Ⅰ型粘蛋白单链抗体的制备及其生物学活性的初步研究

目的 :制备Ⅰ型粘蛋白 (MUC1 )基因工程单链抗体 (scFv) ,并对其生物学活性进行初步研究。方法 :提取纯化MUC1单链抗体原核表达质粒C31 ,使用酶切和PCR鉴定 ;采用HRP标记的抗ETag单克隆抗体进行Westernblot,筛选表达量高的菌落 ,大量扩增后 ,制备培养上清及胞周质中抗MUC1scFv;将MUC1高表达的SKOV3细胞铺于 96孔板 ,戊二醛固定后作为包被抗原 ,将制备的抗MUC1scFv抗体倍比稀释后利用ELISA方法检测其生物学活性。结果 :质粒C31经Sfil酶切后为 530 8bp,经Sfil、NotⅠ双酶切后为452 2bp和 786bp,PCR扩增片段为 1 0 75bp。Westernblot结果显示可溶性抗体为 30kD。选择表达量高的菌落 ,进行大量扩增、诱导表达、提取培养液上清及胞周质可溶性抗体 ,胞周质抗体水平明显高于培养液上清 ;利用SKOV3作为包被抗原进行ELISA ,当培养液上清1 :32、胞周质 1 :2时所测OD值最高。结论 :抗MUC1单链抗体表达于细菌的胞周质液和培养液上清 ,以胞周质液表达量最高 ;且制备的抗MUC1单链抗体有生物学活性。噬菌体表面呈现技术可大量制备人MUC1噬菌体基因工程单链抗体 。

血清相关指标与老年直肠癌患者疾病转归相关性

目的研究血清黏蛋白-1(MUC-1)、胸苷激酶1(TK1)、癌胚抗原(CEA)水平变化与年龄>60岁直肠癌患者疾病转归的相关性。方法回顾性分析2020-01-01-2021-06-30南阳市第二人民医院收治的126例直肠癌患者临床资料,均给予FOLFIRI化疗方案,根据预后结局分为预后良好组(n=71,生存患者)和预后不良组(n=55,病死患者),均检测血清TK1、MUC-1和CEA水平,分析血清TK1、MUC-1和CEA水平与老年直肠癌患者KPS评分及疾病转归的关系。结果预后良好组血清TK1水平为(1.76±0.76)pmol/L,低于预后不良组的(3.82±1.20)pmol/L,t=11.747,P<0.001;MUC-1为(19.42±6.07)U/mL,低于预后不良组的(26.24±7.50)U/mL,t=5.641,P<0.001;CEA为(7.16±2.72)μg/L,低于预后不良组的(13.47±3.16)μg/L,t=12.031,P<0.001。预后良好组肿瘤低分化16例(22.54%),低于预后不良组的25例(45.45%),χ^(2)=12.167,P=0.007;预后良好组临床分期Ⅲ期56例(78.87%),高于预后不良组的24例(43.64%),χ^(2)=16.601,P<0.001;预后良好组KPS评分为68.91±4.83,高于预后不良组的46.27±4.39,t=27.143,P<0.001;预后良好组36例(50.70%)淋巴结转移,低于预后不良组的43例(78.18%),χ^(2)=10.005,P=0.002。Pearson相关性分析结果显示,年龄>60岁直肠癌患者血清TK1(r=-0.472,P<0.001)、MUC-1(r=-0.528,P<0.001)和CEA(r=-0.596,P<0.001)水平与KPS评分均呈负相关。多因素分析结果显示,肿瘤高分化(OR=2.507,95%CI为1.293~4.861,P=0.033)、临床分期Ⅳ期(OR=3.753,95%CI为1.650~8.537,P=0.018)、KPS评分<57(OR=5.649,95%CI为1.964~16.248,P<0.001)、淋巴结转移(OR=4.595,95%CI为1.822~11.586,P=0.013)、TK1>2.7 pmol/L(OR=6.358,95%CI为1.852~21.824,P=0.001)、MUC-1>22 U/mL(OR=3.537,95%CI为1.736~7.208,P=0.020)、CEA>10μg/L(OR=2.823,95%CI为1.409~5.656,P=0.027)是预后不良的危险因素;血清TK1、MUC-1、CEA联合预测年龄>60岁直肠癌患者疾病转归的灵敏度为92.73%,特异度为87.32%,预测效能优于单独检测,均P<0.05。结论老年直肠癌患者预后与肿瘤分化程度、临床分期、KPS评分、淋巴结转移、TK1水平、MUC-1水平和CEA水平有关,血清MUC-1、TK1和CEA水平与年龄>60岁直肠癌患者KPS评分呈负相关,检测相关血清因子水平变化,对病情监测及治疗具有指导意义,有利于疾病转归。