MRP1基因表达与耐药性癫痫的相关性研究

目的研究MRP1基因表达与耐药性癫痫的相关性。方法选取90例符合诊断标准的癫痫患者,其中药物敏感患者50例,癫痫耐药患者40例。采用实时荧光定量PCR方法检测癫痫患者外周血中MRP1基因mRNA的表达水平。结果耐药性癫痫组MRP1基因mRNA表达量(9.52±1.38)高于药物敏感组(1),差异有统计学意义(P<0.05)。结论癫痫患者外周血中MRP1的表达水平,可作为诊断耐药性癫痫的参考指标。

靶向mrp1基因shRNA表达载体构建

目的:构建靶向mrp1基因的shRNA表达载体。方法:根据mrp1基因序列设计并合成编码shRNA的DNA模板,将其定向克隆到psilencer2.1U6-neo质粒上,构建重组载体。经菌落PCR和DNA测序分析检测重组载体构建结果。结果:成功构建靶向mrp1基因shRNA表达载体。结论:为进一步研究mrp1基因在肺癌多药耐药中的作用以及探索肺癌的基因治疗奠定了基础。

靶向人多药耐药基因mrp1特异性小分子干扰RNA有效序列筛选

目的:筛选靶向人多药耐药相关蛋白基因(mrp1)特异性小分子干扰RNA(siRNA)的有效序列。方法:设计并体外转录合成靶向mrp1的4条siRNA(mrp1-si251,mrp1-si480,mrp1-si795,mrp1-si1016和空白对照si-阴性),转染转基因单因素肝癌多药耐药细胞Hep G2/mrp1。用RT-PCR检测mrp1 mRNA表达,流式细胞仪检测多药耐药相关蛋白表达、细胞内柔红霉素(DNR)蓄积,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞对阿霉素(ADM)的敏感性。结果:4条siRNA均能不同程度逆转Hep G2/mrp1细胞由mrp1介导的多药耐药。转染72h后,mrp1-si795组和mrp1-si1016组的mrp1 mRNA表达水平分别分别下调了(86.36±2.26)%和(85.54±1.04)%,较mrp1-si251组和mrp1-si480组明显下降(P<0.05);细胞内柔红霉素蓄积由多到少依次为mrp1-si795组最多,mrp1-si1016组次之,mrp1-si480组较少,mrp1-si251组最少(P<0.05);mrp1-si795组对ADR耐药的相对逆转率(86.36%)最高,mrp1-si1016组(85.54%)次之,较mrp1-si251组(60.93%)和mrp1-si480组(70.29%)有明显差异(P<0.05);mrp1-si1016组和mrp1-si795组多药耐药相关蛋白表达明显下调。结论:实验设计的靶向mrp1 mRNA的siRNA序列能够不同程度逆转多药耐药相关蛋白介导的人肝癌耐药细胞HepG 2/mrp1的多药耐药性,mrp1-si1016和mrp1-si795效果最好,mrp1-si480较差,mrp1-si251最差。mrp1-si1016和mrp1-si795可以作为进一步实验的靶序列。

腺病毒载体介导的发夹状RNA抑制三氧化二砷耐药的K562/AS2细胞MRP1基因表达的实验研究

目的 构建MRP1特异性发夹状RNA（shRNA）重组腺病毒载体,并研究其对耐三氧化二砷（ATO）的白血病K562/AS2细胞MRP1基因表达的抑制作用.方法 构建MRP1特异性shRNA重组腺病毒,并感染K562/AS2细胞;用荧光实时定量PCR法分析MRP1 mRNA的表达水平;流式细胞术检测MRP1蛋白表达;MTT法检测该细胞对ATO及依托泊苷（VP16）的细胞毒作用.结果 pAd-EGFP-U6.MRP1.shRNA重组腺病毒感染前后,K562/AS2细胞中MRP1 mRNA和蛋白表达水平分别为（34.70±0.28）、（4.19±0.03）（P〈0.05）和（26.40±0.16）、（10.85±0.37）（P〈0.05）;感染前后K562/AS2细胞对ATO及VP16耐药倍数分别为（11.4078±0.3183）、（1.6126±0.3015）和（5.9141±0.0149）、（1.7664±0.1038）,逆转倍数分别为（7.2409±1.3668）和（3.3555±0.1886）（P〈0.05）.结论 成功构建了pAd-EGFP-U6-MRP1-shRNA重组腺病毒载体,该载体感染K562/AS2细胞后可抑制细胞MRP1基因表达以及逆转该细胞对ATO和VP16的耐药.

非小细胞肺癌mdr-1和mrp的表达及其预后的研究

目的:探讨耐多药基因(mrd-1)和耐多药相关蛋白基因(mrp)在非小细胞肺癌、癌旁和淋巴结组织中的表达关系及其对患者预后的影响.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测了45例非小细胞肺癌、癌旁和125枚手术切除淋巴结组织的 mdr-1、mrp表达.结果:在肺癌组织中mdr-1、mrp的表达及两基因共表达的阳性率与癌旁组织比较有显著性差异(P<0.01);转移淋巴结(N1～2)的mdr-1、mrp阳性率也高于非转移淋巴结组织(N0)(P<0.01).随访发现,肺癌组织mdr-1和mrp阴性患者的术后1、2、3年生存率(89.5%,78.6%和50%)高于mdr-1和mrp阳性者(80.8%、68.8%和14.3%).结论:肺癌组织mdr-1、mrp的表达与相对应的淋巴结组织具有一致性,转移淋巴结组织的mdr-1、mrp基因表达可能与临床病理分期有关;mdr-1和mrp阴性者化疗效果好,对于阳性者,术后化疗不能提高远期生存率,而且预后不良.