小鼠放射性十二指肠炎模型的建立

目的:建立小鼠放射性十二指肠炎模型.方法:♀Balb/c小鼠93只,随机分为对照组(13只)、4.5 Gy组(13只)、6.0 Gy组(13只)、9.0Gy组(13只)、12.0 Gy组(13只)、13.5 Gy组(13只)、15.0 Gy组(15只),60Co射线对小鼠上腹部一次性照射,在照射后第3.5、7天处死解剖取十二指肠组织做病理切片,并取肠系膜淋巴结、脾和外周血血清检测细胞因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1、肿瘤坏死因子-(tumor necrosis factor-,TNF-.结果:照射后3.5 d,6个照射组促炎性因子IL-6、IL-1、TNF-均较对照组升高;照射后3.5 d,12.0、13.5、15.0 Gy 3个照射组小鼠十二指肠绒毛高度降低,隐窝深度变浅、数目减少,隐窝腔变大,均出现放射性肠炎改变,13.5、15.0 Gy组死亡较多,12.0 Gy组更能模拟临床放射性十二指肠炎,为研究提供模型.结论:60Co射线一次性腹部照射建立小鼠放射性十二指肠炎模型,12 Gy照射剂量更为合适.

2型糖尿病小鼠模型的研究进展

2型糖尿病是一种受遗传因素和环境因素共同影响的疾病,动物模型在糖尿病及其并发症的发病机制、预防和治疗方法的研究中发挥重要作用,当前应用广泛的糖尿病小鼠模型主要有自发性糖尿病小鼠模型、实验性糖尿病小鼠模型和基因工程糖尿病小鼠模型。不同实验方法制备的糖尿病小鼠具有模拟临床糖尿病不同方面的特点,该文对各个模型的发病机制和生理特点等方面进行了阐述,以利于研究者根据各自不同的实验需求和目的选择合适的糖尿病小鼠模型来验证或实现科研设想。

食源性肥胖小鼠胰岛素抵抗模型的建立

本试验通过改良的高糖高脂饲料饮食诱导建立肥胖和胰岛素抵抗动物模型。我们将40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为肥胖诱导组(DIO组)和正常对照组(CHOW组),分别喂以高糖高脂饲料和基础饲料4个月后,观察它们的体重和血糖情况,发现两组小鼠无论在体重还是血糖水平上差异都极其显著;对两组小鼠做葡萄糖耐量试验和胰岛素耐受试验,发现DIO组小鼠表现出明显的糖耐量异常和胰岛素抵抗现象;最后检测血清胰岛素水平发现,DIO组小鼠与CHOW组比较出现了明显的高胰岛素症状。故改良的高糖高脂饲料饮食诱导是一种经济实用、快速的肥胖和胰岛素抵抗动物模型建立的方法。

OVA特异性免疫治疗对哮喘小鼠IL-23/Th17轴的影响及机制研究

目的腹部皮下注射大剂量卵白蛋白(OVA)建立小鼠哮喘免疫治疗模型,探讨IL-23/Th17轴在小鼠哮喘模型经皮免疫治疗过程中的作用。方法选择18只BALB/c小鼠为建模研究对象,按随机数字表法分为3组:空白对照组、哮喘对照组和哮喘免疫治疗组,每组6只小鼠。哮喘免疫治疗组予10μg OVA于0、7 d腹腔注射致敏,21~27 d持续1周予1 mg OVA腹部皮下注射诱导免疫耐受,35~41 d予1%OVA雾化激发;哮喘对照组在21~27 d OVA皮下注射等量生理盐水,其余处置同哮喘免疫治疗组;空白对照组采用等量生理盐水致敏及激发。50 d予10%OVA加强激发1次。末次激发24 h内检测气道反应性;收集支气管肺泡灌洗液(BALF)计数细胞总数及细胞分类计数;ELISA法检测血清OVA特异性Ig E、BALF中IL-5、IFN-γ、IL-23、IL-10的表达;HE染色观察肺组织病理改变;流式细胞仪检测各组脾、肺组织Treg、Th17细胞比例;q-PCR检测肺组织转录因子。结果哮喘免疫治疗组气道反应性、BALF中嗜酸性粒细胞计数、IL-23水平及血清OVA特异性Ig E水平明显低于哮喘对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而BALF中IFN-γ水平与哮喘对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);同时HE染色发现哮喘免疫治疗组肺组织炎症较哮喘对照组明显减轻;流式细胞技术检测发现外周血Treg细胞百分比明显高于哮喘对照组,差异有统计学意义(P<0.05);q-PCR检测肺组织转录因子表明免疫治疗组Foxp3明显高于哮喘对照组,而RORγt明显低于哮喘对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论大剂量OVA特异性免疫治疗能够减轻哮喘小鼠气道慢性炎症反应,同时引起Th17细胞下降伴随IL-23表达降低;其机制可能与纠正肺部IL-23/Th17轴有关。

空肠弯曲菌诱导系统性红斑狼疮样小鼠模型的优化

目的优化空肠弯曲菌(CJS131)诱导系统性红斑狼疮(SLE)样小鼠模型的方法。方法小鼠随机分为5组,即正常对照组、卡介苗(BCG)对照组、结核分枝杆菌H37Ra对照组、CJS131+BCG模型组和CJS131+H37Ra模型组。在第0天免疫,在第14、21、42天加强免疫,在第36、54、61天分批称其体质量后处死。检测小鼠免疫器官指数、血清抗核抗体水平、血清总Ig G水平和肾组织病理损伤程度。结果不论采用含BCG还是H37Ra的弗氏完全佐剂(FCA),给予CJS131免疫的小鼠均有SLE样综合征的表现:血清抗核抗体及总Ig G水平升高,肾组织损伤。在动态检测中病变基本维持。结论 CJS131在对模型组小鼠的免疫诱导中起主要作用,以BCG或H37Ra作为FCA中采用的菌株都可引起病变,通过加强免疫可维持小鼠长期病变,优化后的模型可用于SLE治疗性药物的筛选。

当归多糖与阿糖胞苷联合注射对人白血病模型小鼠脾脏结构与功能的影响

目的:探讨当归多糖(ASP)与阿糖胞苷(Ara-C)联合注射对移植性人白血病模型小鼠脾脏结构与功能的影响及其相关机制。方法:每只小鼠尾静脉移植2×107个K562细胞建立移植性人白血病NOD/SCID小鼠模型,模型建立后随机分为模型组和当归多糖组、阿糖胞苷组、当归多糖+阿糖胞苷组。从移植K562细胞第31d开始腹腔分别注射当归多糖(200 mg/kg、阿糖胞苷(2.5mg/kg)和当归多糖(200 mg/kg)+阿糖胞苷(2.5 mg/kg),共14d,模型组注射等时等量的生理盐水。药物注射完成第2d,取眼球血检测外周血白细胞总数与分类计数,取股骨测定每只股骨有核细胞(BMMCs)数,取脾脏测定脾指数并将新鲜小块脾制作成10μm冷冻切片,HE和TUNEL染色观察脾脏病理形态学与细胞凋亡情况。取0.04 g脾脏制备10%的组织匀浆,提取各组上清液并检测抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD),氧化产物谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的蛋白浓度与炎症因子IL-1β、IL-6水平。结果:与模型组比较,无论是当归多糖、阿糖胞苷单独注射或当归多糖和阿糖胞苷联合用药均能有效降低外周血白细胞总数,降低中性粒细胞百分率,提高淋巴细胞百分率;降低股骨BMMCs数;减少脾指数;白血病细胞对脾浸润减少且凋亡率增加;脾脏抗氧化能力下降得以抑制,表现为GSH-Px与SOD活性升高,氧化产物GSH与MDA降低;炎症因子IL-1β、IL-6水平降低,且联合用药组效果更为明显。结论:当归多糖与阿糖胞苷能减少白血病细胞在脾脏内聚集,促进白血病细胞衰老凋亡,降低白血病细胞对脾结构与功能损伤,减轻脾脏炎症反应,提高脾组织抗氧化能力。

mSpag9肾脏特异性基因敲除小鼠模型的构建与鉴定

目的:为研究支架蛋白JLP在肾脏中的生理功能,建立小鼠精子相关抗原(mSpag9)肾脏特异性基因敲除小鼠模型,为研究该基因所发挥的重要生理功能提供材料和思路。方法:构建mSpag9基因重组载体,通过电转打靶转染胚胎干细胞(ES细胞),将筛选出的阳性ES细胞克隆,经显微注射至超排小鼠的囊胚腔后移植于受体小鼠,从子代筛选嵌合体小鼠,与携带flp位点C57/BL6N小鼠杂交后得到mSpag9flox/+基因敲除小鼠,自交筛选出mSpag9flox/flox小鼠,再与KSP-CreERT2小鼠杂交得到mSpag9flox/flox-Cre肾脏特异性基因敲除小鼠并进行鉴定,待小鼠成长至5周,使用Tamoxifen(10mg/mL葵花籽油溶解)腹腔注射(0.04mg/g)诱导Cre重组酶特异性表达于肾小管上皮细胞。结果:经PCR扫描后得到10株阳性ES细胞克隆,其中6株使用SouthernBlot鉴定;经显微注射后得到4只雄性、5只雌性嵌合体小鼠,与flp小鼠杂交后得到9只mSpag9flox/+基因敲除小鼠,将自交得到的mSpag9flox/flox小鼠与KSP-CreERT2小鼠交配筛选出mSpag9flox/+-Cre+3只小鼠,将其与mSpag9flox/flox小鼠回交得到基因型为mSpag9flox/flox-Cre+小鼠,即为mSpag9肾脏特异性基因敲除小鼠。结论:该模型利用Cre-Loxp系统实现基因mSpag9的基因打靶,Tamxifen诱导基因mSpag9实现该基因在肾小管上皮细胞上敲除,为进一步研究mSpag9基因及支架蛋白在肾脏生理病理进展中所发挥的作用提供工具。