p27mt基因对人大肠癌裸鼠移植瘤模型的影响

目的研究p27mt基因对大肠癌裸鼠移植瘤的生长抑制和抗转移作用及其机制。方法建立大肠癌裸鼠移植瘤模型,采用瘤体内直接注射法,测量瘤体体积,观察p27mt对移植瘤的生长抑制作用。分离瘤体,制作单细胞悬液,流式细胞术检测细胞周期,测定细胞凋亡。免疫组化检测瘤体组织中MMP-9的表达。结果Ad-p27mt组、Ad-LacZ组和对照组移植瘤平均体积分别为(1.94±0.67)cm3、(2.75±0.83)cm3和(3.01±0.76)cm3(P<0.05);增殖率分别为(37.34±1.45)%、(53.16±3.27)%和(54.48±2.43)%(P<0.05);凋亡率分别为(19.79±3.32)%,(6.38±4.91)%和(7.25±5.20)%(P<0.01);MMP-9的表达率为20%、75%和66.7%(P<0.01)。结论人突变p27mt基因通过阻滞移植瘤的增殖,促进移植瘤细胞的凋亡来抑制移植瘤的生长,通过降低移植瘤MMP-9的表达抑制移植瘤的转移。

p27mt基因对大肠癌Lovo细胞粘附作用的影响

目的研究人突变p27基因(p27mt)对大肠癌Lovo细胞粘附作用的影响,探讨p27mt基因在大肠癌Lovo细胞转移中的作用机制。方法用Ad-p27mt转染大肠癌Lovo细胞,采用Western blot检测p27mt在Lovo中的表达。分别采用细胞计数法,MTT法检测p27mt基因对大肠癌Lovo细胞同质粘附、异质粘附作用的影响。结果Ad-p27mt转染Lovo细胞后,同质粘附作用高于Ad-LacZ组和对照组,异质粘附作用低于Ad-LacZ组和对照组。结论上调p27mt基因的表达,可使大肠癌细胞间的同质粘附作用增强,异质粘附作用降低,因此,p27mt基因具有抑制大肠癌细胞转移的功能,其机制是改变了细胞基质及细胞间的粘附能力。

多瘤病毒MT基因真核表达载体的构建

目的 :构建携带多瘤病毒MT癌基因的真核细胞表达载体。方法 :从野生型多瘤病毒上取其nt46 32至nt15 6 0片段克隆到pUC19上 ,再将该片段定点插入 pEGFP1的HindⅢ和EcoRI位点间 ,构建携带多瘤病毒MT癌基因的真核表达载体 pPyMT GFP。经线性化 ,将重组体导入鼠皮肤成纤维细胞中 ,G418选择培养 ,得到抗性细胞克隆。结果 :构建的pPyMT GFP质粒在鼠成纤维细胞中有稳定表达。 结论 :来源于野生型多瘤病毒的PyMT基因在哺乳动物细胞中有稳定表达 ,其真核表达载体 pPyMT

蚯蚓MT基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

为了研究蚯蚓金属硫蛋白的生物学功能,采用RT-PCR方法从镉诱导后的赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)中克隆到蚯蚓金属硫蛋白基因cDNA。将其克隆入原核表达载体pET-DsbA中,然后转化至大肠杆菌表达受体菌BL21(DE3)中进行表达。产物经SDS-PAGE进行分析,可见约32.4 kD的融合蛋白。Zn2+抗性测定表明含pET-DsbA-efMT的重组菌较含空载体pET-DsbA的对照菌重金属抗性有所提高。

蚯蚓MT基因植物表达载体的构建及烟草转化

为了提高植物对重金属的耐受力和富集能力,从而减少重金属对土壤的污染,本研究将克隆的赤子爱胜蚓(Eiseniafoetia)MT基因,装入植物表达载体pPZP111,构建了植物表达载体pPZP-efMT。然后用三亲法将其导入根瘤农杆菌EHA105中,通过叶盘法转化烟草。经PCR检测,efMT基因已整合到烟草基因组中,为进一步验证转基因烟草的抗重金属能力奠定了基础。

腺病毒介导p27mt基因转移诱导恶性黑素瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨突变型p27基因(p27mutant type gene;p27mt)对恶性黑素瘤A375细胞凋亡的调节作用。方法:利用重组腺病毒Ad-p27mt转染培养的人恶性黑素瘤A375细胞,用3H-TdR掺入法检测细胞增殖;流式细胞术、DNA片段分析法、TUNEL法检测细胞凋亡。结果:重组腺病毒Ad-p27mt在MOI≥50时,可达到100%的转导效率。Ad-p27mt转染恶性黑素瘤细胞A375后,3H-TdR掺入法检测发现细胞增殖抑制;流式细胞术检测在G1期前出现亚二倍体凋亡峰;细胞DNA抽提电泳后发现凋亡特征性梯带。TUNEL法检测凋亡指数分别为48.5±3.6(Ad-p27mt组)及4.2±0.8(空白对照组),差异有显著性(P<0.01)。结论:重组腺病毒介导的p27mt基因转移可诱导恶性黑素瘤A375细胞在Gl期阻滞并导致细胞凋亡。

养殖水域Cu^(2+)胁迫对虹鳟MT2基因表达模式的影响

为了探究水体中铜离子胁迫对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)MT2基因表达模式的影响,开发Metallothioneins作为检测水域生态中重金属铜污染的分子标志,该研究利用TA克隆法获得了虹鳟MT2基因的CDS序列,检测了MT2基因在虹鳟不同组织中的表达模式,以及Cu^(2+)胁迫(Cu^(2+)浓度75、150和300μg/L)后1、2、3和4 d和胁迫恢复1、2 d时间点的MT2基因表达动态。结果表明,虹鳟MT2基因CDS区长186 bp,编码62个氨基酸,具有典型的半胱氨酸(Cys)-X(1~3个)-半胱氨酸结构,属不稳定亲水性蛋白。虹鳟MT2基因序列与大西洋鲑的同源性最高且在肝脏中表达量最高,其次是脑和肠道。胁迫试验结果显示,MT2基因在肝脏和鳃中呈现先升高后降低的趋势,在头肾、脾脏和脑中呈现逐渐升高的趋势,且呈现一定的剂量依赖性,肠道MT2基因在胁迫2、3和4 d被显著抑制。胁迫恢复后,处理组肝脏、头肾、鳃、脑MT2基因表达量仍显著升高。综上,虹鳟MT2基因能在不同组织中被Cu^(2+)诱导表达,推测MT2基因在虹鳟抗重金属毒性中可能发挥着重要作用,且MT2基因表达量与铜离子的浓度相关,可以作为分子生物标志检测水域生态中的重金属铜污染。

益气解毒方对TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响

背景:益气解毒中药复方在体外能通过下调端粒酶的活性抑制细胞生长和诱导细胞凋亡,还可能通过抑制细胞内重要的核转录因子、细胞分裂增殖、细胞周期、DNA修复和诱导细胞凋亡、促进坏死等信号通路,从而抑制细胞增殖和诱导细胞死亡。目的:实验拟观察益气解毒方对TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖及凋亡相关基因bax、bcl-2、增殖细胞核抗原和p53mt基因表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-01/2007-12在湖南中医药大学中西医结合学院基础研究室和中医五官重点学科实验室完成。材料:G4代8月龄TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因阳性小鼠和阴性小鼠各24只,体质量(25.4±2.3)kg,用于制备鼻咽和鼻腔癌前病变模型;益气解毒颗粒方药液为自制。方法:48只小鼠随机分为4组,转基因阳性中药组和转基因阴性中药组小鼠灌胃益气解毒颗粒方药液,给药剂量为12.91g/(kg·d);转基因阳性生理盐水组和转基因阴性生理盐水组小鼠灌等体积生理盐水。主要观察指标:苏木精-伊红染色观察鼻腔和鼻咽黏膜病理组织学变化,免疫组织化学染色法检测其bax、bcl-2、增殖细胞核抗原和p53mt基因表达水平。结果:纳入转基因阳性小鼠和阴性小鼠各24只,转基因阳性生理盐水组和转基因阴性生理盐水组于实验结束前各死亡1只,转基因阴性中药组死亡1只,转基因阳性中药组死亡2只小鼠,共43只小鼠进入结果分析。①转基因阴性生理盐水组、转基因阴性中药组小鼠的鼻腔/鼻咽黏膜组织均无明显病变;转基因阳性中药组有1只小鼠表现中度非典型性增生,转基因阳性生理盐水组有10只小鼠鼻腔和/或鼻咽黏膜上皮细胞呈现中度或中度以上非典型增生或灶性鳞状化生。转基因阴性生理盐水组、转基因阴性中药组、转基因阳性中药组和转基因阳性生理盐水组小鼠鼻腔或鼻咽黏膜上皮癌前病变率分别为0、0、10%和90.9%,差异具有显著性意义(P<0.01)。②与转基因阳性生理盐水组相比,其他各组小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞中p53mt、bcl-2和增殖细胞核抗原表达水平均下降(P<0.01),bax表达水平显著增高,bcl-2/bax比值降低(P<0.01)。结论:益气解毒方中药可有效抑制或逆转TgN(p53mt-LMP1)/HT阳性小鼠鼻腔或鼻咽黏膜上皮的癌前病变表型,其作用机制之一可能通过下调p53mt基因和增殖细胞核抗原的表达,降低bcl-2/bax比值,使细胞增殖和凋亡速度达到平衡,进而促使鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞正常增长。

抑癌基因Rb、MTS_1的表达与膀胱癌的预后

目的 :研究抑癌基因 Rb、MTS1 的表达与膀胱癌的预后。方法 :用 S- P免疫组化法同步检测 6 0例膀胱移行细胞癌抑癌基因 Rb、MTS1的表达 ,观察其与预后的关系。结果 :PRb、p16表达阳性组生存率明显优于阴性组。结论 :PRb与 p16均具有膀胱癌的预后价值 ,而同步检测两者的预后价值优于单一检测。

肿瘤转移相关基因mts1及nm23-H1在肺癌中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的 探讨转移相关基因mts1及nm2 3 H1在人肺癌中的表达及其与淋巴结转移的关系。方法 对手术切除后新鲜的2 6例肺鳞癌和13例肺腺癌组织标本采用地高辛标记的mts1及nm2 3 H1cDNA探针进行原位杂交。结果 2 6例鳞癌中,淋巴结转移组11例,mts1mRNA阳性表达9例,阳性率82 % ,nm2 3 H1mRNA阳性表达8例,阳性率73 % ;无淋巴结转移组15例,mts1mRNA阳性表达4例,阳性率2 7% ,nm2 3 H1mRNA阳性表达10例,阳性率67%。13例肺腺癌中,淋巴结转移组5例,mts1mRNA阳性表达4例,阳性率80 % ,nm2 3 H1mRNA阳性表达4例,阳性率80 % ;无淋巴结转移组8例,mts1mRNA阳性3例,阳性率3 8% ,nm2 3 H1mRNA阳性表达6例,阳性率75 %。结论 mts1mRNA表达在肺鳞癌的淋巴结转移与非转移组之间相差显著,在肺腺癌的淋巴结转移组与非转移组之间差异性无统计学意义;nm2 3 H1mRNA表达在肺鳞癌、腺癌的淋巴结转移组与非转移组之间差异性不显著。

MT1M基因对肝癌细胞株Hep-G_2细胞周期及信号通路的影响

目的 :研究MT1M基因对肝癌细胞Hep G2 细胞周期的影响及可能参与的信号通路。 方法 :构建表达MT1M基因的真核质粒 ,转染Hep G2 肝癌细胞株 ,流式细胞术检测该基因对细胞周期的影响 ,通过双荧光素酶报告系统检测该基因对细胞信号通路的影响。 结果 :MT1M基因可诱导Hep G2 细胞停滞在G2 期的细胞增加 ,同时能促进NF κB的转录活化。 结论 :MT1M基因可以影响Hep G2 细胞的细胞周期并活化NF κB的信号通路。

肺癌中MTS1/p16和p53基因产物的表达与细胞增殖的关系

目的：研究肺癌中ＭＴＳ１／ｐ１６和ｐ５３基因产物的表达与细胞增殖的关系。方法：应用Ｓ－Ｐ免疫组织化学方法研究６２例肺癌组织中ｐ１６蛋白和ｐ５３蛋白的表达情况，并进行增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）检测，计算细胞增殖指数（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｄｅｘ，ＰＩ）。结果：６２例肺癌组织中ｐ１６蛋白和ｐ５３蛋白阳性率分别为５８．１％和５９．７％。腺癌ｐ１６蛋白的阳性率明显高于小细胞癌（Ｐ＜０．０５）；淋巴结转移阳性组ｐ１６蛋白的表达显著低于阴性组（Ｐ＜０．０５）；ＰＩ分级为Ⅱ级的ｐ１６蛋白表达显著高于Ⅳ级（Ｐ＜０．０５）。不同组织类型肺癌中ｐ５３蛋白的表达未见明显差异，淋巴结转移阳性组ｐ５３蛋白的表达高于阴性组（Ｐ＜０．０１）；不同ＰＩ分级中ｐ５３蛋白的表达，Ⅳ级明显高于Ⅰ级（Ｐ＜０．０５）和Ⅱ级（Ｐ＜０．０５），Ⅲ级明显高于Ⅰ级（Ｐ＜０．０５）和Ⅱ级（Ｐ＜０．０１）。ｐ１６蛋白低表达和ｐ５３蛋白过表达之间未见明显相关。结论：ｐ１６蛋白低表达和ｐ５３蛋白过表达均有促进肺癌细胞增殖的作用，ｐ１６蛋白的表达与肺癌的细胞分化有关，ｐ５３蛋白过表达对肺癌细胞的转移起重要作用。抑癌基因ｐ５３对ＭＴＳ１／ｐ１６基因无明显调控作?

胃癌中MTS1基因异常甲基化的研究

【目的】探讨多肿瘤抑制基因 (multipletumorsuppressorgene 1,MTS1) 5′端CpG岛异常甲基化与原发性胃癌发病机制之间的关系。【方法】PCR 甲基化检测法研究 31例胃癌标本和 19例正常胃组织中MTS1基因 5′端CpG岛异常甲基化情况。【结果】有 35 5 % (11/ 31)的胃癌标本和 5 3 % (1/ 19)正常胃组织出现MTS1基因 5′端CpG岛异常甲基化 ,两者之间有显著性差异 (P <0 0 5 )。【结论】MTS1基因 5′端CpG岛异常甲基化是其在原发性胃癌中的主要灭活机制 ,与胃癌的发生发展密切相关。

逆转录病毒介导的MTS1基因在人膀胱癌细胞中的表达

逆转录病毒介导的ＭＴＳ１基因在人膀胱癌细胞中的表达袁建林１，惠宏襄２，黄斌３，柴玉波２，于茂生１，王成济２（１第四军医大学西京医院泌尿外科，西安７１００３３，２第四军医大学分子生物学和生物化学教研室３西安空军电讯工程学院医院）关键词逆转录病毒载体ＭＴ...

非小细胞肺癌中p16/MTS1基因失活及其意义

目的 :研究抑癌基因p16 /MTS1基因失活与肺癌发生发展的关系。方法 :采用双重PCR和免疫组化技术分析 48例原发性非小细胞肺癌中p16基因存在状态。结果 :2 5例p16蛋白表达阴性 (5 2 1% ) ,其中 14例p16基因第二外显子缺失。有淋巴结转移者和无淋巴结转移者的P16蛋白表达阴性率有显著性差异。p16基因缺失率亦如此。肺鳞癌中p16蛋白表达阴性率显著高于腺癌。结论 :p16基因存在状态与非小细胞肺癌的病理组织学分型有关 。

新疆维吾尔族MT1XT20基因与微卫星不稳定结直肠癌相关性研究

检测临床手术切除43例新疆维吾尔族结直肠癌患者癌组织及相应癌旁正常组织中微卫星不稳定(MSI)状态,探讨MT1XT20基因与新疆维吾尔族MSI结直肠癌发生的关系。通过聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术对新疆维吾尔族MT1XT20基因与MSI结直肠癌检测及分析。在43例新疆维吾尔族患者中24例癌组织发生微卫星改变,总检出率为55.81%;8例发生一个微卫星位点改变,两个以上位点改变的有16例,癌旁正常组织中未检测到微卫星改变。在MT1XT20位点上存在较高频率的微卫星改变,提示可能存在MT1XT20基因与新疆维吾尔族MSI结直肠癌发病密切相关,为MSI结直肠癌的早期诊断提供了有意义的检测指标。

脑胶质瘤组织中P16MTS1基因缺失研究

目的 探讨人脑胶质瘤组织中多重肿瘤抑制基因 (P16 MTS1)异常。方法 用PCR方法扩增P16基因序列。结果 5 0例脑胶质瘤患者组织中P16基因纯合性缺失 16例 ,缺失率为 32 % ,以胶质瘤Ⅲ～Ⅳ级缺失率较高 (5 7.8% )。结论 P16

子宫内膜癌前病变中K-ras与MTS1/p16基因的表达及意义

目的 探讨K ras激活与MTS1/ p16基因突变 /缺失在子宫内膜癌中的发生发展关系。 方法 对子宫内膜癌及癌前病变组织K ras与MTS1/p16蛋白的免疫组化测定并用PCR技术对MTS1/ p16基因在子宫内膜癌中的纯合性缺失进行检测。结果 K ras、p16蛋白广泛存在于子宫内膜癌和癌前病变组织中 ,癌前病变K ras表达为 11.9% ,癌组为 6 2 .96 % (P <0 .0 5 ) ,而p16表达分别为 76 .5 9%与5 1.85 %。 13例 p16蛋白表达阴性子宫内膜癌PCR扩增 ,7例显示外显子 1缺失。K ras表达与细胞恶性程度呈正相关 ,p16表达则呈负相关。 结论 (1)K ras基因激活与MTS1/ p16基因突变 /缺失导致细胞周期增殖失控 ,是内膜癌发生发展的一个重要环节 ;(2 )子宫内膜癌中p16基因外显子 1纯合子缺失可能是p16蛋白表达降低的机制之一 ;(3)动态观测内膜增生组织中的p2 1ras表达阳性者 。

p16/MTS1抑癌基因与肿瘤

当前,肿瘤是危害人类生命的主要疾病之一。随着科学技术的进步,已从肿瘤遗传学、分子生物学水平来研究肿瘤的发生与发展。癌基因和抑癌基因的研究已成为热点,目前已发现100多种癌基因和12种抑癌基因。1994年,两个美国实验室(Kamb和Larson)几乎同时发表了有关p16基因的研究工作,报道一种新型的抑癌基因p16基因,对于分析探讨肿瘤增生具有重要意义。