参照多重PCR片段分析法进行实时荧光PCR法对ABCB1三等位基因测定结果读取方法的确定

目的为解决实时荧光PCR法对三等位基因测定结果无法正常读取的问题,通过参照多重PCR片段分析法,确定实时荧光PCR法读取方法,实现临床对ABCB1三等位基因准确、简便且价格低廉的检测。方法收集西安市精神卫生中心2020年3月-2021年3月DNA样本2794例,抽取5%作为实验样本,分别进行实时荧光PCR法和多重PCR片段分析法测定。根据PCR曲线Ct值的比较以及多重PCR片段分析法碱基峰位强度的比较,对比分析两种方法的判读结果,对其中报告结果不相同的样本进行数据核查并确定PCR读取方法。结果共抽取139例样本,其中存在120例等位基因及19例三等位基因,实时荧光PCR法和多重PCR片段分析法对等位基因的检测结果完全一致。根据多重PCR片段分析结果,对19例三等位基因制定了实时荧光PCR法的读取方法:扩增曲线图中,当∣∣Ct._(G)-Ct._(T)∣-∣Ct._(G)-Ct._(A)∣∣<3,分别读取两组碱基Ct值小的碱基,将其组合形成判读结果;当∣∣Ct._(G)-Ct._(T)∣-∣Ct._(G)-Ct._(A)∣∣≥3,读取两组碱基Ct值最小的碱基,其纯合型即为判读结果。根据读取方法,修正实时荧光PCR法的测定结果为:1例G/G,1例A/A,4例T/G,5例T/A,8例T/T,与多重PCR片段分析法结果一致。结论通过多重PCR片段分析法制定实时荧光PCR法对ABCB1三等位基因的读取方法,两者判读结果一致性良好。

一种致心律失常性右心室心肌病PKP2基因检测片段分析方法的建立

目的建立一种人类致心律失常性右心室心肌病PKP2突变基因检测方法,为该遗传性基因疾病的临床诊断提供分子诊断依据。方法通过构建一种多重荧光复合扩增结合毛细管片段分析的方法对人类致心律失常性右心室心肌病的两个中国人群高突变基因位点Q211X和N852fsX930进行分子检测。结果构建一种同时检测两种突变基因及直观分析分型的基因分子诊断方法。结论运用多重荧光扩增结合片段分析方法,可在基因分子水平上,通过本实验室构建的分析方法,分析分型情况,从而直观判断被测者基因突变类型,为其该领域临床诊断提供参考。