酶解法制备阿胶蛋白肽工艺条件优化及抗氧化活性分析

目的:研究酶解法制备阿胶蛋白肽的工艺条件及阿胶蛋白肽的抗氧化活性。方法:以阿胶为原料,通过酶解实验优化碱性蛋白酶Alcalase 2.4L制备阿胶蛋白肽的酶解工艺条件。以酶解pH、酶与底物比、酶解温度作为考察因素,以阿胶的水解度为指标,在单因素实验的基础上,通过正交试验确定最佳工艺条件;利用高效凝胶色谱法测定酶解前后阿胶溶液的分子量分布情况,并通过检测对ABTS+和DPPH自由基的清除率,考察酶解前后阿胶溶液的抗氧化活性,从而综合分析酶解效果;采用4种不同大小孔径的超滤膜分离阿胶蛋白肽液,研究经超滤膜分离后不同分子量阿胶蛋白肽的抗氧化活性。结果:阿胶溶液的最佳酶解条件为:pH10.5、酶与底物比9%、酶解温度63℃,此条件下测得阿胶酶解液的水解度为15.93%±1.32%;酶解后阿胶溶液的分子量大部分分布在5000 Da以下;当浓度为10 mg/mL时,未酶解和酶解后的阿胶蛋白肽溶液ABTS+自由基清除率分别为75.83%±0.32%和93.16%±0.21%,DPPH自由基清除率为16.93%±2.41%和39.95%±1.27%;经超滤处理获得五组不同分子量的阿胶蛋白肽(>30 kDa、10~30 kDa、3~10 kDa、1~3 kDa和<1 kDa),分析比较发现低分子量的阿胶蛋白肽抗氧化效果较好。结论:碱性蛋白酶Alcalase 2.4L能够有效制备阿胶蛋白肽,且阿胶蛋白肽具有良好的抗氧化活性。试验结果为后续开展阿胶蛋白肽的抗氧化机制研究提供科学依据。

多指标优化珠蚌抗氧化肽制备工艺

采用取珠后珠蚌肉为原料,选用木瓜蛋白酶进行水解。以DPPH自由基清除率、.OH清除率及蛋白水解度作为评价指标,研究珠蚌抗氧化活性肽的制备工艺。在单因素基础上,通过三个指标的综合考虑,设计L18(37)多指标正交试验,对制备工艺进行优化,得出最佳工艺条件。结果表明,最佳条件为:酶解温度60℃、酶解时间5h、料液比3:10(w/v)、酶解pH6.5、加酶量6000U/g,制得的多肽DPPH自由基清除率85.5%,.OH清除率50.7%,水解度23.09%;此时,DPPH自由基清除率EC50为0.4mg/mL,.OH清除率EC50为0.7mg/mL。

复合酶法制备海参内脏ACE抑制肽工艺研究

采取复合酶法探讨海参内脏中ACE抑制肽的制备工艺,研究温度、时间、pH值、料液比、酶量5个因素对ACE抑制率和水解度的影响。通过单因素和正交试验,得到海参内脏ACE抑制肽制备最佳工艺组合为A_2B_2C_3D_2,即反应时间为5 h、温度50℃、酶量2%、p H值为7.5,此条件下海参内脏多肽ACE抑制率可达到55.4%。

乳酪蛋白肽制备工艺的优化

[目的]研究制备乳酪蛋白肽的最佳工艺。[方法]以乳酪蛋白为原料,以水解度为考察指标,确定碱性蛋白酶为乳酪蛋白的最佳水解酶。利用单因素试验考察酶解温度、p H、投酶量、酶解时间和底物浓度对水解度的影响,确定主要影响因素。通过L9(34)正交试验获得碱性蛋白酶的最佳水解条件。利用凝胶色谱法确定乳酪蛋白肽的分子量。[结果]试验得出制备乳酪蛋白肽的最佳工艺为:酶解温度60℃,p H 7.0,投酶量1.5%,酶解时间150 min。制备的乳酪蛋白肽分子量为2 k D。[结论]研究可为乳酪蛋白活性肽的产业化研发提供理论依据。

蛴螬酶法制备抗氧化活性肽

建立蛴螬多肽的制备工艺,探究多肽的抗氧化活性。采用酶法将蛴螬制备成蛴螬蛋白水解肽,以蛴螬多肽提取率及其总抗氧化能力为衡量指标,通过单因素试验确定了酶种类、酶虫比、底物浓度、水解体系pH值、酶解温度和时间对蛴螬多肽提取率及其总抗氧化能力的影响。通过正交试验优化蛴螬多肽提取率及其总抗氧化能力,获得最佳酶解工艺,即底物浓度5%、水解体系p H 7、酶解温度40℃。在此试验条件下,蛴螬多肽的提取率为14.21%,总抗氧化能力为0.752 mmol/L。

新疆伊吾县野山杏多肽对衰老模型小鼠的抗氧化作用

采用酶解法提取新疆伊吾县野山杏多肽,探究其对衰老模型小鼠的抗氧化作用。通过单因素实验,考察酶底物比、料液比、提取时间、pH值和酶解温度对野山杏多肽水解度的影响,结合正交试验,优化野山杏多肽提取工艺;以提取物为原料,D-半乳糖制备小鼠衰老模型,分为空白对照组,野山杏多肽低、中、高剂量组(50、75、100 mg/kg),衰老模型组以及Vc阳性对照组,连续灌胃饲养30 d,测定血清、肝组织和脑组织匀浆中GSH-Px、SOD活力和MDA含量。酶解法提取野山杏多肽的最佳工艺:酶底物比为4%,酶解时间120 min,pH值为8,酶解温度为65℃,料液比为1:25,多肽水解度为35.73%,多肽得率为7.22%。与模型组相比,多肽中、高剂量组均可显著提高小鼠血清、肝组织及脑组织中的T-SOD、GSH-Px活性(p<0.05),降低MDA的含量(p<0.05);其中高剂量组血清中T-SOD含量达到177.24 U/mL,MDA含量达到9.05 nmol/mL,GSH-Px达到261.59 U/mL,与空白对照组结果相近。研究结果表明,新疆伊吾县野山杏多肽对衰老模型小鼠具有良好的体内抗氧化作用。

红毛藻抗氧化肽的酶解制备工艺优化及其活性评价

以红毛藻(Bangia fuscopurpurea Lyngb.)蛋白质为原料,采用木瓜蛋白酶酶解方法制备红毛藻抗氧化肽.以酶解产物对1,1-二苯基-2-苦味酰基自由基(DPPH?)清除率为指标,据单因素试验,采用正交试验设计优化酶解制备抗氧化肽工艺,并评价多肽的抗氧化活性.结果表明,木瓜蛋白酶酶解红毛藻蛋白制备多肽的最佳酶解工艺参数为:酶解温度50℃、酶解时间120 min、pH 6.0、酶底比为1250 U/g.在最佳酶解工艺条件下,红毛藻蛋白水解度为13.85%±0.29%,酶解产物对DPPH?清除率达到87.46%±0.76%.酶解产物具备一定的还原力,且对DPPH?和超氧阴离子自由基(O2-?)的半数清除浓度(IC50)分别为(0.4514±0.0033)mg/mL和(3.3612±0.0376)mg/mL.

酶解文蛤制备低分子肽的研究

以新鲜文蛤为原料,采用胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶及木瓜蛋白酶等酶类,进行酶法制备低分子肽的研究。以水解度为指标,通过单因素分析和正交试验分析酶解温度、酶解时间、pH值、加酶量等因素对蛋白水解的影响,最终确定胰蛋白酶酶解文蛤制备低分子肽的最佳工艺条件:温度50℃,时间3h,pH7.5,加酶量2%。在优化条件下,水解度(DH)为41.46%,平均肽链长(ALPC)为2.41,说明在优化条件下得到的酶解产物为低分子肽制品。