208例BCR/ABL1阴性慢性骨髓增殖性疾病JAK2、CALR、MPL基因突变检测及其诊断价值

目的:检测经典BCR/ABL1阴性慢性骨髓增殖性疾病患者JAK2、CALR、MPL基因突变,探讨其诊断价值。方法:2012年3月至2015年12月208例BCR/ABL1阴性慢性骨髓增殖性疾病患者(ET146例,PV37例,MF25例)纳入BCR/ABL1阴性CMPN组,124例继发性血小板增多及73例继发性红细胞增多症患者纳入对照组。抽取骨髓或静脉血提取基因组DNA及总RNA,进行JAK2基因外显子12至20,MPL基因外显子10以及CALR基因外显子3至9测序分析。结果:146例ET患者中,JAK2V617F突变86例(58.9%);JAK2 exon 12突变2例(1.4%);CALR突变41例(28.1%),其中Ⅰ型(c.1092_1143del)22例,Ⅱ型(c.1154_1155insTTGTC)11例,Ⅴ型(c.1091_1142del)1例,Ⅷ型(c.1104_1137del)1例,41型(c.1107_1137del)1例,42型(c.1125_1125del)1例,其他(c.1107_1115del,c.1111_1144 del,c.1101 A>C,c.1112_1117del)4例;MPL基因突变9例(6.2%)。JAK2、CALR、MPL基因突变均阴性的患者有8例(5.4%)。37例PV中检出JAK2以及CALR突变共35例(94.6%),其中JAK2V617F突变31例(83.8%),JAK2 exon 12突变2例(5.4%);CALR突变2例(5.4%),其中Ⅰ型1例,另1例为CALR c.1191_1193del。JAK2、CALR、MPL突变均阴性2例。25例MF中检出JAK2V617F突变19例(76%),CALR突变2例(8%);JAK2、CALR、MPL突变均阴性的患者有4例(16%)。124例继发性血小板增多的患者以及73例继发性红细胞增多的患者中,均未检测出JAK2、CALR或者MPL基因突变。结论:联合JAK2、CALR、MPL基因突变能覆盖大多数BCR/ABL1阴性的骨髓增殖性疾病患者,CALR突变在ET患者中检出率较高,因此CALR突变可作为JAK2、MPL突变阴性的ET的新诊断指标。

单核细胞增生性李斯特菌mpl基因的克隆及其原核表达载体的构建

研究对单增李斯特菌Mpl蛋白进行了基因克隆及表达载体的构建。通过PCR方法对标准株单增李斯特菌菌株mpl基因进行扩增,并将其克隆至pET32 a(+)上构建表达载体。经DNA序列测定分析,扩增出的基因与GenBank发表的单增李斯特菌mpl基因序列EF183452和EF183453的同源性为99.7%,氨基酸同源性为100%。试验成功地对单增李斯特菌株mpl基因进行扩增,并将其克隆至pET32 a(+)上,为下一步开展Mpl重组蛋白的应用研究奠定了基础。

MPL基因突变相关先天性无巨核细胞性血小板减少症临床诊治循证研究

目的 探索MPL基因突变相关先天性无巨核细胞性血小板减少症(congenital amegakaryocytic thrombocytopenia,CAMT)的临床特征。方法 参照罕见病研究常用询证方式,归纳典型病例,收集自2010年起所有国内外46篇文献中共计85例临床数据,统计分析CAMT的临床特征和诊治效果。结果 CAMT主要特征为:女性占比高于男性(1.67∶1),起病年龄较早(平均12.1个月),诊断年龄滞后(平均46个月);以皮肤、黏膜出血为主,但22例颅内出血,其中4例宫内颅内出血;均存在不同程度外周血小板计数下降:1.0×10^(9)/L~83.0×10^(9)/L;均存在MPL基因突变,其中纯合子52例,复合杂合子33例;存在显著全血细胞减少趋势;血浆血小板生成素(thrombopoietin,TPO)水平显著增高,均值1 505.8 pg/ml;非造血系统异常表现达52%。唯一根治疗法为异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT),TPO受体激动剂为缺乏allo-HSCT条件患儿的替代药物。结论 CAMT在新生儿期或婴儿早期发病,缺乏其他特殊表现,易被误诊,需谨慎对待鉴别要点。几乎所有CAMT均可能进展为三系血细胞减低,并呈现典型再生障碍性贫血表现。艾曲波帕及罗米司亭可作为allo-HSCT的替代治疗药物。

慢性粒单核细胞白血病伴JAK2、MPL基因突变1例

1临床资料 患者,男,44岁,因“头晕、视力模糊2 d”于2019年6月4日就诊大连医科大学附属第一医院神经内科。入院查体:意识清晰,神经系统检查及其他体格检查基本正常。既往体健,无吸烟史。超声提示双颈动脉斑块形成,头部磁共振成像显示右侧额叶、顶叶、颞叶和枕叶出现急性缺血性梗死(图1)。外周血白细胞数和单核细胞数均较高(WBC 12.21×109/L,MONO 3.6×109/L,Hb 136 g/L,PLT 343×109/L)。外周血涂片见原始粒细胞占13%,单核细胞17%,可见幼稚单核细胞;骨髓形态示骨髓增生活跃,粒细胞、红细胞和巨核细胞增生活跃,形态大致正常,其中原始粒细胞4%,单核细胞13%,以成熟单核细胞为主(图2)。给予神经保护治疗10 d,同时抗血小板聚集治疗(阿司匹林100 mg,每日1次),视力模糊消失,头晕缓解。后转到血液科,进一步行骨髓流式分析示:原始粒细胞比例增高,占9.23%,CD34聚集表达,CD38表达强度减弱。

单核细胞增多性李斯特菌mpl全基因克隆与序列分析

目的克隆单核细胞增多性李斯特菌mpl全基因并进行序列比较分析。方法分别从参考菌株CCTC-CAB97021和分离菌株XFL0605中PCR扩增mpl全基因,连接到T克隆载体转化到受体菌DH5α中,经菌落PCR和提取质粒酶切鉴定,分别获得阳性克隆转化子后测序,运用DNAStar软件对测定核苷酸及推导AA序列与GenBank中李斯特菌属的部分菌株进行分析。结果成功克隆了单核细胞增多性李斯特菌mpl全基因,所获得的mpl基因片段具有完整的ORF,均全长1533bp,编码510个氨基酸。对李斯特菌属mpl基因遗传性分析显示L.monocytogenes与L.seeligeri和L.ivanovii处于不同的分支,在L.monocytogenes种内分为两个群,表明mpl能够反应出这三种李斯特菌株的亲缘关系。结论单核细胞增多性李斯特菌mpl基因具有种的特异性。

骨髓增殖性肿瘤不典型MPL基因突变研究进展

MPL基因突变可见于1%~5%的原发性血小板增多症(ET)和原发性骨髓纤维化(PMF)患者中,其热点突变常发生于第10号外显子,以W515、S505位点突变为主。近年来,在三阴性骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者中发现多种不典型MPL突变,包括获得性突变和胚系突变,但进一步的研究证实,已发现这些不典型MPL突变在MPN致病能力方面存在差异,提示临床上检测到的不典型MPL突变并非均为MPN真正的驱动突变。文章就不典型MPL基因突变在MPN中的研究进展进行综述。

白细胞介素-13上调巨核细胞系-Dami细胞原癌基因c-mpl的研究

目的 :研究重组人白细胞介素 - 13(rhIL - 13)对巨核细胞系 -Dami细胞原癌基因c -mpl表达的影响。方法 :用RT -PCR法检测c-mplmRNA的表达。用配体结合实验检测膜蛋白c-mpl的表达。结果 :经 2 5 μg/LrhIL - 13处理过的实验组Dami细胞c -mplmRNA的表达比对照组高 2 4 8%。经 10 0 μg/LrhIL - 13处理过的实验组Dami细胞膜蛋白c -mpl的表达比对照组高 2 8 5 % (P <0 0 5 )。结论 :rhIL - 13增强了Dami细胞原癌基因c -mpl表达 ;膜蛋白c-mpl与促血小板生成素 (TPO)的结合功能正常 ;rhIL - 13促进Dami细胞增殖的部分机制可能是通过上调原癌基因c

JAK2和MPL驱动基因突变并存的原发性血小板增多症1例并文献复习

目的探讨JAK2和MPL驱动基因突变并存的原发性血小板增多症(ET)的特点及对长效干扰素治疗的反应,提高对驱动基因突变共存的骨髓增殖性肿瘤(MPN)的认识。方法回顾性分析2023年2月就诊于厦门大学附属中山医院的1例JAK2和MPL突变共存的ET患者临床资料,总结患者的临床特征、实验室检查指标、治疗经过,并复习相关文献。结果患者为79岁女性,既往有血小板增多及脑静脉血栓。入院完善血常规、骨髓象、基因突变等检查,诊断为ET(JAK2、MPL基因突变阳性)。患者对羟基脲治疗反应不明显,后给予长效干扰素治疗,血小板降至正常并维持稳定。结论在MPN中,JAK2和MPL基因突变可以共存,长效干扰素用于驱动基因突变共存的MPN可能有良好疗效。

原发性血小板增多症患者相关基因的表达及临床意义

目的探讨原发性血小板增多症(ET)患者JAK2、CALR和MPL基因突变率及与临床的相关性。方法回顾性分析2006年1月—2017年12月在新疆医科大学第一附属医院确诊的253例ET患者的临床资料,并进行统计学分析。结果ET患者中JAK2、CALR和MPL基因突变率分别为52.57%,7.51%和4.35%,差异有统计学意义(P<0.05);年龄、血栓形成、血小板、白细胞和血红蛋白在JAK2阳性与阴性组间差异有统计学意义(P<0.05);白细胞计数在CALR阳性与阴性组间差异有统计学意义(P<0.05);脾大、血小板、白细胞和血红蛋白在MPL阳性与阴性组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ET患者中JAK2基因突变率较高;不同基因突变与不同临床特征相关。

Twist-1通过MPL促进髓系白血病细胞增殖和耐药

目的:检测Twist-1与骨髓增生性白血病病毒癌基因(myeloproliferative leukemia virus oncogene,MPL)在髓系白血病患者和髓系造血系统恶性肿瘤细胞系中表达的相关性,并探讨Twist-1是否通过MPL对髓系白血病细胞增殖、耐药发挥促进作用。方法:选取中国医学科学院血液病医院2005年1月至2008年12月初次诊断为急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)、慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者的骨髓标本41例(其中AML 23例、CML 18例),用Real-time PCR检测AML、CML患者以及髓系造血系统恶性肿瘤细胞系中Twist-1和MPL mRNA的表达情况,并分析其相关性。构建MPL过表达载体,制备慢病毒并感染髓系白血病细胞系K562、U937,通过细胞计数实验、集落形成实验以及药物敏感实验评价其对白血病细胞增殖、集落形成能力以及耐药的影响,并进一步确定Twist-1是否通过MPL发挥白血病促进作用。结果:在U937和K562细胞中过表达Twist-1明显增加MPL蛋白水平(P<0.05),敲降Twist-1后MPL mRNA的表达水平明显下降(P<0.01);AML、CML患者骨髓单核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMMCs)中Twist-1 mRNA表达与MPL mRNA表达水平呈显著正相关(P<0.05)。过表达MPL使K562和U937细胞对化疗药物柔红霉素及伊马替尼的敏感性显著降低(P<0.01),且提高K562-MPL、U937-MPL的细胞增殖、集落形成数目(均P<0.01);干扰Twist-1并过表达MPL显著降低髓系白血病细胞增殖和集落形成(均P<0.01)。结论:Twist-1通过MPL促进AML、CML白血病细胞的增殖、存活和耐药。

基因突变与骨髓增殖性肿瘤关系的研究进展

骨髓增殖性肿瘤(MPN)是因为骨髓髓系细胞增殖导致外周血细胞计数增加的克隆性造血干细胞疾病。经典的Ph染色体阴性MPN由真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)及原发性骨髓纤维化(PMF)组成,研究发现PV、ET及PMF的发病机制与多种基因的突变密切相关,包括Janus激酶2(JAK2)、促血小板生成素受体的编码基因MPL及钙网蛋白CRT。因此,本文着重以JAK2、MPL及CRT的突变介绍基因突变与MPN的关系的最新研究进展。

BCR-ABL阴性的骨髓增殖性肿瘤的基因突变位点分析

BCR-ABL阴性的骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasms,MPN)是一组起源于多能造血干细胞克隆的恶性增殖性疾病。随着近年来基因检测技术的进一步发展,将真性红细胞增多症(polycythemia vera,PV)、原发性骨髓纤维化(primary myelofibrosis,PMF)、原发性血小板增多症(primary thrombocythemia,ET)列入经典的MPN。本文将通过分析特异性突变基因在BCR-ABL阴性的骨髓增殖性肿瘤(PV、ET、PMF)中的表达情况及其阳性表达与患者临床特点之间的相关性进行综述。

芦可替尼治疗高危骨髓纤维化3例的临床报告

目的:观察口服Janus Kinase(JAK) 1/JAK_2抑制剂芦可替尼(ruxolitinib,捷恪卫)治疗原发性骨髓纤维化(PMF)、特发性血小板增多症继发骨髓纤维化(post-ET MF)患者的疗效,总结治疗3例患者的临床体会。方法:回顾性分析2例PMF、1例post-ET MF患者的临床特点,采用芦可替尼治疗的经过及临床疗效。结果:1例32岁男性PMF患者,MF-3级,羟基脲联合α-干扰素治疗4周,血象下降,Hb 48 g/L,WBC 1. 48×10~9/L,PLT 41×10~9/L,芦可替尼以5 mg/d开始,逐渐增加剂量,1个月后血象开始改善,PLT 112×10~9/L,10个月Hb 109 g/L,WBC 4. 9×10~9/L,脾脏缩小至正常。1例67岁男性PMF患者,巨脾,芦可替尼10 mg/次,2次/d,2个月后脾脏明显缩小,但患者自行停药2个月,脾脏再肿胀,厚9. 3 cm,Hb 100 g/L,PLT 89×10~9/L,而WBC 42. 6×10~9/L,重新口服芦可替尼,4个月后,血象基本正常,脾脏缩小,厚5. 8 cm。1例55岁女性,ET病史20年,间断羟基脲治疗,但继发了MF-3级(post-ET MF),检测brc/ab L、JAK_2 V617F、CALR、MPL基因均阴性,用芦可替尼10 mg/次,2次/d,3周后血象急剧下降,直到停药13周后WBC、PLT开始恢复。结论:JAK抑制剂芦可替尼治疗JAK_2 V617F、MPL(exon10)基因阳性的PMF,可使肿大的脾脏明显缩小,改善生活质量。但应密切注意其不良反应,特别是极度减少的血细胞。

SOCS超甲基化在经典型慢性骨髓增殖性肿瘤发病中的作用研究

目的探讨细胞因子信号传导抑制蛋白(SOCS)基因超甲基化在经典型慢性骨髓增殖性肿瘤(MPN)发病机制中的作用。方法采用甲基化特异性PCR法检测220例MPN患者骨髓标本中SOCS1、SOCS3基因启动子区CpG岛甲基化发生情况,直接测序法检测MPN患者JAK2V617F、MPLW515L/K基因突变情况。应用粒细胞集落刺激因子化学诱导MPN细胞生长不同时间后,采用实时定量PCR和蛋白印迹法检测SOCS1、SOCS3 mRNA及其蛋白表达情况。同时,加入去甲基化试剂培养MPN细胞不同时间后,实时定量PCR法检测SOCS1、SOCS3 mRNA表达情况。结果 MPN患者中44例(20.0%)存在SOCS1基因超甲基化,90例(40.9%)存在SOCS3基因超甲基化,156例(70.9%)JAK2V617F突变阳性,3例JAK2V617F未突变的原发性血小板增多症患者检测到MPLW515突变(其中2例为MPLW515L,1例为MPLW515K),2例JAK2V617F未突变原发性骨髓纤维化患者检测到MPLW515L突变;SOCS1、SOCS3基因超甲基化组与未甲基化组相比,其SOCS1、SOCS3mRNA和蛋白表达量明显减少(P<0.05);JAK2V617突变组与无突变组相比,其SOCS1、SOCS3mRNA和蛋白表达量明显减少(P<0.05);SOCS1、SOCS3基因超甲基化组,加入去甲基化试剂后SOCS1、SOCS3 mRNA表达量明显升高(P<0.05)。结论 MPN患者中存在高频率的JAK2V617F基因突变和低频率的MPL基因突变以及SOCS基因启动子区CpG岛超甲基化;SOCS超甲基化和JAK2V617F突变导致SOCSmRNA和蛋白表达水平降低,异常激活JAK/STAT信号传导通路,引起细胞代谢失常而最终影响MPN的发生、发展;SOCS超甲基化是一种潜在的MPN诊断生物分子标志物及治疗靶标。

伴CALR基因突变原发性血小板增多症九例并文献复习

目的 探讨伴CALR基因突变原发性血小板增多症（ET）的临床特征、实验室特点及诊断.方法 回顾性分析2015年7月至2016年11月宁夏回族自治区人民医院确诊的9例伴CALR基因突变的ET病例,其中男性5例,女性4例,年龄31～70岁,中位年龄55岁.结果 9例患者血小板数均明显增高,白细胞数、血红蛋白水平均在正常范围,仅1例患者脾脏轻度大,8例患者有头晕症状.CALR基因3例为缺失突变,6例为插入突变.9例患者均给予阿司匹林联合干扰素治疗,血小板数均有不同程度的下降.结论 CALR基因在JAK2和MPL阴性的骨髓增殖性肿瘤患者中具有重要诊断价值,未来CALR基因靶向治疗值得期待.

白血病相关原癌基因在氢醌处理TK6细胞中的表达

目的探索氢醌(hydroquinone,HQ)致DNA整体低甲基化的后续结果。方法用磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L HQ染毒TK6细胞为处理组。应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测白血病相关原癌基因MPL、BRAF、ERBB2、MYB、MYC和RAF1的表达水平。结果与对照细胞相比,HQ处理细胞MPL和RAF1的mRNA表达量都随HQ剂量增加而上升,其中20μmol/L HQ对原癌基因表达的影响最为明显,分别上升了80%(P<0.05)和35%(P<0.05);MYB、MYC和ERBB2基因的mRNA表达量随HQ的剂量上升而下降。结论 MPL的转录活化很有可能与HQ导致的DNA整体低甲基化有关。