制备方式对植物提取物的影响及其在丹皮中的应用

植物含有糖类、醌类、黄酮类、苯丙素类、萜类、酚类、挥发油等大量的次生代谢产物,不同的代谢产物具有抗氧化、抗炎、抗菌等不同的生物学功能。溶剂法、微波和超声波辅助提取法、水蒸气蒸馏法、超临界流体萃取法、高压和低压辅助酶处理法等不同方法提取的代谢产物成分、含量及提取率差异较大,甚至制备方法会影响其生物活性。基于此,探讨了不同制备方式对植物提取物化学成分及生物活性的影响,并以丹皮为例,详细总结了不同制备方式对其化学成分种类及生物活性的影响,以期为植物源活性物质的提取方法选择提供思路,为活性成分的生物学功能研究及解释提供参考。

牡丹皮提取物除草活性初步研究

为明确牡丹皮(Cortex Moutan Radicis)的除草活性并初步探索其活性成分分离条件,采用平皿法、土壤喷雾法及茎叶喷雾法测定了牡丹皮不同极性溶剂萃取物对反枝苋Amaranthus retroflexus和稗Echinochloa crus-galli的除草活性。平皿法测定结果显示,在1 mg/mL浓度下,牡丹皮正丁醇萃取物的除草活性最强,对反枝苋幼根和幼茎的抑制率分别为67.88%和65.71%,对稗草幼根和幼茎的抑制率分别为68.72%和71.32%;毒力测定结果表明,牡丹皮正丁醇萃取物对反枝苋幼根和幼茎的IC50分别为12.28 mg/L和19.67 mg/L,对稗草幼根和幼茎的IC50分别为43.35 mg/L和72.79 mg/L。土壤喷雾法和茎叶喷雾法测定结果显示,在5 mg/mL浓度下,牡丹皮正丁醇萃取物对反枝苋和稗草的鲜重抑制率最高,其中土壤喷雾法对反枝苋和稗草的鲜重抑制率分别为81.43%和83.18%;茎叶喷雾法对两种杂草的鲜重抑制率分别为80.83%和83.65%。由此可见,牡丹皮的除草活性成分主要集中在正丁醇萃取物中,值得进一步研究。

高效液相法同时测定市售牡丹皮配方颗粒中四种活性成分的含量

目的建立同时测定牡丹皮配方颗粒中4种活性成分(没食子酸、儿茶素、芍药苷、丹皮酚)含量的方法,并对山东省内市售的22批牡丹皮配方颗粒的4种活性成分的含量进行测定,分析不同提取工艺对活性成分含量的影响。方法采用Agilent ZORBAX SB-C18柱,以乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 ml/min,检测波长230 nm,柱温:35℃,进样量:10μl。结果没食子酸、儿茶素、芍药苷、丹皮酚分别在1.07~107.34μg/ml(R^(2)=0.999)、1.08~108.12μg/ml(R^(2)=0.998)、1.01~101.14μg/ml(R^(2)=0.999)、1.04~104.24μg/ml(R^(2)=0.999)范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为95.26%、94.66%、95.54%,95.57%,RSD分别为0.2%、0.5%、0.2%、0.3%。测定市售的22批样品,没食子酸、儿茶素、芍药苷和丹皮酚的含量分别为6.028~21.996 mg/g、0.032~0.209 mg/g、11.147~26.269 mg/g、0.215~11.499 mg/g。结论该含量测定方法快速、简单,可为规范和控制牡丹皮配方颗粒质量提供科学方法和依据。

正交试验法优化赤芍-牡丹皮药对水提醇沉工艺

目的优选赤芍-牡丹皮药对(11)水提醇沉工艺。方法采用L9(34)正交试验法,以料液比、提取时间、提取次数为考察因素,以芍药苷、丹皮酚的含量及干膏得率为考察指标,采用Hassan法进行多指标综合评分,优选水提工艺;以药液密度、乙醇体积分数、静置时间为考察因素,以芍药苷、丹皮酚的转移率及干膏得率为考察指标,结合大生产实际情况优选醇沉工艺。结果最优水提工艺为加10倍量水,煎煮提取1次,每次60 min;最佳醇沉工艺为药液密度1.20 g·mL^(-1)(30℃),加入95%乙醇使含醇量达60%,静置60 h。结论优选的水提醇沉工艺稳定可靠、重复性好,可为赤芍-牡丹皮药对(1∶1)的后续研究提供参考。

牡丹皮抗弧菌活性物质的提取及成分分析

为了优化牡丹皮抗弧菌物质的提取工艺,并分析其抗弧菌成分,试验先采用单因素试验确定牡丹皮抗弧菌物质的最佳提取溶剂、溶剂浓度、提取温度、提取时间、液料比;然后在单因素试验基础上,选取响应面优化法的三个影响因素,以抑菌圈直径为响应值,采用三因素三水平响应面法对牡丹皮抗弧菌物质提取工艺进行优化,得到最佳提取条件并进行验证;最后通过活性追踪方法,采用硅胶柱层析及高效液相色谱(HPLC)初步分析牡丹皮中抑制弧菌的活性成分。结果表明:单因素试验得到最佳提取溶剂为乙醇,乙醇浓度为50%,提取温度为50℃,提取时间为60 min,液料比为25∶1,选取提取温度、提取时间、液料比作为响应面法的优化因素,确定提取条件为提取温度50℃、提取时间52 min、液料比24∶1。在该条件下,抑菌圈直径为23.11 mm,与预测值23.19 mm接近。从牡丹皮活性物质中确定了两个抗弧菌活性成分,分别为丹皮酚和1,2,3,4,6-o-五没食子酰葡萄糖。说明本试验成功优化了牡丹皮抗弧菌物质的最佳提取工艺条件,并确定活性物质主要成分为丹皮酚和1,2,3,4,6-o-五没食子酰葡萄糖。

牡丹皮药材的最适提取工艺研究

目的:比较牡丹皮药材的几种常用提取方法,以获得最适提取工艺。方法:采用醇提法、蒸馏 煎煮法、CO2 超临界流体萃取法及传统煎煮法对牡丹皮进行提取,并依据总提取物收率、丹皮酚收率、其他成分提取情况、实际生产可行性等,对实验结果进行分析。结果:所用方法的总提取物收率依次为12 .6 6 % ,13. 5 1% ,7 .2 8% ,7 .5 6 % ,丹皮酚收率依次为2 . 4 5 % ,2. 2 6 % ,0 . 31% ,1. 15 % ;除CO2 超临界流体萃取法外,其他方法均能检出酚苷类成分。结论:蒸馏 煎煮法是牡丹皮药材目前最适提取方法。

奥扎格雷钠对心肌缺血的保护作用研究

目的研究奥扎格雷钠对心肌缺血的保护作用。方法采用小鼠耐缺氧实验和垂体后叶素(PIT)所致大鼠心肌缺血试验研究奥扎格雷钠的保护作用。结果奥扎格雷钠能显著延长常压耐缺氧动物的存活时间,明显延长给予异丙肾上腺素小鼠常压耐缺氧存活时间;奥扎格雷钠显著抑制PIT致大鼠心电图第Ⅰ期和第Ⅱ期T波及J点变化,且能显著性减少PIT致大鼠心律失常的发生例数。结论奥扎格雷钠能明显改善PIT引起的大鼠心肌缺血的损伤程度,其机制可能是通过扩张冠脉,增加心肌的供血供氧而发挥抗心肌缺血的作用。

用超临界CO_2从丹皮中提取丹皮酚

用超临界CO2 进行中药丹皮的提取 ,用紫外光谱和气相色谱 -质谱联用法进行分析 ,用正交实验法研究了提取温度、压力和时间的影响 ,结果表明丹皮中丹皮酚的质量分数为 1.5 3% ,丹皮酚最佳提取工艺条件为在 45℃ ,10MPa下 ,提取 75min ,在此提取条件下 ,可以将丹皮中 99%(质量分数 )的丹皮酚提取出来 ,所得产品丹皮酚的质量分数为 96 .2 49%

丹皮提取物对系统性红斑狼疮患者Th17细胞的影响

目的：探究丹皮提取物对系统性红斑狼疮（ systemic lupus erythematosus，SLE）患者Th17细胞的影响。方法选择2012年3月～2013年8月在河南大学淮河医院接受治疗的SLE患者168例，以数字法随机法分为对照组和观察组，每组84例。对照组应用常规药物治疗，观察组在常规治疗基础上加用丹皮提取物治疗。对比2组治疗前后Th17细胞与Th1细胞百分率，并观察不良反应发生率。结果治疗前2组患者一般资料比较差异无统计学意义。治疗后观察组Th17细胞百分率下降至（0．27±0．15）％、Th1细胞上升至（2．53±1．72）％，均较对照组变化幅度更明显（ P＜0．05）。治疗后观察组IL－6水平、SLEDAI评分以及ESR均比对照组下降明显（ P＜0．05）。总不良反应发生率也显著少于对照组（ P＜0．05）。结论丹皮提取物能有效改善SLE患者病情，通过降低Th17细胞百分比及增加Th1细胞的百分比发挥作用，不良反应少。

牡丹皮提取物抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化

目的：探讨牡丹皮提取物（丹皮酚、总苷和多糖提取物按照一定比例形成的组合物）对TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化的影响。方法：MTT法分析牡丹皮对两种细胞增殖的影响。TGF-β1诱导A549肺泡上皮细胞的间质转化和MRC-5肺成纤维细胞的活化,用不同剂量的牡丹皮干预;圆形度定量法分析细胞形态,免疫细胞化学法检测细胞E-cad和Collagen-I蛋白的表达;双抗体夹心酶联免疫吸附法检测Collagen-I和FN水平。结果：12.5-200μg/m L牡丹皮对A549细胞和MRC-5细胞的增殖没有显著性影响（P〉0.05）。对于A549细胞,与正常组比较,TGF-β1组圆形度和E-cad表达显著降低（P〈0.01）,Collagen-I表达显著升高（P〈0.01）;与TGF-β1组比较,牡丹皮不能显著抑制圆形度的变化（P〉0.05）,但50-200μg/m L牡丹皮能显著抑制E-cad表达的下调（P〈0.05或0.01）,200μg/m L牡丹皮能显著抑制Collagen-I表达的上调（P〈0.05）。对于MRC-5细胞,与正常组比较,TGF-β1组FN、Collagen-I的分泌量显著增加（P〈0.01）;与TGF-β1组比较,100μg/m L和200μg/m L牡丹皮提取物组的上述两种蛋白的分泌量显著减少（P〈0.05或0.01）。结论：牡丹皮提取物抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的间质转化和肺成纤维细胞的活化,提示牡丹皮可能具有抑制肺纤维化的形成和发展的作用。

牡丹皮水提取物及乙醇提取物的抗菌作用研究

目的研究牡丹皮水提取物及不同浓度乙醇提取物的体外抑菌和杀菌作用。方法用试管内药液稀释法测定牡丹皮水提取物及不同浓度乙醇提取物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结果牡丹皮水提取物和乙醇提取物对金黄色葡萄糖球菌、大肠杆菌及绿脓杆菌均有较强的抑制作用和一定的杀灭作用,且水提取物的作用强于乙醇提物。结论牡丹皮具有抗菌作用。

夜热清颗粒中牡丹皮的提取工艺研究

目的:探讨夜热清颗粒中牡丹皮的提取工艺。方法:采用水蒸气蒸馏法提取牡丹皮中挥发性成分,剩余药渣用水煎,分别以丹皮酚的提取量为指标,采用正交试验法筛选牡丹皮的提取工艺;以芍药苷转移率为指标筛选水提工艺。结果:优选的工艺条件为牡丹皮加12倍量水浸泡3h,水蒸气蒸馏收集9倍量蒸馏液。丹皮酚的平均提取率为87.9%;药渣加入5倍量水煎煮2h。结论:优选得到的工艺稳定可行。

牡丹丹皮提取物的纯化研究

为了研究牡丹根皮提取物的纯化方法与纯化效果，试验以水蒸气蒸馏法获得的丹皮提取物为样品，用两相溶剂萃取法与酸碱分离法相结合对其纯化重结晶；用薄层层析法与紫外分光光度法和气相色谱质谱法相结合对纯化物进行分析；用气相色谱质谱法测定纯化物的含量。结果表明，两相溶剂萃取法与酸碱分离法相结合使样品中丹皮酚的纯度达到93％，然后用重结晶法，使丹皮酚的纯度由93％提高到98．5％。用薄层层析法进行定性分析，纯化物和标准品的尺厂值相同，说明两者分子量相同。用紫外分光光度法、气相色谱质谱法对纯化物和标准品在波长200-400nm之间扫描，结果在211．80nm和274．20nm处有共同的最大吸收峰，说明两者具有相同组分。用气相色谱质谱法测定祖提物丹皮酚的含量为87．7％、纯化物（Ⅰ）、（Ⅱ）丹皮酚的含量分别为93．0％、98．5％。结果证明此纯化工艺简单，纯化效果好。

牡丹皮等16种中草药提取物抑制植物病原菌的研究

以牡丹皮等16种中草药的丙酮提取物为材料,测定了其对5种植物病原菌的生长抑制活性。结果表明:在供试质量浓度为0.05 g/mL时,牡丹皮提取物对所有供试病原菌菌丝生长抑制效果最好,除对杨树溃疡病菌菌丝生长抑制率为85.3%外,对其他植物病原菌的抑制率均为100%。高良姜提取物抑菌活性次之,对4种供试植物病原菌菌丝生长抑制率均在80%以上,对番茄灰霉病菌的抑制率最低,也达到68%。黄芩提取物对供试的3种植物病原菌的抑制率超过60%。连翘、知母、蔓荆、乳香和地榆等5种中药提取物分别对供试的5种植物病原菌中的2种有较好的抑菌活性。在供试质量浓度为0.1 g/mL时,牡丹皮、高良姜等2种中药提取物对杨树溃疡病菌孢子萌发抑制作用相当明显,抑制率均在80%以上;白花蛇舌草、乳香、川楝等3种中药提取物对杨树溃疡病菌孢子萌发抑制作用次之,抑制率均在60%以上。

超临界CO_2萃取-高速逆流色谱分离纯化丹皮中丹皮酚

采用超临界CO2提取中药丹皮中总丹皮酚,选择萃取温度、萃取压力、物料粒度为因素进行正交实验优选出超临界CO2萃取的最佳工艺条件:即物料粒度40～60目,萃取温度40℃,萃取压力20MPa,提取率可达90%以上。将萃取后的总丹皮酚应用高速逆流色谱进行分离纯化,两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(1:0.4:1:0.4),进样量为330mg,得180mg纯度为99.0%的丹皮酚。

丹皮与赤芍提取物体外抑菌效果的研究

[目的]探讨丹皮与赤芍提取物的抑菌谱,为进一步开发这2种药材提供依据。[方法]采用滤纸片扩散法,研究了不同浓度丹皮与赤芍提取物对6种食源性微生物和致病菌的抑菌效果和最小抑菌浓度(MIC)。[结果]丹皮提取物对大肠杆菌(E.coli)、炭疽杆菌(B.anthracis)抑制作用较强,MIC分别为0.09和0.19mg/ml,对金黄色葡萄球菌(S.aureus)、猪粪链球菌(S.faecalis)抑制作用较弱;赤芍提取物对李斯特氏菌(L.monocytogenes)和鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)有较强的抑制作用,MIC分别为0.10和0.19mg/ml,而对猪粪链球菌(S.faecalis)抑制作用较弱。[结论]丹皮和赤芍提取物对6种供试菌有一定的抑制作用。

外加酚法制备牡丹皮饮片配方颗粒

目的研究牡丹皮饮片中丹皮酚的提取工艺和配方颗粒的制备工艺。方法分别采用直接煎煮提取法、回流提取法、水蒸汽蒸馏法提取法进行提取后,再过滤浓缩制备成配方颗粒。结果外加酚法采用将水蒸气蒸馏出的丹皮酚外加入浸膏中所制得配方颗粒中的丹皮酚含量最高。结论在今后研究中药提取制备工艺时,如果遇到药物中含有挥发性的有效成分,可考虑先用水蒸气蒸馏出,再外加入到浓缩的浸膏中,进而制成各种剂型应用于临床。

牡丹皮挥发油提取方法的研究

目的:优选牡丹皮原药材中挥发油的提取工艺。方法:采用共水蒸馏、间接水蒸气蒸馏和超临界CO2萃取三种提取方法提取牡丹皮中的挥发油,比较了不同提取方法对挥发油的出油率和丹皮酚含量的影响,并通过正交试验优化了提取工艺条件。结果:确定最佳提取方法为超临界CO2萃取,最佳萃取工艺为萃取温度50℃,萃取压力50 MPa,萃取3 h。结论:优选得到的工艺简便易行、稳定性好,为牡丹皮进一步开发研究提供了依据。

水蒸气蒸馏与乙醚超声萃取牡丹皮挥发油的比较研究

目的比较通过不同的提取方法得到的牡丹皮挥发油成分上的差异。方法分别用水蒸气蒸馏法和乙醚超声萃取法提取牡丹皮挥发油,进行气相-质谱(GC-MS)分析。结果采用水蒸气蒸馏法挥发油得率为1.2%,被鉴定的成分有17个;乙醚超声萃取法挥发油得率为2.5%,被鉴定的成分有20个。两者共有成分5个。结论两种提取方法所得牡丹皮挥发油成分存在差异但也有共同特征,乙醚超声萃取法挥发油得率更高,成分更加全面。

微波辅助萃取技术在不同药用部位的工艺研究

目的:研究微波辅助萃取全草及根皮类等不同部位中药材的最佳工艺。方法:分别以总黄酮、丹皮酚为考察指标,采用均匀设计优选微波辅助萃取鬼针草及牡丹皮药材的工艺。结果:优选出微波辅助萃取鬼针草中总黄酮的工艺条件为:微波功率850 W,提取时间30 m in,溶剂浓度40%,液固比13∶1,浸泡时间60 m in;牡丹皮中丹皮酚的工艺条件为:微波功率340 W,提取时间20 m in,溶剂浓度85%,液固比例为5∶1,浸泡时间30 m in。结论:微波辅助萃取技术适合于全草类药材鬼针草、根皮类药材牡丹皮中有效成分的提取。