国内外真菌毒素检测方法研究现状及进展

真菌毒素是真菌产生的小分子有毒代谢产物,通常以痕量形式存在于基质中,不表现为急性毒性,但具有蓄积性,长期摄入易引发癌症、突变及畸形,从而对人类安全造成威胁。本文着重介绍了黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏马菌素、玉米赤霉烯酮及其代谢物、单端孢霉烯族类毒素以及麦角碱等毒性相对较强的真菌毒素的来源、结构和毒性。由于许多真菌毒素结构相似且含量较低,需要采用高选择性、准确、快速定性定量方法,因而本文就目前国内外常用的传统及新型的真菌毒素检测方法进行了概述和比较,主要包括:薄层色谱法,液相色谱法,气相色谱法,免疫化学法,核酸适配体法以及液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS)在多毒素检测中的应用,拟为真菌毒素的检测研究提供参考。

UPLC-MS/MS法测定玉米中13种真菌毒素

建立了超高压液相色谱串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物、玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1/B2/G1/G2、伏马毒素B1/B2、赭曲霉毒素A、T-2和HT-2等13种真菌毒素的分析方法。样品采用乙腈∶水∶乙酸（80∶19∶1,V/V/V）提取后,经过稀释、离心和过滤的前处理操作即可进行仪器测定。结果表明,13种真菌毒素的定量限在1~200μg/kg之间,3个浓度添加水平回收率为80%~114%,相对标准偏差为0.9%~10.9%,基体标准物质测定结果均在标准值±不确定度的范围内。

高效液相色谱-串联质谱法测定桃仁中10种真菌毒素

目的：建立桃仁中黄曲霉毒素 G2、G1、B2、B1、赭曲霉毒素 A、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、伏马毒素 B1、B2及 T-2毒素10种真菌毒素的高压液相色谱-串联质谱测定法。方法样品经70%甲醇溶液超声提取,用水稀释后经固相萃取柱净化,经 C18色谱柱分离,采用电喷雾离子源在正负离子多反应监测(multi-reaction monitoring, MRM)模式下测定,外标法定量。结果10种真菌毒素的线性关系良好,在低、中、高3个水平的加标回收率在60％~100％之间, RSDs(relative standard deviation)为0.4%~3.7%。结论该方法快速、简便、准确,可用于中药材中真菌毒素的多成分测定。

饲料中多种霉菌毒素的危害与生物防控

饲料中经常存在多种霉菌毒素,而且这些霉菌毒素之间存在着协同和叠加的毒性,导致其对动物的危害加重,但又常被人忽视。为了防止霉菌毒素的产生及消除或缓解多种霉菌毒素对畜禽的危害,文章从多种霉菌毒素的危害和霉变的防控,以及利用微生物和酶制剂进行霉菌毒素的脱毒和解毒等方面进行论述,为饲料安全及畜禽健康养殖服务。

食品中主要真菌毒素检测方法研究进展

文章重点介绍了黄曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、链格孢霉毒素等毒性较强的真菌毒素污染食品状况和毒性,并就当前国内外常用的真菌毒素检测方法进行了概述,分析了各方法的优缺点,最后对今后真菌毒素检测方法的发展方向进行了展望。

高效液相色谱-串联质谱法同时测定小麦粉中28种真菌毒素

建立了高效液相色谱-串联质谱同时测定小麦粉基质中28种真菌毒素的方法。样品经乙腈/水/甲酸(80∶18∶2)提取,C18色谱柱分离,采用多反应监测模式进行检测,使用外标法定量。结果表明,在高、中、低三个加标浓度水平下进行方法学验证,28种真菌毒素回收率范围在60%~120%之间、相对标准偏差小于11%,满足国家标准GB/T 27404—2008中的实验室质量控制规范的要求。利用本方法对市售小麦粉样品进行检测,结果显示呕吐毒素及其衍生物、伏马毒素的检出率最高。部分样品中的呕吐毒素含量超出我国限量标准(<1000μg/kg)。本方法可实现小麦粉中28种真菌毒素的同时样品前处理及检测,并可应用于真菌毒素风险的高效筛查。

液相色谱-质谱联用同时检测粮食中多种真菌毒素的应用进展

液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术以通用型的质谱仪为检测器,集液相色谱高分离能力为一体,在多组分检测中发挥着越来越重要的作用。结合近几年LC-MS技术在粮食中真菌毒素检测方面的应用,从样品前处理、色谱分离、质谱检测等3个方面对文献报道的方法进行了分析和评价,并对该技术在今后粮食中真菌毒素污染检验监测的发展应用进行了展望。

同时检测伏马菌素B_(1)和呕吐毒素的通用探针免疫层析卡研究

目的研发同时检测伏马菌素B_(1) (fumonisin B_(1),FB_(1))和呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)的通用探针免疫层析卡。方法通过标记物修饰在融合真菌毒素模拟表位的甘露糖结合蛋白(mannose binding protein,MBP)制备双功能抗原,引导针对标记物抗体的量子点微球通用探针,与检测线上的毒素抗体形成"夹心免疫复合物",从而产生检测信号。结果标记物对MBP的反应摩尔比为3.0:1.0,所制备的2种双功能抗原具有最优的双抗体结合活性。"毒素抗体/双功能抗原/通用探针"免疫复合物在2条检测线(T线)都形成荧光信号;只需调整2种毒素抗体的点阵浓度,FB_(1)和DON的T线完全抑制的阈值统一优化为预定的5.0 ng/mL。结论基于双功能抗原引导的通用探针的免疫层析检测,避免了分别制备单一特异性探针的烦琐,各T线检测阈值优化过程简便,适合真菌毒素多残留检测免疫层析试剂的标准化制备。

基于先进材料的纸基传感器在多毒素联合检测中的应用

农产品、食品和饲料等常因霉菌侵染而被多种真菌毒素污染,研发高通量真菌毒素快速检测产品是热点研究领域之一。目前主流的真菌毒素快检产品中,传统纸基传感器大多以胶体金作为信号标记物用于单一毒素检测,获得信息相对有限。多毒素纸基传感器常常偶联多种真菌毒素抗原,成本更低,耗时更短,然而检测灵敏度因测试样液量变化而受到影响。近年来,在真菌毒素快检领域引入贵金属纳米粒子、量子点、碳纳米材料、上转换粒子、镧系金属纳米粒子等先进材料,可以改善传感器的检测性能。笔者总结了多毒素纸基传感器的检测原理和组成,综述近年来文献报道中基于先进材料的纸基传感器同时检测多种真菌毒素的研究与应用,分析多毒素纸基传感器未来的研究趋势,以期为多种真菌毒素快速高通量检测相关研究提供参考。

超高效液相色谱-三重四级杆质谱同时检测苦荞中10种真菌毒素

[目的]建立QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法同时检测苦荞样品中10种真菌毒素。[方法]苦荞样品经水和乙腈提取后,采用QuEChERS方法净化。通过超高效液相色谱-三重四级杆质谱在多反应监测模式(MRM)下进行目标真菌毒素的分析。试验对样品前处理、仪器分析条件进行优化;考察方法的基质效应、检出限、精密度、回收率等参数。[结果]根据基质效应考察结果,50%的目标真菌毒素具有显著的信号抑制/增强效应。为了补偿基质效应的影响,选用基质配标法进行目标真菌毒素的分析。方法的线性范围为0.5~50.0μg/L(对于黄曲霉毒素B 2、G 2,线性范围为0.125~12.500μg/L),检出限和定量限分别低至0.011和0.040μg/L,回收率为89.70%~105.83%,RSD<9%(n=6)。[结论]建立的方法简便、可靠,具有较好的灵敏度和准确性,能有效用于苦荞样品中多组分真菌毒素的检测。

多指标综合加权法优化固态发酵菜粕品质研究

试验旨在优化固态发酵菜粕工艺,为固态发酵菜粕开发提供参考。以粗蛋白(CP)、酸溶蛋白、异硫氰酸酯(ITC)、噁唑烷硫酮(OZT)及真菌毒素水平作为筛选标准,以多指标综合加权法进行正交试验结果评定,得出最佳发酵组合后进行正交验证试验。结果表明:以增香曲霉:酿酒酵母(SC17-1):枯草芽孢杆菌(BS15-3)配比为3:4:2,发酵时间为4 d时,菜粕发酵效果最佳,发酵后菜粕的CP增加率为8.22%(P<0.05)、酸溶蛋白增加率为102.54%(P<0.05)、ITC降解率为68.77%(P<0.05)、OZT降解率为56.94%(P<0.05)、玉米赤霉烯酮(ZEN)水平降低46.33%(P<0.05)、黄曲霉毒素B1(AFB1)水平降低65.22%(P<0.05)。固态发酵可有效提升菜粕的营养价值。

“十三五”期间中国真菌毒素监测之发展思考

针对我国真菌毒素污染状况,在“十三五”期间探索了一套适合中国开展食品安全风险监测的方式,即技术上立足于采取多毒素同时检测,涵盖各类重点食品,尽可能全面掌握当前污染现状。实践证明,目前采取的方式取得的效果良好,也为“十四五”开展更全面的监测奠定了扎实的实践基础。

多功能免疫亲和柱净化-超高效液相色谱串联质谱法快速检测咖啡豆中的11种真菌毒素

建立了同时测定咖啡豆中11种真菌毒素的超高效液相色谱-串联质谱分析方法,实验考察了色谱柱选择、提取溶剂组成、固相萃取柱选择、流动相比例对分析结果的影响。以咖啡豆为研究对象,样品均质后,经乙腈-水-甲酸(85+14+1,V/V)振荡提取,离心,过Oasis PRiME HLB柱,取净化液10 mL用磷酸缓冲液稀释至50 mL,经多功能免疫亲和柱净化,氮吹、50%乙腈复溶,以0.1%甲酸-2 mmol/L乙酸铵溶液-乙腈为流动相,用Waters BEH C_(18)柱分离,超高效液相色谱-质谱仪分析,内标法定量。结果表明,11种真菌毒素在各自线性范围内线性关系良好,相关系数均大于0.998,检出限为0.008~0.544μg/kg。在低、中、高3个添加水平下的平均回收率为80.2%~114%,相对标准偏差为1.4%~7.9%。本方法步骤简便、快速高效,适用于咖啡豆中11种真菌毒素的同时测定分析。

薏苡仁中7种真菌毒素的液相色谱-串联质谱测定法

目的：建立了薏苡仁中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素和T-2毒素等7种真菌毒素的液相色谱-串联质谱测定法。方法：样品经84%乙腈提取,多功能净化柱净化后,用液相色谱-串联质谱进行分析测定。结果：七种真菌毒素的线性关系良好,γ〉0.995。回收率在70%~120%之间。结论：该法快速简便,准确,可用于中药材中真菌毒素的多成分残留测定。

智舌对同属5种产毒曲霉的快速鉴别研究

为探究智舌(电子舌)是否能够鉴别同属中不同种的霉菌,以构建快速鉴别霉菌的新技术。用基于多频脉冲伏安法的智舌,结合主成分分析,对在相同基质中培养30、40h和50h的5种主要产毒曲霉菌的液体培养物进行鉴别研究,筛选能够鉴别它们的最佳电极和频率段组合。结果显示,5种产毒曲霉不同时间段的培养物的鉴别效果不同,30h的稍有鉴别趋势,但不能彼此鉴别;40h的鉴别趋势稍好,也仅有W电极100Hz和Ag电极100Hz能够鉴别;50h的5种产毒曲霉菌的培养物,多数电极和频率段组合都能有效鉴别,其中Pt电极100Hz、Au电极1Hz和10Hz、Pd电极1Hz和10Hz、W电极10Hz和100Hz、Ag电极1Hz和100Hz的鉴别效果最好。同时利用判别依据的d值,均为dmin﹥2.000。研究结果表明,智舌结合主成分分析法快速鉴别同属不同种的产毒曲霉菌是可行的。