小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒多重荧光RT-LAMP鉴别检测方法的建立及应用

旨在建立一种可视化多重荧光RT-LAMP方法用于检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒的核酸,并初步应用于小反刍兽疫和蓝舌病临床样品的检测。比对GenBank中小反刍兽疫N基因和蓝舌病NS3基因保守区域,设计2套LAMP引物,在每条内引物FIP的5′端标记荧光基团。对反应条件进行优化,验证方法的特异性、灵敏度和干扰性,同时应用该方法检测168份临床样品。结果表明,该方法对小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒高度特异,与口蹄疫病毒、鹿流行性出血热病毒、牛瘟病毒、山羊痘病毒等其他反刍动物病毒均无交叉反应,检测灵敏度为200 copies/μL,干扰性小,可同时检测两个不同浓度的模板。对168份样品的检测结果显示,小反刍兽疫病毒的感染率为3.6%,蓝舌病病毒的感染率为13.1%,无两种病毒混合感染;与荧光RT-PCR方法相比,此多重荧光RT-LAMP方法敏感性为91.7%~100%,特异性为100%。表明建立的多重荧光RT-LAMP可快速、准确地检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒,具有较好的临床应用价值。

三种食源性致病菌的多重LAMP检测方法研究

针对沙门氏菌的invA基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因和志贺氏菌的ipaH基因分别设计LAMP引物,通过对实验条件和反应体系的优化,分析鉴定扩增产物,验证了LAMP方法的灵敏度及特异性,初步建立了针对三种致病菌的多重LAMP(m-LAMP)检测方法。分别对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌的基因组DNA提取物梯度浓度稀释后进行实时荧光检测,结果表明:多重LAMP反应体系检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌的敏感度均为10fg/反应。对目标菌和其他非目标菌的特异性检测均未出现假阳性和假阴性结果,并通过熔解温度曲线分析对目标菌的扩增产物进行初步鉴定。鉴定结果表明:该方法快速准确、简便高效、特异性强,可广泛应用于致病菌的筛选检测。

多重LAMP—熔解曲线法检测食品中两种食源性致病菌

针对沙门氏菌的侵袭蛋白基因(inv A)和金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)设计LAMP引物,优化反应条件,并分别对反应产物进行熔解曲线分析,判断扩增结果,从而建立食品中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌多重LAMP—熔解曲线检测方法。对9株目标菌和23株非目标菌的检测未出现假阳性和假阴性结果,并可通过熔解曲线的熔解温度分析确定所含目标菌;对产物的测序分析表明所得序列与目的基因序列吻合;对目标菌的检测灵敏度均可达到10 fg/μL;对232份样品的检测结果显示,其中2份生猪肉中检出金黄色葡萄球菌。该方法具有良好的检测特异性,并可为食源性致病菌的快速检测提供一种重要技术手段。

动物布鲁氏菌病快速诊断方法研究进展

布鲁氏菌病是一种流行范围广、危害严重的人畜共患传染病。近年来,布鲁氏菌病的人畜疫情在国内外均出现回升势头,严重影响了流行地区的养殖产业发展,并引发严重的公共卫生问题。因此,该病的快速准确检测能为预防、治疗提供早期、有效的疫病信息。鉴于布鲁氏菌病危害的严重性,建立快速有效的检测方法是十分必要的,是布鲁氏菌病早期诊断和疾病控制的关键。本文将对多重PCR、实时定量荧光PCR、LAMP等分子生物学检测方法以及ELISA、胶体金试纸条等免疫学检测方法两个方面对布鲁氏菌病快速检测方法的研究进展进行综述。其中LAMP方法和胶体金免疫层析法对布病的检测更加适合在基层的推广和使用,并且免疫层析技术正朝着定量、高灵敏度、多标记检测等方向发展。

PCR方法检测食品中沙门氏菌研究进展

对目前出现的一些具有代表性的食品中沙门氏菌的PCR检测方法做一综述,由此可以得出,目前开发出的检测食品中沙门氏菌的PCR方法正逐渐以多种PCR方法相结合、多重PCR技术以及食品样品预处理方法等为主,以开发出更快速、灵敏、简便、实时、低廉的食源性沙门氏菌PCR检测方法。

水下LED集鱼灯灯载视频系统设计

为实时获取光诱捕捞作业时水下鱼群状态的视频信息,设计了一款水下LED集鱼灯灯载视频系统。该系统在结构设计上以水下LED集鱼灯为载体,在其内部嵌入了一套数字视频解决方案;在信号处理上利用正交频分复用技术(OFDM)对数字视频信号进行调制,以克服电力线上的杂波和电流信号固定脉冲对视频信号的干扰;在通信设计上以电力载波(PLC)方式作为视频信号传输方案。该系统设计完成后,对其信号传输性能进行了测试。结果表明,在电力线标称截面积6 mm2、长度30 m时,系统延时3 ms,丢包率0%,实际传输速率为8 000 Kbps。系统在不改变集鱼灯结构的前提下,添加了视频拍摄功能,且无需单独增设视频传输线,可作为光诱渔船上的辅助渔捞设备使用,也可拓展应用于鱼类行为实验中。

基于OFDM的电力线远程路灯控制模块设计

低压电力线通信技术由于其成本低、可靠性高和组网快等优点,成为近年来的研究热点。正交频分复用(OFDM)技术因实现简单、频谱利用率高及较好的抗多径和脉冲干扰性能,成为电力线通信的主要技术之一。文章在分析了电力线和OFDM特性后,给出了用DSP芯片TMS320C6418和单片机PIC16F690实现的基于OFDM的电力线城市路灯控制模块的软硬件结构。

西番莲病毒可视化多重RT-LAMP检测技术的建立

东亚西番莲病毒(East Asian Passiflora virus,EAPV)、夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus,TeMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是当前危害我国西番莲的主要病毒种类。为建立同时快速检测西番莲上EAPV、TeMV和CMV的可视化多重逆转录环介导等温核酸扩增(Multiplex reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,multiplex RT-LAMP)技术,本研究根据GenBank已报道的EAPV、TeMV和CMV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因序列保守区域分别设计、筛选特异性引物,并通过反应体系和反应条件的优化,建立了可同时快速检测EAPV、TeMV和CMV的多重RT-LAMP技术,并进行了特异性、灵敏度测定及西番莲果园样品的检测。结果表明,建立的多重RT-LAMP方法特异性良好,可对EAPV、TeMV和CMV同时进行检测,而与西番莲上其他病毒及阴性对照无交叉反应;多重RT-LAMP的灵敏度最低可检测稀释至145×10-3 ng/μL总RNA,与一步法RT-PCR方法的灵敏度相当;西番莲果园样品3种病毒的多重RT-LAMP检测结果与一步法RT-PCR检测结果一致。本研究建立的多重RT-LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,适用于基层实验室和现场对西番莲上EAPV、TeMV和CMV的快速初筛。

多重环介导等温扩增技术的研究进展

环介导等温扩增技术(LAMP)是一种新型的核酸放大扩增技术。但是,当前的LAMP技术多是在同一个体系中对单一目标物进行检测,限制了其工作效率的发挥。多重LAMP技术就是在同一反应体系中加入多组针对不同靶基因的特异性引物,从而实现对多种目标基因同时进行扩增。我们针对多重LAMP的优缺点,对其在病毒、细菌、寄生虫以及性别筛选等领域的应用做简要综述。

基于CAN总线的多路LED智能前照灯控制系统的设计和实现

随着车灯智能化的进程不断推进,对汽车夜间驾驶的安全性也提出了较高的要求。设计一款基于CAN总线的多路LED智能前照灯控制系统。该控制系统可根据外部图像处理器发送的控制命令,通过关闭指定区域的LED,构成跟随车辆轮廓的暗区,避免前车眩目。介绍系统的基本原理、理论分析及硬件设计,并提出软件的实现方法。其中硬件系统包括控制单元与照明单元。该系统智能化程度高,大大提高了夜间驾驶的安全性。

可视化多重荧光LAMP鉴别诊断牛轮状病毒和产肠毒素性大肠杆菌的研究

本研究旨在建立一种同时检测牛轮状病毒(BRV)和产肠毒大肠杆菌(ETEC)的多重荧光LAMP检测方法。根据GenBank中BRV和ETEC的基因保守区域设计3套LAMP引物,在每条内引物FIP的5’端标记荧光基团,在同一体系中进行多重LAMP扩增,对各反应条件进行优化,应用该方法对采集自广西各地牛场的56份样品进行检测。结果显示,该方法能特异地鉴别牛轮状病毒和产肠毒大肠杆菌,并与其他对照病原不发生交叉反应;每个反应的检测灵敏度均为100拷贝。对56份腹泻样品的检测结果显示,BRV的感染率为14.3%,ETEC的感染率为57.1%,2种病原的混合感染率为8.9%;与荧光PCR和常规PCR检测方法相比,此多重LAMP方法敏感性为100%,符合率为100%。建立的方法可快速、准确地检测2种犊牛腹泻病原体,为病原学诊断和分子流行病学调查提供了有效技术支持。

多重环介导核酸等温扩增技术检测血液中常见病原体

背景:血液安全性筛查是输血前必要检测项目。目前临床采用血清学检测技术,存在较长的检测窗口期,易产生假阴性检测结果,造成输血交叉感染。目的:建立多重环介导核酸等温扩增技术,实现在一管反应体系内同时检测四种病原体:乙肝病毒,丙肝病毒,艾滋病毒和梅毒螺旋体。方法:通过限制性酶切处理多重环介导核酸等温扩增产物,利用酶切产物的长度分析扩增产物的种类,从而分析待测样本中含有何种血液病原体。结果:检测164例临床样本,其检测结果可以通过琼脂糖电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳及芯片电泳分析,且均可实现对多重扩增产物的酶切片段进行区分和鉴别。结论:多重环介导核酸等温扩增技术可以同时单管检测多种待测血液病原体,可以为临床提高简单、快速、高灵敏和高特异的检测技术。