散发性结直肠癌微卫星不稳定性与Mt-p53及bcl-2蛋白表达的研究

目的 探讨散发性结直肠癌微卫星不稳定性民Mt-p53及bcl-2蛋白表达的关系。方法 应用聚合酶链式反应（PCR）技术检测了48例散发性结白肠癌中四个位点的微卫星不稳定性,同时应用免疫组织化学技术对癌基因bcl-2、抑癌基因Mt-p53蛋白的表达。结果 ①48例散发性结直肠癌中四个微卫星位点D2S123、BAT-26、D17S261、D16S799的微卫垦不稳定性检出率分别为12.5％、18.8％、10.4％、8.3％;②Mt-p53蛋白和bcl-2蛋白阳性个分别为66.7％和77.1％;③微卫星不稳定性与mt-p53和bcl-2蛋白的表达均相差个显著（P>0.05）。结论 微卫星不稳定性引起散发性结直肠癌的RER途径是不同于由抑癌基因p53失活及癌基因bcl-2的激活引起的LOH途径的新致癌机制。

非小细胞肺癌组织中bcl-2和mt-p53蛋白表达与血管生成的关系及其意义

目的:探讨非小细胞肺癌组织(NSCLC)中bcl-2及mt-p53蛋白表达与血管生成的关系。方法:采用免疫组化s-p法检测60例NSCLC标本中bcl-2、mt-p53蛋白表达,以血管内皮细胞表面抗原CD34单抗标记测定MVD。结果:在NSCLC中bcl-2阳性率31.67%,bcl-2阳性率与分化程度有关(P<0.05),mt-p53表达阳性率为48.33%;MVD以及mt-p53表达与NSCLC的淋巴转移(P<0.05)有关,MVD低表达者术后生存期明显长于高表达组(P<0.01);bcl-2阳性组病人中mt-p53阳性率明显低于bcl-2阴性组(P<0.05),bcl-2阳性组MVD明显低于bcl-2表达阴性组(P<0.05),相反,mt-p53阳性组MVD高于阴性组(P<0.01);在NSCLC中,在bcl-2阴性病人中mt-p53(+)组MVD(21.39±6.35)与mt-p53(-)组之间的MVD(15.91±5.68)存在显著性差异(P<0.01),但在bcl-2阳性病人中二组之间无显著差异(P>0.05)。结论:NSCLCbcl-2基因高表达可能与肿瘤血管生成的抑制有关,mt-p53基因则可能通过下调bcl-2促进肿瘤血管生成。

散发性微卫星不稳定性结直肠癌患者Mt-p53、bcl-2、hMLH1和hMSH2蛋白表达及意义

目的探讨散发性微卫星不稳定性结直肠癌患者突变型P53基因(Mt-p53)、B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、人类错配修复基因1(hMLH1)和人类错配修复基因2(hMSH2)蛋白表达及临床意义。方法选取2017年10月至2018年11月间山东大学齐鲁医院收治的149例经手术切除的散发性结直肠癌(SRC)标本作为肠癌组,另收集距癌组织边缘10cm处的健康肠组织标本149例为健康组。采用PCR仪及遗传分析仪对肠癌组标本进行微卫星不稳定(MSI)检测,采用免疫组化检测试剂盒检测两组标本Mt-p53、bcl-2、hMLH1和hMSH2蛋白表达情况。结果 149例SRC标本中,位点D2S123 MSI阳性率为12. 1%,位点BAT26MSI阳性率为18. 1%,位点D17S261 MSI阳性率为10. 1%,位点D17S799 MSI阳性率为8. 1%。其中MSI-L为18例,MSI-H为22例,MSI总阳性率为26. 8%。149例肠癌组中Mt-p53蛋白表达阳性率为67. 1%(100例),bcl-2蛋白表达阳性率为77. 9%(116例),hMLH1蛋白表达阳性率为73. 2%(109例),hMSH2蛋白表达阳性率为71. 1%(106例)。149例健康组中Mt-p53、bcl-2、hMLH1和hMSH2蛋白表达阳性率均为100. 0%(149例)。两组标本各蛋白表达情况比较,差异均有统计学意义(均P <0. 01)。MSI阳性标本及阴性标本中Mt-p53、bcl-2和hMSH2蛋白表达阳性率比较,差异均无统计学意义(均P> 0. 05)。MSI阳性标本及阴性标本中hMLH1蛋白表达阳性率比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 SRC的发生不仅与Mt-p53的失活和bcl-2的激活有关,还与错配修复(MMR)基因突变引发的MSI相关,是SRC新的重要发生机制。MSI与Mt-p53、bcl-2和hMSH2蛋白表达情况相关性不大,但部分MSI与hMLH1蛋白表达显著相关,其余MSI可能涉及其他MMR基因。

MDM2/MDMX双靶点抑制蛋白在p53突变型乳腺癌中的作用及机制

目的:明确MDM2/MDMX双靶点抑制蛋白在p53突变型乳腺癌中的抗肿瘤作用及可能机制。方法:采用MTT比色法检测细胞增殖、流式细胞仪测定细胞周期和Annexin V/FITC-PI双染法检测细胞凋亡,明确MDM2/MDMX抑制蛋白对mt-p53乳腺癌的抗肿瘤活性。应用Western Blot检测MDM2、MDMX、p53、p21、PUMA和bax蛋白在mt-p53乳腺癌细胞中的表达水平,初步探讨抑制蛋白抗mt-p53乳腺癌的可能机制。结果:MDM2/MDMX抑制蛋白抑制mt-p53乳腺癌细胞24 h、48 h细胞增殖显著优于Nutlin-3α(P均<0.05)。MDM2/MDMX抑制蛋白干预mt-p53乳腺癌细胞株24 h和48 h后G 0/G 1期的细胞比例明显高于Nutlin-3α(P<0.05)。抑制蛋白诱导mt-p53乳腺癌细胞24 h和48 h凋亡比例为(15.97±1.48)%和(17.80±2.21)%(MDA-MB-231细胞);(11.09±2.45)%和(10.44±2.90)%(BT-474细胞)。mt-p53乳腺癌细胞中,抑制蛋白干预组MDM2和MDMX蛋白表达明显降低,p53蛋白则未见明显变化;PUMA、p21和bax蛋白表达则显著增加。结论:MDM2/MDMX抑制蛋白可抑制mt-p53乳腺癌细胞增殖,阻滞周期于G0/G1期和诱导细胞凋亡。抑制蛋白可抑制MDM2和MDMX蛋白的表达,但未能激活p53蛋白表达,以p53非依赖途径上调p21,bax和PUMA蛋白表达发挥抗乳腺癌活性。

变异型P-53在青年与老年大肠癌组织中的差异表达

目的探索青年及老年大肠癌组织中变异型P-53(Mt-p53)的表达是否存在差异及其与临床病理参数之间的关系。方法采用免疫组化方法检测20例青年、老年大肠癌组织中Mt-p53的表达、细胞定位情况,比较两组织中Mt-p53的表达差异。采用RT-PCR技术检测7例青年大肠癌及11例老年大肠癌中Mt-p53 mRNA的相对表达量,比较两组之间是否存在差异。结果 Mt-p53在大肠癌组织中的表达定位于细胞核,其在青年大肠癌组织中的表达水平高于老年大肠癌组(P<0.05)。Mt-p53在大肠癌的表达与分化程度有关,与其他病理学参数之间无关(P>0.05)。Mt-p53 mRNA在青年大肠癌组织中的表达量明显高于老年大肠癌组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论青年大肠癌中Mt-p53的表达明显高于老年大肠癌,提示其可能是调控青年大肠癌与老年大肠癌不同机制的重要蛋白。

长非编码RNA MT1JP调控p53抑制类风湿关节炎炎症反应作用及机制研究

目的:探讨长非编码RNA MT1JP调控p53抑制类风湿关节炎炎症反应的作用及机制。方法:qRT-PCR法检测类风湿关节炎患者和骨关节置换患者滑膜组织中长非编码RNA MT1JP相对表达;小分子干扰RNA干扰MT1JP研究其作用;ELISA检测炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8水平;Western blot检测p53蛋白水平。结果:类风湿关节炎患者滑膜组织MT1JP水平明显低于骨关节置换患者,且类风湿关节炎患者滑膜组织MT1JP水平与血清中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8水平呈负相关;干扰MT1JP后明显促进MH7A滑膜细胞的IL-1β、IL-6、IL-8分泌和抑制p53表达。结论:类风湿关节炎患者滑膜组织MT1JP水平下调,通过调控p53进而促进炎症因子的分泌和炎症反应。

藤莓汤改善CIA模型大鼠关节滑膜免疫炎性损伤的机制研究

目的通过观察藤莓汤(Tengmei Decoction,TMD)对胶原诱导性(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜中突变型P53(Mutant P53,mt-p53)、增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL),白细胞介素2(Lnterleukin 2,IL-2)表达的影响,探讨藤莓汤抑制类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜免疫炎性损伤的分子机制。方法建立CIA大鼠模型,中药给药组分为TMD高剂量组、TMD低剂量组,分别以TMD生药量31.8、15.9 g/(kg·d-1)灌胃;模型组、阳性对照组分别予去离子水10 mL/(kg·d-1)、来氟米特1.87mg/(kg-1·d-1)灌胃;另设正常对照组,予去离子水10 mL/(kg·d-1),各组连续干预12周。干预结束后检测mtP53、APRIL、IL-2蛋白及mRNA表达。结果与正常组比较,模型组APRIL、mt-P53、IL-2 mRNA转录水平上调(P<0.01);mt-P53、IL-2蛋白表达上调(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,各治疗组APRIL mRNA转录水平,mt-P53、IL-2mRNA转录水平及蛋白表达水平下调,(P<0.01,P<0.05);结论TMD能够降低大鼠关节滑膜、血清中mt-P53、IL-2、APRIL表达水平,改善关节炎模型大鼠关节滑膜免疫炎性损伤,可能与TMD抑制关节滑膜过度增殖,降低炎症因子的表达有关。

融合蛋白TAT-p53-MTS的促细胞凋亡作用

本研究首先构建了融合蛋白TAT-p53-MTS的原核表达质粒pET-22b(+)-TATp53-MTS,将表达纯化的融合蛋白与p53缺陷型人肺癌细胞NCI-H1299孵育,通过Western blot和免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,co-IP)检测融合蛋白的细胞穿膜以及与Bcl-2蛋白的相互作用,并通过流式细胞术检测融合蛋白对NCI-H1299细胞的促凋亡作用.结果显示,融合TAT和MTS的p53重组蛋白具有更强的细胞穿膜及线粒体定位能力;并且,融合蛋白能够通过与Bcl-2蛋白的结合显著诱导NCI-H1299细胞的凋亡.

虎杖改善胶原诱导性关节炎大鼠关节滑膜免疫炎性损伤的机制

目的:通过观察虎杖对胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠滑膜组织、血清中抑癌基因p53突变型(mt-p53)、增殖诱导配体(APRIL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,探讨虎杖抑制类风湿关节炎滑膜免疫炎性损伤的作用机制。方法:采用大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原方法制备CIA模型,将成模大鼠按随机数字表法分为模型组、阳性对照组、虎杖2倍剂量组、虎杖常量组,另设正常对照组,每组6只。正常对照组与模型组予去离子水10mL·kg^-1·d^-1灌胃,阳性对照组予来氟米特1.87mg·kg^-1·d^-1灌胃,虎杖2倍剂量组、虎杖常量组分别以虎杖颗粒8、4g·kg^-1·d^-1灌胃,连续干预12周。观察各组大鼠偶数周体质量、AI评分及各组大鼠滑膜组织中APRIL、mt-p53、TNF-αmRNA,mt-p53、TNF-α蛋白及血清中TNF-α蛋白表达情况。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量及AI评分有明显变化(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠体质量及AI评分有明显改善。与正常对照组比较,模型组APRIL、mt-P53、TNF-αmRNA转录水平显著上调(P<0.01),mtP53、TNF-α蛋白表达水平显著上调(P<0.01);与模型组比较,各治疗组APRIL、mt-p53、TNF-αmRNA转录水平显著下调(P<0.01);mt-p53、TNF-α蛋白表达水平显著下调(P<0.01)。结论:虎杖改善CIA大鼠关节滑膜免疫炎性损伤的机制可能与抑制滑膜细胞增殖相关。