以整合素为作用靶点的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸模体毒素研究进展

整合素为一类αβ异源二聚体膜蛋白,调节细胞外基质与胞内细胞骨架间的相互作用。精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列为整合素的结合位点,存在于多种重要的细胞外基质蛋白中。整合素与RGD序列结合可调节多种细胞生理活动,RGD模体还存在于来自蛇毒和其他物种来源的多种毒素蛋白中,这些RGD模体毒素能够特异性抑制整合素与细胞外基质的结合,从而成为整合素的强效拮抗剂。本文对整合素的结构与功能、去整合素作为整合素拮抗剂的结构特征做一综述,并对整合素和以RGD为模体结构作为潜在药物靶点的应用加以讨论。

近红外量子点连接的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽段荧光探针对口腔鳞状细胞癌的活体可视化成像

目的探索用精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽段连接的近红外量子点荧光探针对口腔鳞状细胞癌（OSCC）的原位可视化成像情况。方法将含有RGD序列的肽段与发射波长为800 nm的近红外量子点（QD800）偶联,制备QD800-RGD荧光探针。将人颊鳞状细胞癌BcaCD885细胞植入裸鼠颊部皮下建立OSCC模型。用QD800-RGD探针和CD105单克隆抗体对OSCC冰冻切片行直接免疫荧光双重染色,用激光扫描共聚焦显微镜观察QD800-RGD探针与肿瘤新生血管内皮细胞表达的整合素αvβ3的结合情况。将QD800-RGD探针通过尾静脉注射入OSCC模型动物,在不同时间点通过活体成像观察QD800-RGD对OSCC活体原位可视化动态成像情况。在12 h后处死荷瘤鼠取出肿瘤,检测QD800-RGD在体内与肿瘤新生血管内皮细胞表达的整合素αvβ3的结合情况。结果 QD800-RGD探针在体内和体外均能与OSCC肿瘤新生血管内皮细胞表达的整合素αvβ3特异性靶向结合。静脉注射QD800-RGD探针后能对体内OSCC进行清楚地可视化成像,在注射QD800-RGD后0.5-6 h内肿瘤成像最完整,信噪比最高,9 h时肿瘤荧光强度显著减低,但在12 h时仍能看到明显的肿瘤成像。结论以肿瘤新生血管内皮细胞表达的整合素αvβ3为靶点,利用QD800-RGD探针经静脉注射后能对OSCC进行清晰地可视化成像,在OSCC的诊断和个体化治疗等方面有巨大的发展前景。

两亲性氨基酸嵌段共聚物的合成、表征和载药性能

采用N-羧酸-α-氨基酸-环内酸酐开环聚合的方法合成两亲性氨基酸嵌段共聚物(苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物,PPA-PAA),并以难溶性药物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)为模型药考察该聚合物的载药性能。采用FT-IR与1H NMR对合成的PPA-PAA结构进行表征,计算聚合度,采用芘荧光探针法测定两亲性氨基酸嵌段共聚物临界胶束浓度(CMC),动态光闪射法测定胶束粒径。结果 PPA-PAA的CMC为95 mg/L,形成胶束的粒径为235 nm,载药量和包封率分别为27.1%和74.1%。PPA-PAA有望成为难溶性药物的给药载体。

针对T315I突变的Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制剂研究进展

BCR-ABL是一种由bcr基因和c-abl原癌基因融合产生的致癌基因。该基因表达的Bcr–Abl癌蛋白是慢性粒细胞白血病的病理学基础。因此研发选择性的Bcr–Abl酪氨酸激酶抑制剂成为治疗慢性粒细胞白血病的一种有效策略。目前已有数个Bcr–Abl酪氨酸激酶抑制剂获准上市。然而,Abl激酶结构域的突变或其他原因导致肿瘤耐药性的出现,其中T315I突变是最重要的突变之一,引发的耐药性更是难以克服。重点介绍了针对T315I突变的Bcr–Abl酪氨酸激酶抑制剂的研究进展。

蛋白酪氨酸激酶小分子抑制剂的研究新进展

酪氨酸激酶在细胞的恶性生长和增殖中起着非常重要的作用,发展选择性的蛋白激酶抑制剂来阻断或调控由于这些信号通路异常产生的疾病已被广泛认为是抗肿瘤药物开发的一个富有前景和有效的研究策略.近年来科学家在蛋白酪氨酸激酶抑制剂这一领域进行了大量的工作,合成了数百个受体型或者非受体型酪氨酸激酶抑制剂,其中8个小分子抑制剂被美国食品药品管理局(FDA)批准作为抗肿瘤药物进入临床使用.随着肿瘤多重耐药性的出现,新机理的小分子酪氨酸激酶抑制剂被不断探索.以小分子抑制剂与酪氨酸激酶不同的作用模式来进行分类,系统地阐述了小分子酪氨酸激酶抑制剂的研究进展和发展趋势,并对代表性化合物的合成进行了介绍.

金振口服液氨基酸特征指纹图谱及29种氨基酸同时定量的质量控制方法研究

目的氨基酸自动分析仪建立金振口服液(JOL)氨基酸特征指纹图谱及29种氨基酸(磷酸丝氨酸、牛磺酸、天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、肌氨酸、甘氨酸、丙氨酸、瓜氨酸、α-氨基丁酸、缬氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、β-丙氨酸、β-氨基丁酸、γ-氨基丁酸、鸟氨酸、赖氨酸、组氨酸、3-甲基组氨酸、精氨酸、羟脯氨酸、脯氨酸)同时定量的分析方法。方法采用日立855-4507型离子交换色谱柱(60mm×4.6mm,3μm);检测波长分别为570、440 nm;流动洗脱泵体积流量0.35 mL/min;衍生泵体积流量0.30 mL/min;反应柱温135℃;以柠檬酸缓冲溶液为流动相进行梯度洗脱,建立JOL氨基酸特征指纹图谱,对29个主要特征峰进行化学成分指认,运用中药指纹图谱相似度软件对16批市售制剂进行相似度评价,同时对29种氨基酸进行含量测定。结果建立了JOL氨基酸特征指纹图谱结合29种氨基酸同时定量的方法;16批市售制剂的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度值在0.989~1.000;29种定量成分线性关系良好(R2=1.000),且平均回收率为95.71%~101.87%;16批市售制剂29种氨基酸的质量浓度分别为磷酸丝氨酸15.4572~29.3624μg/mL、牛磺酸64.4234~114.2386μg/mL、天冬氨酸19.0564~32.5490μg/mL、苏氨酸6.704 8~7.841 8μg/mL、丝氨酸22.609 4~39.382 8μg/mL、天冬酰胺61.134 0~115.456 0μg/mL、谷氨酸32.254 6~63.127 2μg/mL、谷氨酰胺5.2238~8.9532μg/mL、肌氨酸4.0810~44.0076μg/mL、甘氨酸12.4030~23.5164μg/mL、丙氨酸33.876 8~44.257 4μg/mL、瓜氨酸3.514 2~9.881 0μg/mL、α-氨基丁酸1.126 4~2.287 8μg/mL、缬氨酸11.584 6~15.469 0μg/mL、胱氨酸1.660 2~4.041 8μg/mL、异亮氨酸4.087 8~5.469 2μg/mL、亮氨酸8.295 2~11.724 0μg/mL、酪氨酸7.492 6~10.761 2μg/mL、苯丙氨酸4.856 4~9.248 0μg/mL、β-丙氨酸2.309 4~6.782 6μg/mL、β-氨基丁酸0.175 0~14.790 6μg/mL、γ-氨基丁酸17.654 4~26.621 8μg/mL、鸟氨酸42.338 4~58.172 6μg/mL、赖氨酸12.994 9~28.498 0μg/mL、组氨酸1.802 6~4.0674μg/mL、3-甲基组氨酸2.6084~4.3840μg/mL、精氨酸107.1416~301.6498μg/mL、羟脯氨酸15.8116~37.8076μg/mL、脯氨酸143.714 6~243.956 6μg/mL。结论氨基酸自动分析仪法测定JOL中氨基酸具有重现性好、结果可靠的优点;且JOL中氨基酸类成分定性定量研究在一定程度上明确了君药山羊角对制剂组方的成分贡献,为构建JOL全方位质量评价体系提供了有益补充。

RGD脂肪醇与17-AAG脂质体的制备及抗肿瘤活性研究

目的制备一种新的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-苯丙氨酸-脂肪醇(Arg-Gly-Asp-Phe-fatty alcohol,RGDFOC12)与17-丙烯氨基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG)的脂质体(RGDFOC12liposomes-loaded 17-AAG,RLAs)。方法采用薄膜分散-探头超声法制备;采用激光纳米粒度仪、透射电镜和扫描电镜测定粒径,Zeta电位和外观形态;采用动态透析法测定药物释放;采用四甲基偶氮唑盐〔3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT〕考察其对5种人肿瘤细胞株增生的抑制作用;通过瘤质量、存活数、体质量、脏器指数比评价其在小鼠体内抗肿瘤效果。结果制备得到的RLAs的粒径为(130.6±0.6)nm,Zeta电位为(-28.37±1.67)m V,外观形态为球形,包封率为80%以上。RLAs在p H 5.4环境的累积释放百分数大于在p H 7.4环境的累积释放百分数。RLAs在血浆中可稳定存在,12 h累积释放百分数为(15.85±0.71)%。RLAs对5种肿瘤细胞有抑制增生作用。RLAs对接种S180腹水瘤的ICR小鼠有抑制肿瘤生长作用。结论本研究制备了一种新的RLAs,制备方法简单、包封率高,具有较好的抗肿瘤活性。

以海豹油为基质的多西紫杉醇脂肪乳的制备及其抗肿瘤活性研究

目的制备精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-苯丙氨酸-十二烷基脂肪醇(arginine-glycine-aspartate-phenylalanine-dodecyl alcohols,RGDFOC12)介导的多西紫杉醇(docetaxel,DTX)脂肪乳简称RGDFOC12-DTX脂肪乳,并考察其抗肿瘤活性。方法以抗肿瘤药物DTX为模型药物,以海豹油为油相,卵磷脂为乳化剂,两亲性RGDFOC12为新型膜材,通过高压乳匀法制备RGDFOC12-DTX脂肪乳。并考察其粒径、Zeta电位、渗透压、离心率(Ke)、p H、包封率、体外释药行为和抗肿瘤作用效果。结果 RGDFOC12-DTX脂肪乳粒径在190~250 nm,Zeta电位在-30^-40 m V,渗透压在280~320 m Osm·L-1,0.50<Ke<0.70,p H在6.5~8.0,载药质量浓度为1 000 mg/L,包封率在90%以上。电镜下观察RGDFOC12-DTX脂肪乳粒子呈均匀球形。体外释放实验显示RGDFOC12-DTX脂肪乳呈缓释的特点,体外抗肿瘤活性实验显示,RGDFOC12-DTX脂肪乳对各细胞系有明显的时间依赖效应,且呈现出缓释的特点。体内抗肿瘤活性实验显示,RGDFOC12-DTX脂肪乳具有更好的抗肿瘤活性。结论本文报道了RGDFOC12-DTX脂肪乳的新剂型及制备方法,该剂型可有效增加药物的稳定性,降低注射时的刺激性,增强机体依从性且具有缓释性和更好的抗肿瘤活性。

量子点偶联RGD用于喉癌血管的靶向活体成像

研究了偶联环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-D-苯丙氨酸-赖氨酸[c(RGDfK)]肽段的CdSe/ZnS量子点(QDRGD)对喉癌血管靶向成像。利用羧基与氨基反应将c(RGDfK)肽段与QD偶联;采用荧光分光光度计对QD-RGD在RMPI1640培养基和小鼠血清溶液中的光谱稳定性进行了检测;利用荧光显微镜检测QD-RGD对Hep-2细胞和MCF-7细胞上整合素αvβ3的靶向性;最后将QD-RGD尾静脉注射到小鼠体内,检测了其对皮脊翼视窗中喉癌血管的靶向性。结果表明QD-RGD的发射光谱在RMPI1640培养基4h内没有明显变化,在小鼠血清中24h内发射光谱的荧光强度仅下降了20%;对细胞荧光成像表明QD-RGD能特异性与细胞表面的整合素αvβ3结合;血管成像表明QD-RGD在注射2h后聚集在喉癌局部血管,24h后QD-RGD从血管中移除。该研究表明QD-RGD能用于活体喉癌肿瘤血管靶向成像,这为喉癌的靶向诊断和靶向治疗研究提供了参考。