Autoantibodies against myelin antigens in patients with neuromyelitis optica

In this study, we investigated the clinical relevance of anti-myelin antibodies in patients with neuromyelitis optica (NMO);titers of antibodies against myelin oligodendrocyte glycoproteins, proteolipid proteins and myelin basic proteins were measured in the sera of patients with NMO and compared to healthy controls, as well as to patients with other diseases. The frequency of presence of anti-myelin antibodies in patients with NMO was significantly higher than that in healthy and diseased controls. The expanded disability status scale scores correlated with the titers of the anti-myelin antibodies. Patients with anti-myelin antibody exhibited other autoantibodies significantly more frequently than patients without the antibody. Anti-myelin antibodies may be useful markers for predicting severe clinical courses in patients with NMO.

髓鞘蛋白脂质蛋白多肽_(139-151)诱发实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型

目的 用髓鞘蛋白脂质蛋白多肽 (PLP) 1 39- 1 5 1 诱发实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE)小鼠模型。方法 应用 PLP1 39- 1 5 1 抗原加完全福 (氏 )佐剂免疫 SWXJ小鼠。结果 免疫 1 4～ 2 0 d后小鼠即发病 ,发病率为 80 % ,而且多数呈缓解 -复发型。病理学证实发病小鼠脑和脊髓内具有典型的脱髓鞘改变和炎性细胞浸润。结论 以PLP1 39- 1 5 1 为抗原免疫 SWXJ小鼠诱发 EAE,具有模型稳定、发病率高和缓解 -复发的特点 。

神经髓鞘及脱脂神经髓鞘诱导MS-TCL增殖反应比较

目的 比较神经髓鞘和脱脂神经髓鞘诱导多发性硬化(MS)T淋巴细胞系(TCL)对11种神经髓鞘成份的增殖反应。方法 以2种人神经髓鞘在体外二次致敏,诱导MS-TCL和正常人TCL,用MBP、PLP及其合成多肽等抗原检测PTL的增殖反应。结果 与非脱脂TCL相比,脱脂髓鞘使MS组的免疫反应性显著改变。尤其对PLP6种多肽反应性的改变有统计学差异,总平均阳性孔比较P<0.001(3.41±4.83 vs 5.49±5.31)。结论 髓鞘脱脂使MS组增殖反应显著增加,二组的差别更明显。提示在髓鞘脱脂方面MS和正常人反应的异质性,此点对理解MS的病理机制可能很重要。

脱脂神经髓鞘诱导多发性硬化T淋巴细胞系增殖反应分析

目的 揭示中枢神经髓鞘脱脂过程在多发性硬化 (MS)发生发展中的作用。方法 以人脱脂神经髓鞘二次致敏诱导MS患者T淋巴细胞系 (MS TCL) ,用髓鞘碱性蛋白 (MBP)、蛋白脂蛋白 (PLP)及其合成多肽等抗原检测TCL的增殖反应。结果 MS组对 11种抗原均有较强反应 ,对 7种抗原的反应性与对照组间有差异 (P <0 0 5 ) ,两组总和平均阳性孔比较P <0 0 0 1(5 49± 5 31与3 10± 3 17比较 )。结论 PLP和MBP与MS发病有关 ;M87 10 6、P95 117、P40 6 0、P185 2 0 6等序列可能是致病抗原决定簇 ;MS病人体内可能有神经髓鞘异常脱脂。

多发性硬化症髓鞘素组分特异性抗体分泌细胞

本文用酶联免疫班点法(Elispot)检测了23例临床确诊多发性硬化症(MS)和12例无菌性脑膜炎(AM)患者外周血(PB)和脑脊液(CSF)中髓鞘素碱性蛋白(MBP)、髓鞘素结合糖蛋白(MAG)和含脂质蛋白(PLP)特异性IgG抗体分泌细胞。两组患者CSF中该3种抗体分泌细胞均呈明显增多趋势,MS组尤著,但两组PB中该类细胞数均很少。指示对髓鞘素组分的B细胞免疫应答主要局限于与中枢神经系统(CNS)近邻的CSF中,可能是鞘内合成IgG抗体的重要来源。

小鼠重组鞘磷脂脂蛋白免疫原性多肽片段的原核表达与纯化

目的建立并优化重组小鼠鞘磷脂脂蛋白(PLP)免疫原性多肽片段(PLP139-208)的原核表达方法.方法构建重组质粒PLP-pET-32a(+),利用基因工程技术将质粒转化到BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,进行PLP139-208的原核表达.为提高多肽片段的获得量,从诱导时间、诱导温度2个方面进行原核表达条件优化.诱导表达的蛋白多肽经Ni-NTA树脂纯化后,用Weestern blot法进行蛋白鉴定.结果表达条件优化、并经Western blot法蛋白鉴定后,确定诱导温度23℃、诱导时间20 h、0.5 mmol/L IPTG作为PLP多肽的最适原核表达条件.结论建立小鼠重组PLP139-208蛋白原核表达方法,为改良EAE动物模型的制备方法及研究PLP诱导自身免疫性脱髓鞠病变的机制奠定了实验基础.

佩-梅病一家系临床及PLP1基因突变分析

目的分析1个中国佩-梅病家系的临床特征及遗传学特点,以提高对该病的认识,并为国内佩-梅病患者的确诊、遗传咨询及产前诊断打下基础。方法收集临床诊断为佩-梅病的先证者及其家系成员的临床资料及14例 DNA 样本,对临床症状体征、影像学特点进行分析,并采用多重连接依赖的探针扩增方法进行致病基因 PLP1重复突变检测,确定基因突变类型,分析基因型与表型的关系。结果先证者存在 PLP1基因重复突变,结合先证者及家系中其他男性患者临床特点可确诊为经典型佩-梅病。另检出3例家系中表型正常女性携带 PLP1基因重复突变。结论该家系由PLP1基因重复突变导致经典型佩-梅病,符合国外报道的基因型-表型关系;上述结果是为该家系提供可靠遗传咨询及产前诊断的依据;多重连接依赖的探针扩增这一新方法可用于快速、准确地检测PLP1的全基因重复。

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的基因芯片研究

目的 用 4 0 96点基因芯片筛选实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型有表达差异的基因。方法 将 4 0 96条基因cDNA产物按微矩阵排列点样在玻片上。以髓鞘蛋白脂质蛋白多肽139 15 1及福氏佐剂为抗原免疫SJL小鼠 ,取免疫后 3～ 4周急性发病的小鼠及同代正常小鼠各 6只 ,每一只急性发病的小鼠及其对照为一组 ,分别取全脑组织 ,于 - 80℃冰箱保存。提取小鼠全脑组织总RNA ,RT PCR逆转录成cDNA。标记cDNA探针 ,分别用cy3 dUTP、cy5 dUTP标记正常小鼠和实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的cDNA。将基因芯片和杂交探针变性后杂交 ,洗干。用ScanArray4 0 0 0扫描芯片 ,GenePixPro 3 0软件分析cy3、cy5两种荧光信号的强度和比值。结果 1～ 6组中筛选出差异表达的数据分别为 4 3、30、176、76、2 94和 12 9项。这些基因在与两种探针杂交时表现出一定的差异。 6个组中一致发现表达异常的基因涉及了免疫相关基因、细胞骨架蛋白基因、细胞周期相关基因、能量代谢相关基因、蛋白质合成相关基因、信号转导及离子通道相关基因等广泛的基因变化。结论 除免疫相关基因外 ,细胞骨架蛋白相关基因、能量代谢相关基因、蛋白质合成相关基因、细胞周期相关基因、离子通道相关基因等可能参与了自身免疫性脑脊髓膜炎的发病。

结合脂蛋白肽136-150修饰抗原肽与实验性变态反应脑脊髓炎

目的 观察结合脂蛋白肽 136 15 0 (PLP136 15 0 )修饰抗原肽是否具有引起脑脊髓炎(EAE)的可能性。方法 用 2 0 0 μgPLP136 15 0修饰抗原肽分组免疫SJL/J雌性小鼠 ,诱导主动EAE。对未发生主动EAE组小鼠再用已免疫抗原 5 0 μg重复接种 1次 ,继而建立短期T细胞株。用PLP136 15 0或修饰抗原肽 2 0 μg/ml分别刺激T细胞并将得到的T淋巴母细胞转移给同种小鼠 [(1～ 2 )× 10 7/鼠 ]以诱发被动EAE。结果 在 2 2个一位氨基酸被替换的修饰抗原肽中除 144A、K外 ,2 0个均成功诱发主动EAE ,一位氨基酸变异的 144A、K ,及双位 (143A/ 145A ,145A/ 148K)和三位 (139A/ 144A/ 148A)氨基酸被替换的修饰抗原虽不能引起主动EAE ,但若将这些抗原诱导、建立并刺激的T细胞株转移给同种小鼠可引起被动EAE ,而接受PLP136 15 0刺激的同种T细胞的小鼠不发生被动EAE。

G蛋白偶联受体56参与轴突发育和髓鞘化

目的：探讨G蛋白偶联受体56（G-protein coupled receptor 56，GPR56）对小鼠脑胼胝体白质内轴突发育和髓鞘化的影响。方法筛选出 Gpr56基因杂合型（Gpr56^＋/-）和敲除型（Gpr56^-/-）小鼠64只，随机数字法分为2组：Gpr56^＋/-和Gpr56^-/-组，每组32只。每组根据小鼠出生后时间分为出生后7 d、14 d、21 d、28 d （P7 d、P14 d、P21 d、P28 d）四个亚组。应用免疫组化染色和Western Blot方法监测神经纤维丝蛋白（NF-200）、髓鞘蛋白脂质蛋白（PLP）在出生后P7 d、P14 d、P21 d、P28 d 的 Gpr56^＋/-和 Gpr56^-/-小鼠脑胼胝体白质中的表达；用 P1d Gpr56^＋/-和Gpr56^-/-小鼠皮质做体外神经元培养，观察两组神经元轴突的长短；用电镜观察P28d Gpr56^＋/-和Gpr56^-/-小鼠胼胝体白质内轴突髓鞘化，比较轴突直径的大小。结果与Gpr56^＋/-小鼠比较，NF-200和 PLP蛋白在P14 d、P21 d、P28 d 的Gpr56^-/-小鼠脑胼胝体白质中的表达明显下降。Gpr56^-/-神经元轴突明显短于Gpr56^＋/-神经元。电镜见P28d Gpr56^-/-小鼠脑胼胝体白质内髓鞘化轴突的数量明显减少，轴突直径明显变小。结论 GPR56蛋白分子可能参与了脑白质轴突轴突发育和髓鞘化。

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的基因芯片研究

目的用4096点基因芯片筛选出实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的表达差异的基因。方法将4096条基因cDNA产物按微矩阵排列点样与玻片上。以髓鞘蛋白脂质蛋白多肽139-151及福氏佐剂为抗原免疫 SJL小鼠,取免疫后3-4周急性发病的小鼠的全脑组织及同代正常小鼠的全脑组织于-80℃冰箱保存。提取小鼠全脑组织总RNA,RT-PCR逆转录成cDNA。标记cDNA探针,分别用cy3-dUTP、cy5-dUTP标记正常小鼠和实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的cDNA。将基因芯片和杂交探针变性后杂交,洗干。用Scan Array4000扫描芯片,GenePix Pro3.0软件分析cy3、cy5两种荧光信号的强度和比值。结果筛选出Ratio大于2或小于0.5的数据。1组中筛选出差异表达的数据43项,2组中出现差异表达的数据30项,3组中出现差异表达的数据176项,4 组中筛选出差异表达的数据76项,5组中筛选出差异表达的数据294项,6组中选出差异表达的数据129项。这些基因在与两种探针杂交时表现出一定的差异。6个组中一致发现表达异常的基因涉及了免疫相关基因,细胞骨架蛋白基因,细胞周期相关基因,能量代谢相关基因、蛋白质合成相关基因、信号转导及离子通道相关基因等广泛基因的变化。结论除免疫相关基因外,细胞骨架蛋白相关基因、能量代谢相关基因、蛋白质合成相关基因、细胞周期相关基因、离子通道相关基因等参与了自身免疫性脑脊髓膜炎的发病。