收率为96.40%~98.07%,RSD为0.69%~1.81%。4种菊花品种中上述3个成分含量分别为0.3575%~0.7872%、0.1879%~0.8239%、0.7611%~1.6169%。该方法简便易行、灵敏度高、结果准确,可用于不同品种菊花的质量控制。

外源5-氨基乙酰丙酸激活叶绿素合成诱导菊花抗白粉病研究

以切花菊品种神马为试验材料,设置外源5-氨基乙酰丙酸(ALA)预处理再接种白粉病菌(A1)、施用ALA和接种白粉病菌同时进行(A2)这2种处理方式(ALA浓度为0、0.1、1、10、25、100 mg/L),探究外源5-氨基乙酰丙酸对白粉菌的抗病效果以及抗病途径。结果表明:与0 mg/L处理相比,喷施适宜浓度的外源ALA均能不同程度地降低白粉病处理下菊花的发病率和病情指数,提高了诱导抗病率;·O_(2)^(-)产生速率、H_(2)O_(2)含量、脂氧合酶(LOX)活性和丙二醛(MDA)含量显著降低;胆色素原(PBG)、原卟啉IX(Proto IX)、镁-原卟啉IX(Mg-Proto IX)、原叶绿素酸酯(Pchl)和叶绿素等含量显著提高,其中A1处理的上述指标均大于A2处理。A1处理的ALA溶液施加浓度以10 mg/L效果最佳,A2处理以25 mg/L效果最佳。综上,外源ALA可通过调节菊花的叶绿素合成途径来增强其对白粉病的抗性,试验结果可为阐明外源ALA介导的抗白粉病机制提供参考依据。

皇菊蚜虫和绿盲蝽防治药剂筛选试验

针对皇菊蚜虫和绿盲蝽难以防治的现状,分别进行了不同药剂大田防治效果及安全性试验。结果表明:30%噻虫嗪悬浮剂与10%丙联苯菊酯乳油双联包对蚜虫有较好的防治效果,药后3、21 d校正防效分别为97.63%、72.93%,具有一定的速效性和持效性,可作为防治皇菊蚜虫的药剂使用;0.5%苦参碱水剂是生物农药,施药前期药效相对较低,后期药效缓慢上升,药后7、21 d校正防效分别达到82.20%、77.73%,可作为蚜虫发生前期的预防药剂;45%丙溴·辛硫磷乳油对绿盲蝽防治表现出良好的速效性和持效性,药后3 d能达到最高防效(95.25%),药后21 d校正防效仍保持在70%左右,可作为防治皇菊绿盲蝽的药剂使用;12%噻虫·高氯氟表现为速效性较差、持效性较好,药后7 d校正防效达到78.09%,药后21 d校正防效仍维持在70%左右,可作为防治绿盲蝽的轮换药剂使用。

杭白菊提取液对抗缺血再灌注引起的离体大鼠心肌收缩功能下降

目的 :观察杭白菊水提取液在缺血再灌注和缺氧 /复氧过程中对离体心脏和心室肌细胞的影响 ,并探讨其作用机制。方法 :采用Langendorff离体灌流心脏模型 ,观察心室收缩功能 ;用视频跟踪系统和细胞内双波长荧光系统分别记录单个心肌细胞收缩和 [Ca2 + ]i;测定心肌丙二醛 (MDA)和超氧化物歧化酶 (SOD)水平。结果 :杭白菊 (0 5g/L)可明显减轻缺血再灌注引起的离体灌流心脏左室发展压、最大收缩 /舒张速率、冠脉流量和左室发展压与心率乘积的抑制作用 ;并明显减弱缺氧 /复氧抑制心室肌细胞收缩幅度、最大收缩 /舒张速度和细胞钙瞬态的作用。杭白菊处理的缺血再灌注组心肌SOD水平明显升高 ,MDA含量显著降低。结论 :杭白菊可能通过对抗自由基的作用 ,从而减轻缺血再灌注和缺氧 /复氧对心肌收缩功能的抑制。