桑树景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶基因的克隆、原核表达与植物表达载体的构建

景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶(SBPase)是卡尔文循环过程中的关键酶。利用RACE技术得到景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶基因全长cDNA,命名为MSBPase(GenBank登录号:DQ995346)。MSBPase全长为1527bp,该序列含有1个1179bp的完整开放读码框,编码393个氨基酸,蛋白质理论分子质量约为42.6ku,等电点为5.85,其氨基酸序列与其他植物中已分离的SBPase有很高的同源性。对MSBPase编码的蛋白质(命名为MSBPase)进行结构预测分析表明,该蛋白富含无规卷曲(coil),高达64.29%,其次是α-螺旋(helix),为22.19%,而β-折叠(strand)只有13.52%。将MSBPase编码区插入原核表达载体pET30a(+),并转化到大肠杆菌菌株BL21中,经过IPTG诱导,MSBPase融合蛋白在BL21菌株中成功表达。将得到的MSBPase编码区插入植物表达载体pBI121中,构建了MSBPase植物表达载体pBI121-SBP。

TT基因型龙桑选育的研究

本试验是在1989年试验的基础上进行的,为了得到具有纯合的控制龙桑曲枝性基因(TT)的植株,对1989年获得的T型苗以天然授粉的方法进行测交,在已开花的39株中,发现有4株的基因型为TT.今后,由这些具有TT基因型的植株上所获得的种子育苗时,所获得的全部幼苗都将表现出曲枝性的特征.因而简化了龙桑苗木的繁殖方法,并可以比较容易地大批量的获得龙桑苗木.