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提高抗恶性疟独特型单抗克隆出现频率的方法学探讨
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作者 李纪良 李英杰 +4 位作者 巢穗 欧阳明辉 彭一兵 林来兴妹 常文生 《第一军医大学学报》 CSCD 1992年第3期193-198,共6页
用Protein A-Sepharose亲和层析法提纯McAb-IgG,皮下多点和腹腔免疫雄性Wistar大鼠,间隔两周共3次,融合前3天采用腹腔、尾静脉和脾内注射等三种加强免疫方法,以间接ELISA法和抗体竞争ELISA法筛选Anti-Id阳性克隆。结果显示:融合前大鼠... 用Protein A-Sepharose亲和层析法提纯McAb-IgG,皮下多点和腹腔免疫雄性Wistar大鼠,间隔两周共3次,融合前3天采用腹腔、尾静脉和脾内注射等三种加强免疫方法,以间接ELISA法和抗体竞争ELISA法筛选Anti-Id阳性克隆。结果显示:融合前大鼠血清抗小鼠IgG或抗免疫原McAb-IgG滴度,静脉组和脾内组比腹腔组高一个滴度;Anti-Id阳性克隆出现频率,腹腔组为0.9%和0.3%,静脉组为11.0%和13.3%,脾内组为16.4%和12.9%,静脉组和脾内组明显高于腹腔组(P<0.01);上述三种加强免疫方法对抗小鼠IgG阳性克隆出现频率无明显影响(P>0.05);与腹腔加强免疫组相比,静脉和脾内加强免疫组也可提高细胞融合效果(P<0.01).本实验结果提示,腹腔和皮下多点多次长程基础免疫结合静脉或脾内加强免疫是制备Anti-Id McAb比较好的免疫方案。 展开更多
关键词 抗独特型抗体 免疫 恶性疟
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人-鼠杂交瘤制备人单克隆抗体技术的研究
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作者 叶银英 刘立华 +2 位作者 姜凯 葛曼丽 李明举 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1991年第4期54-59,共6页
本文采用小鼠骨髓瘤细胞系(Sp2/0)与破伤风类毒素(TT)免疫的人外周血淋巴细胞(PBL)进行融合,对人—鼠杂交瘤细胞系制备人单克隆抗体的技术条件进行了探讨。按免疫时间(d)及体外刺激与否分为4组。结果表明:(1)PWM+TT体外刺激可导致B细胞... 本文采用小鼠骨髓瘤细胞系(Sp2/0)与破伤风类毒素(TT)免疫的人外周血淋巴细胞(PBL)进行融合,对人—鼠杂交瘤细胞系制备人单克隆抗体的技术条件进行了探讨。按免疫时间(d)及体外刺激与否分为4组。结果表明:(1)PWM+TT体外刺激可导致B细胞总数增加,且融合率高,容易建成稳定分泌人单抗的细胞株。(2)经TT免疫的人PBL,6d就有抗TT抗体(IgG)的前体细胞出现。15d及21d时,抗TT抗体前体细胞的频率更高。(3)体内免疫7d及14d并分别经体外刺激的两组共建立5株阳性株。经双扩碓定IgG2株,IgM3株。冻存10个月后复苏、传代及适当的克隆化后仍为阳性。上清液中人Ig的分泌量为0.42~1.15μg/ml。经染色体核型鉴定,碓认为人-鼠杂种细胞。 展开更多
关键词 人-鼠 杂交瘤 单克隆抗体
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分泌抗破伤风类毒素人单克隆抗体的人鼠杂交瘤细胞系的建立
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作者 叶银英 刘立华 +2 位作者 姜凯 葛曼丽 李明举 《南京铁道医学院学报》 1991年第4期210-213,共4页
作者采用小鼠骨髓瘤细胞系与破伤风类毒素免疫的人外周血淋巴细胞进行融合,对影响人-鼠杂交瘤细胞制备人单抗成功的因素进行了探讨。按免疫时间(天)及体外刺激与否分为四组、其中以 PWM+TT 体外刺激 PBL(比体外不刺激)的细胞融合率高,... 作者采用小鼠骨髓瘤细胞系与破伤风类毒素免疫的人外周血淋巴细胞进行融合,对影响人-鼠杂交瘤细胞制备人单抗成功的因素进行了探讨。按免疫时间(天)及体外刺激与否分为四组、其中以 PWM+TT 体外刺激 PBL(比体外不刺激)的细胞融合率高,且易建成稳定分泌抗体的细胞系。经5次克隆化后获得5株抗 TT 的人单抗杂交瘤细胞系。经双扩确定 IgG2株,IgM3株。冻存10个月后复苏,传代及适当的克隆化后仍为阳性。上清液中人 IgM 的分泌量为0.42~1.15μg/ml。经染色体鉴定确为人-鼠杂种细胞。 展开更多
关键词 破伤风类毒素 克隆化 体外刺激 分泌量 单抗 单克隆抗体 杂交瘤细胞 人鼠 细胞融合 染色体
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Preparation and Identification of Rat Monoclonal Anti-idiotope Antibody to the Antibody against Erythrocytic Stages of Plasmodium Falciparum
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作者 李纪良 巢穗 +1 位作者 欧阳明辉 李英杰 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1989年第1期57-59,共3页
A hybridoma cell line secreting monoclonal antibody to idiotope of the monoclonalantibody 94D1 specific for asexual erythrocytic stages of Plasmodium falciparum was established byfusion of SP2/0 mouse myeloma cells wi... A hybridoma cell line secreting monoclonal antibody to idiotope of the monoclonalantibody 94D1 specific for asexual erythrocytic stages of Plasmodium falciparum was established byfusion of SP2/0 mouse myeloma cells with spleen cells of Wistar rats immunized with monoclonalIgG of 94D1 purified from ascitic fluid of BALB/C mouse by affinity chromatography on ProteinA- Sepharose CL- 4B. Specificity of the anti - idiotope antibody (anti - Id), 41RF5, was deter-mined with indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results showedthat 41RF5 reacted only with 94D1 IgG2b, not with normal mouse IgG and other seven mousemonoclonal antibodies - five specific for erythrocytic stages of P. falciparum, one for erythrocyticstages of P. inui, and one for Dengue fever virus type III, which indicates that 41RF5 does recognizespecifically the idiotope of 94D1 monoclonal antibody. In 41RF5 heterohybrid culture supernatant,anti-Id titre measured by ELISA was above 1:1 280. Up to the present, the heterohybrid cell linehas been cultured stably for 16 months. 展开更多
关键词 IDIOTYPE MONOCLONAL anti-idiotope ANTIBODY mouse-rat heterohybridoma Plasmodium FALCIPARUM
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