CE-SELEX法筛选Mucin16胞外域的核酸适配体

目的 CA125与胃癌的腹腔转移及不良预后密切相关,文中旨在针对CA125所属糖蛋白Mucin16的胞外域,筛选针对其的单链DNA核酸适配体。方法利用毛细管电泳法筛选Mucin16胞外域-合成多肽的适配体,同时利用毛细管电泳定量测定每轮筛选的Kd值及所筛得的适配体与多肽的亲和力,激光共聚焦成像法对所筛得的适配体靶向癌细胞进行评价。结果经过5轮筛选,测序分析及亲和力测定,成功获得1条针对Mucin16胞外域多肽的最优单链DNA核酸适配体,Kd值达122.7 nm,并且在表达Mucin16的人卵巢癌细胞株的细胞膜上清晰可见绿色荧光信号,证实所筛适配体能够结合Mucin16的细胞膜胞外域。结论利用毛细管电泳法成功筛选出针对Mucin16胞外域的核酸适配体,在为胃癌腹腔转移的诊疗中提供了新的靶向分子。

中性粒细胞弹性蛋白酶、金属基质蛋白酶9对卵巢癌细胞膜E-cadherin、MUC16表达的影响

目的检测中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase, NE)、金属基质蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)对体外卵巢癌细胞膜蛋白E-cadherin、黏蛋白16(mucin16,MUC16)表达的影响。方法体外培养人卵巢癌OVCAR3细胞。温控4℃,MMP-9、NE、0.125%胰蛋白酶分别处理OVCAR3细胞,光镜下观察不同时间段细胞形态学变化;采用Western印迹法检测OVCAR3细胞中E-cadherin、MUC16总体表达;免疫荧光技术定位E-cadherin、MUC16。应用酶联吸附测定技术(ELISA)定量培养基中脱落的MUC16胞外段蛋白。结果 NE、MMP9处理细胞后,细胞形态由平铺鹅卵石样呈细长/纺锤状,细胞间逐渐分离、扩散。NE、MMP9处理24h后E-cadherin表达均显著下降,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),而0.125%胰酶组与对照组之间差异无统计学意义。免疫荧光检测结果检测E-cadherin、MUC16主要定位在细胞膜。ELISA结果显示,MMP-9处理细胞后,上清液中MUC16胞外段CA125的含量明显增高。结论中性粒细胞相关蛋白酶NE、MMP9诱导细胞形态由平铺鹅卵石样呈细长/纺锤状,细胞间逐渐分离、扩散。两者通过酶解卵巢癌细胞膜上E-cadherin,促进上皮间叶转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT),细胞间接触和极性的丧失,进一步脱落。此外,MMP-9可以降解细胞膜上MUC16蛋白,使MUC16胞外段脱落,揭示局部MMP-9酶浓度升高与血清学CA125水平有一定关联。

老年鼻咽癌EB病毒感染及其对癌组织MUC16和AKR1B10表达的影响

目的探究老年鼻咽癌EB病毒(EBV)感染及其对癌组织黏蛋白16(MUC16)和醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)表达的影响。方法选择中南大学湘雅医学院附属海口医院2019年9月-2021年9月收治的老年鼻咽癌患者89例为研究组,另随机选择同期因慢性鼻咽炎进行活检的老年患者70例为对照组。采用荧光定量聚合酶链反应检测两组患者全血EB病毒核酸载量,采用免疫组织化学法检测两组患者组织标本中MUC16、AKR1B10蛋白表达情况,比较两组检测结果差异和研究组中不同EBV载量患者检测结果差异。结果研究组与对照组EBV感染率分别为49.44%和5.71%,研究组EBV阳性患者中EBV核酸载量主要集中于500~4999 copies/ml(65.91%);研究组组织标本中MUC16高表达率低于对照组,而AKR1B10高表达率高于对照组(P<0.05);研究组患者组织标本中AKR1B10高表达率为92.13%,高于对照组的12.86%(P<0.05);研究组EBV阳性患者组织标本MUC16表达率低于EBV阴性患者,而AKR1B10高表达率高于EBV阴性患者(P<0.05)。结论MUC16表达下调和AKR1B10表达上调可能与老年鼻咽癌的发生有关,且EBV感染可能导致老年鼻咽癌患者MUC16、AKR1B10表达水平进一步下调或上调。

MUC16对胆囊癌细胞生物学行为的调控作用及机制分析

[目的]探讨黏蛋白16(MUC16)对人胆囊癌细胞NOZ增殖、侵袭、转移的影响以及可能的分子机制。[方法]通过慢病毒转染体系,构建过表达MUC16的人胆囊癌细胞株NOZ,以及空病毒质粒转染细胞。MTT实验检测过表达MUC16对细胞体外增殖能力的影响;划痕实验和Transwell迁移小室实验检测过表达MUC16对细胞体外迁移和侵袭能力的影响;黏附实验检测过表达MUC16对细胞黏附能力的影响;Western blot检测MUC16调控NOZ细胞生物学行为可能的通路机制。[结果] MUC16过表达细胞系生长速度明显高于对照组(P<0.05);并且MUC16转染NOZ细胞系体外迁移能力、划痕愈合能力以及黏附能力均较空质粒对照组细胞增强(P<0.05);MUC16可明显提高MMP2、MMP7、p-Akt蛋白的表达以及PI3K激酶的活性(P<0.05)。[结论] MUC16可以通过激活PI3K/Akt信号通路,增加胆囊癌细胞体外的增殖、侵袭以及转移能力。