寒地桑叶多糖化学组成及其生物活性分析

为探究龙桑一号(Morus abla L.cv.Longsang 1)桑叶多糖(mulberry leaf polysaccharide,MLP)的结构及功能性质,采用水提法提取其MLP,并对该多糖的结构性质以及体外降糖、抗氧化和免疫活性进行分析。结果表明:提取MLP得率为(16.16±0.30)mg/g,其中总糖质量分数为(57.16±4.00)%,糖醛酸质量分数为(30.97±2.06)%。凝胶渗透色谱测得MLP分子质量主要分布在21.74 kDa,其单糖组成主要包括葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、木糖、糖醛酸(包括葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸和甘露糖醛酸)、甘露糖,物质的量比为59.17∶22.31∶10.44∶2.65∶2.28∶1.07。通过傅里叶变换红外光谱和原子力显微镜分析发现MLP是一种吡喃糖,具有分支和相互交织、螺旋聚集的特点。MLP对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制作用的半数有效浓度(concentration for 50%of maximal effect,EC_(50))分别为1.81 mg/mL和2.91 mg/mL,其活性相当于阿卡波糖的49.17%和37.80%;MLP清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基和羟自由基的EC_(50)分别为0.54、0.60 mg/mL和1.77 mg/mL,清除自由基的效果分别相当于抗坏血酸的4.77%、38.03%和19.94%;MLP可以作用于小鼠巨噬细胞RAW264.7,使其促炎因子NO、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6和白细胞介素-1β的分泌量增加,增强巨噬细胞增殖作用和提高吞噬能力,从而增强免疫调节作用。本研究结果可为寒地桑叶的应用和功能评价提供实验数据。

不同添加物对发酵桑叶中降糖活性成分的影响

目的:以桑叶嫩芽作为主要原料,借鉴传统的红茶发酵工艺,通过添加不同的促发酵物质来提高天然桑叶中降糖活性成分的含量。方法:在单因素实验的基础上,选取纤维素酶、果胶酶和茶多酚三种添加物为影响因素,桑叶中总生物碱、总黄酮和总多糖的含量为综合评价指标进行正交优化试验,以确定其最佳添加量。结果:当纤维素酶、果胶酶和茶多酚的添加量分别为0.6%、0.8%和0.9%时,和自然发酵相比,添加物发酵的桑叶中总生物碱、总黄酮和总多糖的含量均有提升,分别增加了61.84%、45.02%和28.68%;相较于天然桑叶,其含量分别增加了115.12%、80.19%和54.81%。结论:添加促发酵的物质可以提高天然桑叶中降糖活性成分的含量,为其后续在降糖方面的有效利用奠定了基础。

桑叶醇提物-普鲁兰多糖复合涂膜对冷鲜牛肉保鲜效果的研究

为了研究桑叶醇提物(Ethanol extract of mulberry leaves,MLEE)与普鲁兰多糖(Pullulan polysaccharide,PPL)复合涂膜对冷鲜牛肉保鲜效果的影响,采用不同浓度(0.25%、0.5%、1.0%)MLEE与1.0%PPL复合涂膜对牛肉4℃条件下贮藏14d,在贮藏过程中对各项指标进行测定分析。结果表明:与对照组相比,复合涂膜处理降低了牛肉的pH值、剪切力、蒸煮损失率,且有效延缓了牛肉的总挥发性盐基氮(Total volatile basic nitrogen,TVB-N)和高铁肌红蛋白含量的升高,有效抑制了牛肉的菌落总数和嗜冷菌的生长,维持了牛肉较佳的感官品质。其中,1.0%MLEE-PPL复合涂膜处理对牛肉的保鲜效果最佳。

桑叶多糖对小鼠免疫调节作用的影响

目的:研究桑叶多糖对正常小鼠免疫功能的调节作用。方法:桑叶多糖分别以125、250、500mg/(kg.d)小鼠灌胃,空白对照组予以等量生理盐水,连续给药30d后,通过小鼠碳廓清实验、血清溶血素测定、脾淋巴细胞转化实验、脏器指数来观察桑叶多糖的免疫调节作用。结果:在125～500mg/(kg.d)剂量范围内,桑叶多糖可显著提高小鼠碳廓清指数和血清溶血素水平及ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力;低剂量组可显著提高小鼠胸腺指数。结论:桑叶多糖对正常小鼠具有一定的免疫增强作用。

大孔吸附树脂脱色桑叶多糖的研究

文中考察了5种不同型号大孔吸附树脂对桑叶粗多糖溶液的脱色作用,较为系统地研究了吸附工艺条件对树脂脱色能力的影响。结果表明:AB-8树脂具有较好的脱色效果,以4.6BV/h(1BV=8 mL)的流速对3%粗多糖溶液进行吸附脱色时,处理量5BV(树脂床体积),脱色率可达82%,多糖回收率达到83%;并对树脂的再生性能进行了评价。脱色前后桑叶粗多糖的高效凝胶过滤色谱表明AB-8树脂可能对不同分子量范围的多糖都有一定的吸附作用。

桑叶中α—葡萄糖苷酶活性调节成分的研究

从桑叶中提取、分离并部分纯化了多糖和黄酮。酶反应动力学研究结果表明,桑叶多糖是良好的α-葡萄糖苷酶竞争性抑制剂,其抑制率约比拜糖平片高8倍多,抑制率随浓度升高而增大,作用时间为5min时抑制效果最好。桑叶黄酮对α-葡萄糖苷酶有激活作用,是潜在的升糖功能因子。在桑叶黄酮加入乳化剂硬脂酸单甘酯,可改善黄酮在水中的分散度,解决了水溶性欠佳的黄酮酶活性调节剂的动力学测定问题。

响应面法优化超声波辅助提取桑叶多糖的工艺研究

针对桑叶多糖的超声波辅助提取,首先通过单因素试验选取影响因素与水平,然后在单因素试验的基础上采用四因素三水平的响应面分析法,依据回归分析确定较优提取工艺条件.结果表明,其较优工艺条件为:提取温度81.5℃,超声波时间30 min,超声波功率100 W,水料比为10 mL/g.采用该工艺条件,桑叶多糖的提取得率达到2.99%.

不同桑叶提取物对小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力的影响

试验旨在比较不同桑叶提取物对小鼠脾脏淋巴细胞增殖作用的影响。用不同浓度乙醇醇沉桑叶水提物,制备桑叶粗多糖MLP-1、MLP-2、MLP-3、MLP-4、MLP-5,采用苯酚硫酸法测定各提取物多糖含量。以5种桑叶粗多糖和桑叶水提物(MLAE)为试验药物,采用MTT法比较多糖含量分别在15.625、31.25、62.5、125、250μg/mL浓度时各提取物单独刺激及协同LPS、PHA共同刺激小鼠脾脏B、T淋巴细增殖的变化。结果显示,多糖浓度在15.625~250μg/mL范围内,各提取物无论单独还是协同LPS和PHA时均能促进小鼠脾脏B、T淋巴细胞的增殖,其中,MLP-1多糖含量在低浓度时能显著刺激脾脏B淋巴细胞增殖(P<0.05);MLP-3和MLP-5在低浓度时表现出较强的刺激T淋巴细胞增殖的能力;MLAE协同LPS在大部分浓度点的脾脏B淋巴细胞的增殖能力均显著高于细胞对照组和LPS对照组,可显著提升体液免疫功能(P<0.05)。

调制方法对桑叶青贮营养成分和活性物质含量的影响

试验研究常规青贮桑叶和尿素青贮桑叶中营养成分和生物活性物质含量。将饲料桑品种湖桑32号的风干桑叶分别调制为常规青贮和添加0.5%尿素青贮。发酵60 d后,测定营养成分和生物活性物质含量,评定青贮品质。结果显示:将桑叶调制为常规青贮或尿素青贮后,干物质中粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分和钙含量均显著提高(P<0.05),常规青贮桑叶中的单宁含量显著降低(P<0.05),尿素青贮桑叶中总酚酸含量显著增加(P<0.05),常规青贮、尿素青贮处理均未影响总黄酮和生物碱含量(P>0.05)。与常规青贮桑叶相比,尿素青贮桑叶的pH值、乳酸含量显著提高(P<0.05)。研究表明,常规青贮、尿素青贮提高桑叶的营养价值,常规青贮处理降低单宁的含量,添加尿素可以改善桑叶青贮品质。

热水浸提和微波萃取桑叶多糖的药效比较及降血糖机制初探

通过动物试验,对采用热水浸提法和微波萃取法所得桑叶多糖的降血糖效果进行比较,并探讨其降血糖机制。结果表明,微波萃取桑叶多糖的降血糖效果好于热水浸提的桑叶多糖;桑叶多糖可以提高四氧嘧啶诱导糖尿病模型小鼠机体的超氧化物歧化酶(SOD)活性,极显著抑制糖尿病模型小鼠的脂质过氧化作用,修复糖尿病模型小鼠的胰岛细胞损伤,因此推测桑叶多糖对治疗四氧嘧啶诱导的糖尿病模型小鼠具有多项代谢调节作用。

桑叶多糖的分离及红外光谱和气相色谱分析

多糖是桑叶中的重要功能性成分之一。采用水煮提取、乙醇分级沉淀和Sephadex G-100凝胶层析的方法,从桑叶中分离、纯化出3种多糖组分:MPSⅠ、MPSⅡ和MPSⅢ。经红外光谱分析,MPSⅠ不同于MPSⅡ和MPSⅢ,表现出长分子链、β-糖苷键构型和含酰胺基团等特征。气相色谱分析结果显示,L-鼠李糖、D-葡萄糖和D-半乳糖是3种桑叶多糖的共同成分,其中D-葡萄糖和D-半乳糖的构成比例较大,3种桑叶多糖的单糖构成也存在明显差异。

桑叶总黄酮和多糖提取工艺优化

目的:研究桑叶黄酮和多糖成分的提取工艺,通过正交实验获得最佳提取方案。方法:通过单因素实验筛选对提取有显著影响的因素进行正交实验,获得最佳提取方案。结果:黄酮最佳提取方案:固液比1:30,温度80℃,pH=8。多糖的最佳提取方案:固液比1:40,温度70℃,pH=7。结论:用水提法,对桑叶黄酮和多糖共同进行提取是可行的,并通过大孔树脂可以实现将二者有效地分离。

桑叶中抗凝血活性成分的初步分离与纯化

采用乙醇分级沉淀和Sephadex G100凝胶层析的方法,结合凝血指标检测,对桑叶中的抗凝血活性成分进行了分离纯化。结果表明:桑叶的抗凝血活性主要集中在桑叶的水提取液中,能够显著延长人体血浆的活化部分凝血活酶时间(APTT)值。桑叶水提取液经30%乙醇沉淀、凝胶层析和醋酸纤维素薄膜电泳表明其抗凝血活性成分是一种多糖组分。试验还表明,高浓度乙醇处理对桑叶多糖的抗凝血活性没有影响。

桑叶多糖MP-3b的结构性质研究

;目的:研究从桑叶中分离纯化获得的均一多糖MP-3b的结构。方法:采用糖组成分析、甲基化分析、部分酸水解、NMR、ESI-MS、IR等手段确定该多糖的结构。结果:MP-3b是一个相对分子量为8.9×104,由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、半乳糖醛酸组成的结构复杂的酸性多糖。MP-3b由1,2-、1,2,4-连接的鼠李糖,1,4-、1,3,4-连接的半乳糖醛酸,1,3-、1,6-、1,3,6-连接的半乳糖和1,4-连接的木糖构成,并在1,2,4-连接的鼠李糖、1,3,4-连接的半乳糖醛酸、1,3,6-连接的半乳糖、1,3,5-连接的阿拉伯糖形成分枝点,由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖构成链的末端。结论:该多糖为首次从桑叶中获得的酸性杂多糖。

桑叶多糖PMP12的分离纯化及结构初步分析

目的:从桑叶中分离纯化获得均一多糖PMP12,并研究其组成及初步结构。方法:桑叶经热水提取乙醇分级沉淀,脱蛋白、脱色,经DEAE-纤维素和SephadexG-100凝胶柱层析,得到一个均一多糖组分PMP12,采用气相(GC)、高效液相(HPLC)、红外(IR)、核磁(NMR)、Smith降解和糖醛酸还原等方法分析其组成和初步结构。结果:PMP12由鼠李糖(Rha)、阿拉伯糖(Ara)、半乳糖(Gal)和葡萄糖醛酸(GluA)组成,其摩尔比为Rha:Ara:Gal:GluA=1:1.56:1.57:1.08;PMP12主链主要是以β-1→3糖苷键连接的鼠李糖,侧链主要是以β-1→2糖苷键及β-1→4糖苷键连接的阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖醛酸。结论:测定分析了桑叶多糖PMP12的组成和初步结构,为桑叶多糖的进一步研究提供依据。

桑叶多糖的分离纯化与分析

使用DEAE纤维素和凝胶过滤色谱从桑叶粗多糖中纯化得到了3种多糖组分(SD2-3,SD3-3,SD3-4),经过高效凝胶渗透色谱分析表明,它们为均一多糖,相对分子质量为6000、80000、10000左右。红外光谱分析表明,3种多糖组分SD2-3,SD3-3,SD3-4都可能含有糖醛酸。

应用二次回归正交旋转组合设计提取桑叶多糖的研究

采用二次回归正交旋转组合设计方法研究了温度、时间、料水比、pH对桑叶水溶性多糖提取率的影响,确定了桑叶多糖的较优提取范围。实验结果通过贡献率法计算表明,在实验范围内各因子对桑叶多糖提取率作用的大小依次为:料液比>温度>pH>时间;频率分析法得到桑叶多糖最优提取工艺为:温度85℃,时间90min,料水比1∶35,pH为7.45,在此工艺条件下桑叶多糖提取率为4.69%。

桑叶多糖的分离纯化及对α-葡萄糖苷酶的抑制活性

利用Sephadex-G50从桑叶多糖中分离纯化得到两种不同多糖组分MLP1和MLP2,经过高效凝胶色谱(GPC)分析表明,MLP1的纯度为94.55%,重均相对分子质量MW为11800,多分散性系数为1.25,MLP2的纯度为96.64%,重均相对分子质量MW为7630,多分散性系数为1.12。并利用α-葡萄糖苷酶抑制活性体外筛选模型,对MLP1和MLP2进行活性研究,结果表明两个组分对α-葡萄糖苷酶均具有较好的抑制活性。

桑叶多糖提纯工艺及质量控制研究

目的研究适于桑叶多糖的工业化生产的提纯工艺及质量控制标准。方法采用水提醇沉法对桑叶进行提取,活性炭脱色,再用醇沉法精制,并对脱色条件进行了考察;对样品进行定性定量评价。结果用该法得桑叶多糖,硫酸蒽酮反应呈阳性,桑叶多糖的平均含量为8.95%(n=3),平均回收率为101.2%,RSD为1.6%。结论此工艺操作简便,重现性好,适合于工业生产;该方法准确、稳定、重复性好,可作为桑叶多糖的质量控制标准。

桑叶多糖提取工艺研究

利用响应面法(Response Surface Methodology)对桑叶多糖的提取工艺进行优化。在单因素实验基础上选取实验因素与水平,根据中心组合(Box-Benhnken)实验设计原理采用三因素三水平的响应面分析法,依据回归分析确定各工艺条件的影响因子,以桑叶多糖提取率为响应值作响应面和等高线。在分析各个因素的显著性和交互作用后,得出桑叶多糖浸提的最佳工艺条件为:料水比1∶19,浸提温度96℃,浸提时间2.5h;浸提2次,桑叶多糖的实际一次提取率可达3.094%。