苜蓿源miR168b跨界调控奶牛体内乳脂相关靶基因的筛选

筛选出高乳脂奶牛和低乳脂奶牛血液和牛奶中显著差异表达的苜蓿来源miRNAs及其在奶牛体内的潜在靶基因,可为进一步探究苜蓿源miRNAs(mtr-miRNAs)在基因水平调节牛奶乳脂率奠定基础。试验首先对生产4胎,日粮水平一致的荷斯坦奶牛牛奶进行了奶牛生产性能(dairy herd improvement,DHI)检测,在高乳脂和低乳脂奶牛中各选3头作为重复。运用RT-qPCR对奶牛血液和牛奶中的苜蓿源miRNAs进行定量,筛选出差异表达miRNAs后对其进行靶基因预测和分析,并根据miRNA-mRNA结合位点和定量结果筛选出与乳脂代谢相关的靶基因。结果如下:1)DHI检测筛选出了3头高乳脂奶牛和3头低乳脂奶牛,高乳脂奶牛牛奶中脂肪含量>4.2%,低乳脂奶牛牛奶中脂肪含量<3.5%;2)苜蓿源novel-miR54、miR156f、miR166a、miR168b和miR168c-3p在奶牛血液和牛奶中均能检测到,其中mtr-miR168b在高乳脂奶牛血液中的表达量极显著低于在低乳脂奶牛中的表达量(P<0.01),在高乳脂奶牛牛奶中的表达量显著低于在低乳脂奶牛中的表达量(P<0.05);3)mtr-miR168b在乳腺上皮细胞中高表达抑制了其中脂代谢标志基因PPARγ,SCD1,CEBP/β和SREBP1的表达量;4)mtr-miR168b预测靶基因分别有1834和296个与GO和KEGG数据库比对成功,靶基因主要与N-聚糖生物合成(3.72%)、cGMP-PKG信号通路(2.37%)和血管平滑肌收缩(2.37%)密切相关,甘油磷脂代谢(1.69%)通路也被显著富集;5)筛选出CPT1A和STARD7两个与脂代谢密切相关的基因,并通过双荧光素酶报告确认了miR-168b和CPT1A与STARD7的靶向关系。由此可见,mtr-miR168b可抑制乳腺上皮细胞中的成脂标志基因的表达,试验为后续验证苜蓿源miRNAs调控奶牛乳脂率提供了可进一步验证的靶基因。

苜蓿源miR168b通过靶向肉碱棕榈酰转移酶1A对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡和脂滴积累的调控研究

本试验旨在探究苜蓿源miRNAs(mtr-miRNAs)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)增殖和凋亡的影响。试验首先通过CCK8、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、流式细胞术、基因和蛋白定量等方法检测苜蓿源-miR168b(mtr-miR168b)对BMECs增殖、凋亡和周期的影响。然后,敲低mtr-miR168b靶基因肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)表达后,检测了BMECs的活力和凋亡。通过诱导转染后细胞,用氟硼二吡咯(Bodipy)染色和油红O染色检测mtr-miR168b和CPT1A基因干扰对BMECs脂滴合成的影响。结果表明:1)mtr-miR168b高表达极显著降低了BMECs活力(P<0.01)。2)mtr-miR168b高表达极显著抑制了BMECs增殖(P<0.01),延长了细胞G1~S期进程,极显著促进了细胞凋亡(P<0.01)。3)mtr-miR168b在BMECs中高表达极显著抑制了细胞增殖基因周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白D2(Cyclin D2)的基因的表达水平(P<0.01),极显著增加了凋亡标志基因Bcl2关联X蛋白(BAX)基因的表达水平(P<0.01),极显著抑制了PCNA蛋白表达水平(P<0.01),极显著增加了BAX蛋白表达水平(P<0.01),并且mtr-miR168b显著抑制了蛋白激酶B(AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因的表达水平(P<0.05)。4)mtr-miR168b高表达抑制了BMECs中脂滴的积累。5)干扰mtr-miR168b的靶基因CPT1A,对BMECs脂滴积累也有抑制作用。综上所述,mtr-miR168b可通过抑制BMECs增殖,促进细胞凋亡,并通过靶向CPT1A基因抑制BMECs中脂滴的生成。试验结果可为mtr-miRNAs调控牛奶乳脂合成提供分子层面的技术支撑。

miR164c和miR168b的表达与水稻种子活力的相关性研究

目的:探讨miRNA的表达差异与水稻种子活力的相关性。方法:通过人工老化处理获得不同活力的水稻种子,然后运用real time qPCR技术,对不同活力种子的胚中miR164c和miR168b的表达量进行相对定量分析。结果:水稻种子随活力下降至丧失活力以前,miR164c的表达量也相应下降;但丧失活力的种子中,miR164c的表达量显著回升。miR168b的表达量则随着种子活力的降低而呈先升后降的模式;在死种子中,miR168b的表达量维持在较低的水平。结论:初步推测miR164c和miR168b的表达量与调控水稻种子活力的变化相关,但它们的调控机制可能存在差异。

杀线虫芽孢杆菌B16和枯草芽孢杆菌168硫酯酶Ynep差异分析

【背景】线虫生防菌杀线虫芽孢杆菌B16和可作为线虫食物的枯草芽孢杆菌168对线虫存在差异感知,线虫引诱剂2-庚酮的表达量也存在显著差异。【目的】研究线虫生防菌芽孢杆菌B16和可作为线虫食物的枯草芽孢杆菌168中合成甲基酮的关键因子硫酯酶Ynep,并分析它们的异源表达、结构及酶活性质上的差异。【方法】使用定量聚合酶链式反应(quantitativePCR,qPCR)验证两种芽孢杆菌中硫酯酶在转录水平的差异,通过生物信息学分析两种酶结构的差异,并通过蛋白异源表达和活性测试验证其蛋白表达水平及特性的差异。【结果】qPCR显示,在培养12 h和72 h后,菌株B16ynep基因表达分别为菌株168的1.428和0.991倍。生物信息学分析表明两者氨基酸序列一致性为97.12%,酶分子量分别为15993.35 Da和16007.42 Da,等电点(isoelectric point,pI)分别为7.06和7.82,均具有与转录过程中基因表达调控有关的蛋白质(transcriptional enhancer,TE)结构域,均包含保守的Asp16-His23-Tyr26催化三联体。同源建模显示Ynep均呈典型“hot dog”结构,是TE超家族最常见的结构折叠。两种酶存在4个氨基酸差异,可能影响硫酯酶四聚体形成。菌株B16和168 Ynep与底物β-酮酯酰-CoA分子对接,结合能分别为-5.47 kcal/mol和-6.95 kcal/mol。异源表达纯化的酶活性测试显示:菌株B16和168的酶活分别为1.243 U/mL和1.2339 U/mL,最适反应温度均为30°C,最适pH分别为8.0和9.0。两种酶在10-30°C、pH 7.0-8.0均表现出良好的稳定性,且菌株168中Ynep对温度耐受性更佳。【结论】两种芽孢杆菌中的硫酯酶Ynep在异源表达、结构及酶活性质方面均有差异,导致其合成线虫引诱剂2-庚酮量有所不同。这些研究结果有助于解析不同芽孢杆菌差异感知线虫的分子机理,为进一步开发高效新型线虫生防产品提供新思路。

原子核^(168)Er低能激发谱中的1^+态

利用前期提出的sdd′玻色子相互作用模型的理论方案描述转动核168Er低能激发谱中的全部 1+ 态 ,计算168Er能谱中 1+ 态到基态的B(M1)跃迁值以及 1+ 态的B(M1)跃迁分支比 .结果表明 ,用d及d′玻色子激发耦合模式能较好地描述 1+ 态的能谱以及 1+ 态的B(M1)跃迁和 1+ 态的B(M1)

基于ATMega168的电热器具测试模块

本文介绍的测试模块采用Atmega168单片机作为核心控制器,BC7281B键盘控制器作为测试范围输入设备和显示设备。AVR单片机扫描键盘并且读入用户设定的范围值并将其显示,设定完毕后,连接好待测品,检测系统自动进入测试状态,第一阶段测试完毕后,AVR单片机指示检测人员进入第二阶段测试,测试完毕判断被测品是否合格。实际应用表明该测控系统具有测量精度高,可靠性高的特点。

极端耐热木聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的整合表达

目的:为了在枯草芽孢杆菌中整合表达极端耐热木聚糖酶。方法:将嗜热网球菌(Dictyoglomus thermophilum)Rt46B.1的极端耐热木聚糖酶基因xynB通过穿梭载体pDL整合到B.subtilis168染色体上,使其实现表达。结果:极端耐热木聚糖基因在枯草芽孢杆菌中成功整合并表达。结论:基因工程菌B.subtilis168-xynB能外泌表达极端耐热木聚糖酶,且表达水平为0.732IU/mL,比在大肠杆菌中的高。酶学性质表明,此酶分子量约为24kD,其最适反应温度为85℃,最适反应pH值为6.5,且在弱碱性条件下稳定。

基因工程大肠杆菌合成γ-聚谷氨酸

利用PCR方法,从自身不合成γ-聚谷氨酸(γ-PGA)的Bacillussubtilis168菌的基因组DNA中扩增出γ-PGA合成基因ywsC,ywtA和ywtB,测序并对该基因编码区进行序列分析,比对结果表明,扩增的ywsC,ywtA和ywtB与文献报道的相似度为100%.将3个基因连接到pTrcHisA载体后转化至E.coliTOP10及E.coliBL21(DE3)宿主菌表达,结果宿主菌细胞均具备了γ-PGA生物合成能力,产量最高达到0.134g/L.