成肌调节因子MyoD与myogenin在肌肉损伤修复过程的动态变化

目的探讨成肌调节因子MyoD与myogenin在肌肉损伤修复过程中的动态表达。方法用盐酸布比卡因局部注射制作肌肉损伤模型,在损伤后不同时间点取腓肠肌行冰冻切片,HE染色显示损伤肌肉的病理变化,用SABC法检测MyoD与myogenin的表达。结果MyoD在肌肉损伤后18 h开始表达,48 h达高峰;myogenin在肌肉损伤后24 h开始表达,72 h达高峰。结论MyoD与myogenin在肌肉损伤后的再生修复过程中起作用,可作为鉴定肌肉前体细胞和反映肌肉再生的指标。

MyoD1、Myogenin在儿童横纹肌肉瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨MyoD1、Myogenin在儿童横纹肌肉瘤(Rhabdomyosarmma,RMS)及其他3种儿童小细胞恶性肿瘤中的表达情况及其临床意义。方法:选取胚胎型横纹肌肉瘤(Embryonal rhab domyosarcoma,ERMS)11例,腺泡型横纹肌肉瘤(Alveolar rhab domyosarcoma,ARMS)5例,神经母细胞瘤、恶性淋巴瘤、尤文肉瘤各10例,行HE染色,并应用S-P免疫组织化学染色法检测MyoD1、Myogenin蛋白在这4种儿童小细胞恶性肿瘤中的表达水平。结果:MyoD1、Myogenin在RMS中阳性表达率分别为7:5%,68.75%,在其他3种肿瘤中阳性表达率均为0%,MyoD1、Myogenin在RMS组中的表达与其他肿瘤组比较差异有统计学意义(P<0.05),2种蛋白在ARMS中的阳性表达率明显高于ERMS(P<0.05),其恶性程度越高,MyoD1和Myogenin阳性表达越强(P<0.05)。MyoD1、Myogenin在预后差组中的阳性表达率明显高于预后中组(P<0.05)。结论:MyoD1、Myogenin可以作为辅助鉴别RMS及其他小细胞恶性肿瘤的依据;MyoD1、Myogenin基因可以作为辅助诊断儿童RMS的综合指标,也可作为鉴别儿童ERMS和ARMS有用的分子生物学标志;检测儿童RMS中MyoD1、Myogenin的表达情况对RMS恶性程度及预后的判断有一定的临床指导意义。

急性骨骼肌钝挫伤修复过程及MyoD、Myogenin变化的实验研究

目的:观察小鼠急性骨骼肌钝挫伤后骨骼肌动态修复过程,探讨伤后Myo D和Myogenin的作用。方法:以雄性C57BL/6小鼠为研究对象,制作腓肠肌钝挫伤模型,分为正常对照组和损伤后12 h、1 d、3 d、5 d、7 d、14 d组。经HE染色和Masson三色染色观察骨骼肌钝挫伤后再生和纤维化瘢痕愈合过程;经免疫蛋白印迹法与免疫组织化学法检测Myo D和Myogenin定量与定位表达变化。结果:(1)骨骼肌钝挫伤后3 d首次观察到新生肌细胞核,伤后5 d开始出现胶原纤维。(2)MyoD伤后1 d表达至高峰,随后下降,伤后14 d再次表达至第2高峰;MyoD阳性细胞核由正常肌细胞边缘逐渐迁移至受损骨骼肌周围聚集。(3)Myogenin伤后3 d开始表达至高峰;Myogenin阳性细胞核伤后3 d首次出现在新生成肌细胞核上,伤后5 d在新生肌管中表达,伤后7 d逐渐迁移至新生肌细胞边缘表达。结论:骨骼肌急性钝挫伤后MyoD和Myogenin表达具有时间规律性,新生肌纤维和纤维化共同完成骨骼肌钝挫伤后的愈合过程。

Myogenin mRNA丰度在金华猪和长白猪背最长肌中的表达

运用半定量RT-PCR方法对不同生长阶段金华猪和长白猪背最长肌中肌细胞生成素(Myogenin,MyoG)基因mRNA的表达丰度进行测定,分析与肌肉沉积的关系。结果表明:在2种猪35、80、125日龄均可检测到MyoG mRNA,金华猪背最长肌中MyoG基因的表达随着年龄和胴体瘦肉率的增加而增加,并且MyoG基因表达与胴体瘦肉率呈正比;而长白猪背最长肌中MyoG基因的表达恰好相反。除35日龄以外品种间无显著差异。

鸡Myogenin基因单核苷酸多态检测及群体遗传分析

肌纤维在决定肌肉生长和肉质方面起主要作用,并受到MyoD基因家族的调控。该家族基因编码螺旋-环-螺旋蛋白。以鸡Myogenin基因为候选基因,通过PCR-SSCP分析该基因5′调控区的变异。结果表明,在鸡Myogenin基因5′调控区存在3处SNPs,这些SNPs产生的不同基因型及等位基因在7个品种鸡间分布存在极显著的差异(P<0.001)。推测该基因的变异对鸡生长发育可能有一定的影响。

大负荷运动后不同时相大鼠骨骼肌成肌调节因子MyoD、myogenin表达的变化

目的:研究力竭游泳运动及恢复期大鼠骨骼肌成肌调节因子MyoD、myogenin蛋白表达的变化,以进一步探讨运动导致的骨骼肌微损伤后的再生修复机制。方法:36只8周龄健康雄性SD大鼠随机分为安静对照组(C)、力竭运动后即刻组(E0)、力竭运动后12h组(E12)、力竭运动后24h组(E24)、力竭运动后48h组(E48)和力竭运动后72h组(E72)6组,每组6只。各力竭运动组进行为期1周的负重力竭性游泳运动,并于末次力竭运动后不同时间点取样。采用SABC-DAB免疫组化方法检测大鼠比目鱼肌和股外侧肌中成肌调节因子MyoD、myogenin蛋白表达。结果:C、E0、E12组大鼠比目鱼肌和股外侧肌未见MyoD与myogenin蛋白表达;E24组比目鱼肌MyoD有一定数目的表达,E48组表达数目较多,E72组有所降低,但仍多于E24组;E24组比目鱼肌myogenin有少量表达,E48组表达量也较少,但比E24组多,E72组表达数目明显增多。阳性细胞核数目(均数/视野)统计结果为:C、E0、E12组比目鱼肌MyoD均为0;E24:7.6个/视野;E48:22.2个/视野(较多);E72:13.1个/视野;C、E0、E12组比目鱼肌myogenin均为0;E24:2.0个/视野;E48:3.2个/视野;E72:12.0个/视野(较多)。大鼠股外侧肌MyoD、myogenin表达趋势与比目鱼肌基本一致。结论:力竭游泳运动及恢复期不同时相,大鼠骨骼肌成肌调节因子MyoD、myogenin蛋白表达呈规律性变化,大鼠比目鱼肌和股外侧肌MyoD蛋白表达量在大负荷运动后48h较高,myogenin蛋白表达量在大负荷运动后72 h较高。

Myogenin基因的分子生物学综述

对肌细胞生成素 (myogenin ,MyoG)的作用机制及其基因的定位、结构。

儿童横纹肌肉瘤中Myogenin蛋白的检测及其诊断价值

目的 :横纹肌肉瘤是儿童期最常见的软组织肉瘤 ,因其组织学常呈现低分化状态 ,故与其它儿童小圆细胞瘤的鉴别诊断十分困难。本实验初步探讨应用Westernblotting方法检测生肌转录因子基因家族成员之一—Myogenin蛋白以作辅助诊断的可行性。方法 :提取 8例横纹肌肉瘤及 2 0例其它儿童实体肿瘤新鲜组织中的蛋白质 ,进行SDS—PAGE电泳 ,然后将蛋白转移至硝酸纤维膜 ,作Westernblotting蛋白质杂交 ,对印迹进行分析。结果 :8例横纹肌肉瘤均有明显的Myogenin蛋白印迹 ,在 1例肾母细胞瘤中呈假阳性 ;用Westernblotting方法可检测到仅 5 μg组织蛋白中Myogenin蛋白的表达。 结论 :用Westernblotting方法检测Myogenin蛋白对于横纹肌肉瘤具有极高的灵敏度和较好的特异性 ,因而有一定诊断应用价值。

小细胞恶性肿瘤MyoD1、myogenin的染色敏感性和特异性

目的 :研究肌源性调节蛋白在小细胞恶性肿瘤病理诊断与鉴别诊断中的作用。方法 :应用免疫组化S P法 ,对 5 6例小细胞恶性肿瘤 ,包括 19例的胚胎性横纹肌肉瘤、6例的腺泡状横纹肌肉瘤、3例的Wilm瘤、14例的Ewing肉瘤 /PNETs、14例的神经母细胞瘤以及 4例的多形性横纹肌肉瘤行MyoD1、myogenin、MSA、desmin、myoglobin和CD99染色标记。 结果 :MyoD1和myogenin阳性核染色分别见于 2 1/ 2 9(72 4 1% )和 2 0 / 2 9(6 8 97% )的横纹肌肉瘤。除多形性横纹肌肉瘤外 ,4例MyoD1与5例myogenin核染色阴性者没有重叠。 3例Wilm瘤中 2例幼年型MyoD1核染色阳性 ,而myogenin只有 1例核染色阳性 ,另1例成年型Wilm瘤二者均染色阴性。 14例的Ewing肉瘤 /PNETs和 14例的神经母细胞瘤未见核阳性染色。MyoD1和myo genin核阳性染色与横纹肌肉瘤的分化程度呈负相关 ,在较小的原始肿瘤细胞中MyoD1和myogenin核染色比例较高 ,而具有骨骼肌分化的、较大的横纹肌母细胞核阳性染色比例较低。在横纹肌肉瘤中 ,MyoD1阳性核染色的肿瘤细胞比myogenin多 ,myogenin多在小的肿瘤细胞核上染色 ,而MyoD1无论小的原始肿瘤细胞或是稍大的具有骨骼肌分化的肿瘤细胞均有不同程度的表达。MSA、desmin和myoglobin在小细胞肿瘤中染色的敏感性较低。

牙鲆Myogenin蛋白在大肠杆菌中重组表达的研究

采用大肠杆菌表达系统及pProEXTMHTc表达载体对牙鲆肌肉发生调节因子myogenin基因进行了体外重组表达研究。通过对诱导时间、IPTG诱导浓度以及诱导温度的优化,确定了最佳诱导条件为:诱导温度31℃,IPTG终浓度0.6mmol/L,诱导时间2 h。在该条件下,重组蛋白表达量最高且是可溶性的。Myogenin融合蛋白的成功表达为进一步深入研究其在牙鲆肌肉发育过程中的分子机制奠定了基础。

失喉返神经支配的人环杓后肌成肌调节因子myogenin表达的变化

目的：观察不同时限失神经状态下人环杓后肌成肌调节因子myogenin的表达变化,为喉神经修复时限的选择奠定基础。方法：取38例喉返神经完全离断患者的环杓后肌标本,按神经离断时限分为4组：失神经6-12个月（n=12）、1-2年（n=10）、2-3年（n=8）及〉3年组（n=8）,另取12例正常环杓后肌标本作为对照,各组患者的年龄、性别比例具有可比性。免疫荧光染色、实时定量PCR法比较各组环杓后肌myogenin蛋白及mRNA的表达。结果：免疫荧光染色结果显示：myoge-nin阳性表达主要定位于失神经3年内的环杓后肌肌细胞核,对照组正常环杓后肌基本无阳性表达;与正常对照组相比,失神经6-12个月组肌细胞核myogenin表达程度及阳性细胞百分比升高,1-2年组表达最高,2-3年组逐渐下降,但仍显著高于对照组（P均〈0.01）,而3年以上组基本无阳性表达,与对照组无显著差异。实时定量PCR结果表明：对照组myogenin mR-NA未表达,失神经1-2年组myogenin mRNA表达水平为6-12个月组的4倍,失神经2-3年组为其64倍,失神经3年以上组仅为其1/2（P均〈0.01）。结论：失喉返神经支配的环杓后肌肌纤维3年内有较大的再生潜力。

高选择性神经损伤模型骨骼肌MyoD和myogenin mRNA的表达

为观察成肌调节因子MyoD和myogenin mRNA在单纯运动神经或/和单纯感觉神经损伤后萎缩骨骼肌中的表达,探讨其在失神经骨骼肌萎缩发生发展中的可能作用,我们分别切断大鼠左侧L4～L6脊神经腹根、背根或坐骨神经制备选择性神经损伤模型,并将动物分成腹根切断组(VRT),背根切断组(DRT)和坐骨神经切断组(SNT)。于术后2、4周应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),分别检测和观察腹根、背根及坐骨神经切断组大鼠腓肠肌中MyoD和myogenin mRNA表达的变化。结果显示:与相同时间点正常对照侧相比较,各组大鼠腓肠肌MyoD和myogenin mRNA的表达均增加。4周时不同损伤类型间比较,myogenin mRNA表达差异具有显著性(P<0.05)。以上结果提示,MyoD和myogenin可能参与了神经损伤后骨骼肌的再生修复过程,但两者作用于成肌分化的不同阶段,且作用不同。

乙醇对肌肉卫星细胞myogenin表达的影响

目的:探讨慢性酒精中毒过程中乙醇对肌肉卫星细胞myogenin表达的影响及其在酒精性肌肉损伤中的作用。方法:(1)体外实验:取Sprage-Dowley大鼠,原代培养大鼠肌肉卫星细胞,设实验组(乙醇作用组)与对照组(正常培养液对照组),培养细胞至80%融合时,更换为分化培养液,对实验组与对照组卫星细胞形成的肌管计数,并观察卫星细胞myogenin的表达。(2)动物实验:予小鼠乙醇饮食(1个月)制造乙醇中毒动物模型,在损伤后肢肌肉后第2、7天取组织切片观察损伤部位肌肉卫星细胞增殖及新肌束形成情况。结果:实验组肌管计数及卫星细胞myogenin的表达均低于对照组(P<0.05),但乙醇饮食小鼠损伤肌肉标本中卫星细胞及新肌束数量与正常饮食小鼠差异无统计学意义(P>0.05)。结论:乙醇可以通过降低肌肉卫星细胞的myogenin表达抑制其肌性分化,减少卫星细胞形成肌管的数量。

PI3K/AKT信号通路调控Myogenin和MCK基因的表达

骨骼肌分化过程受多个信号通路调控,PI3K/AKT信号通路是其中最重要的信号转导通路之一。PI3K/AKT信号通路可以调控骨骼肌分化,但在染色质水平上的调控机制还不是很清楚。文章以小鼠成肌细胞(C2C12)为研究材料,采用免疫印迹、染色质免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation,ChIP)、定量PCR(Q-PCR)的方法研究PI3K/AKT信号通路调控Myogenin和MCK基因的表达。研究发现,C2C12细胞分化过程中添加PI3K/AKT信号通路激活剂处理24 h,Myogenin和MCK蛋白表达水平显著升高,组蛋白H3K27me3去甲基化酶UTX的表达也升高,H3K27me3在Myogenin基因启动子区和MCK基因启动子及增强子区的富集与对照组相比显著降低。用PI3K/AKT信号通路抑制剂处理,结果相反。因此,PI3K/AKT信号通路可能通过调控组蛋白去甲基化酶UTX的表达活性改变靶基因的H3K27me3的富集进而调控骨骼肌分化。

力竭离心运动对发育期大鼠骨骼肌MyoD、myogenin表达的影响

目的:研究不同时间力竭离心运动后发育期大鼠骨骼肌成肌调节因子Myo D、myogenin的表达情况,探讨力竭离心运动对发育期大鼠骨骼肌纤维类型转化的影响机制.方法:健康4周龄雄性SD大鼠24只,随机分为安静对照组(NC),3周训练组(T3),6周训练组(T6),每组8只.采用RT-PCR检测Myo D、myogenin的表达.结果:力竭离心运动后,发育期大鼠比目鱼肌与股四头肌中Myo D、myogenin均有表达;运动3W后,比目鱼肌中Myo D表达上调(P﹤0.05),myogenin表达下调(P﹤0.05);运动6周后,与对照组相比,比目鱼肌中Myo D、myogenin的表达有些微变化,但不具统计意义.力竭离心运动不同时间后股四头肌中Myo D表达均明显上调(P﹤0.05)且与运动时间成正比;myogenin表达基本没有变化.结论:力竭离心运动能影响发育期大鼠骨骼肌中Myo D、myogenin的表达,并在不同部位影响不一致,且为非线性变化,可能受生长发育阶段的影响且与运动时间有关.

组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9对myogenin基因表达的影响

目的利用本组构建的小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9真核表达质粒及RNA干扰(siRNA)质粒,在体外成肌细胞分化模型C2C12细胞中检测SET7/9对肌肉分化关键基因myogenin基因表达的影响。方法转染SET7/9真核表达质粒pCMV-3tag-6-SET7/9至C2C12细胞,Western blot技术验证其表达;利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测SET7/9对myogenin基因mRNA水平的影响;利用双荧光素酶报告系统检测SET7/9对myogenin基因启动子活性的影响;转染SET7/9的siRNA质粒,利用Real-time PCR技术检测其抑制效果以及对myogenin mRNA水平的影响。结果 SET7/9真核表达质粒pCMV-3tag-6-SET7/9可在C2C12细胞中有效表达;SET7/9可使myogenin mRNA水平升高并能够促进myogenin启动子活性升高;干扰SET7/9表达可使myogenin mRNA水平降低。结论组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET7/9可激活肌肉分化关键基因myogenin的转录。

湖羊Myostain和Myogenin基因表达的发育性变化及与屠宰性状的关联分析

【目的】探讨湖羊肌肉生长抑制素(myostain,MSTN)和生肌调节因子(myogenin,MyoG)基因表达的发育性变化及其与屠宰性状的相关性以及这两个基因表达水平的关联性。【方法】利用RT-PCR分析MSTN和MyoG基因在湖羊早期生长背最长肌肉组织中的mRNA的发育性变化。【结果】湖羊MSTN基因在肌肉中的表达在2日龄时表达水平最低,并随着日龄增加而增加直到60日龄为止,而后随着年龄增加而下降。湖羊MyoG基因在2日龄时表达最低,在30日龄之前随着日龄的增加而增加,然后在30日龄后下降,公羊直到120日龄、母羊直到90日龄为止,然后随着日龄的增加而又增加。MSTN和MyoG基因在湖羊各生长阶段间大多存在显著或极显著差异。湖羊公羊与母羊MSTN和MyoG基因之间在各相同生长阶段间大多存在显著或极显著差异。MSTN和MyoG基因表达水平与宰前活重、胴体重和净肉重均呈正相关,但只有MSTN和净肉重呈显著正相关(0.01<P<0.05),MSTN基因和MyoG基因的表达存在极显著正相关(P<0.01)。【结论】性别和年龄对于MSTN和MyoG基因在湖羊肌肉中的表达具有重要影响。MSTN、MyoG基因在不同生长阶段的公羊和母羊中的表达模式相似。MSTN和MyoG基因在湖羊不同生长阶段的肌肉中的表达均没有出现随着日龄的增加而一直增加或下降的趋势。MSTN基因和MyoG基因在湖羊早期肌肉性状中的表达为正相关。

鸡AChRγ亚基基因远端E盒子与myogenin的相互作用

业已证明，鸡ｎＡｃｈＲγ亚基基因５＇连接区，－５０９／－３０２，－３２４／＋３６片段可独立激活异源启动子ＳＶ４０的转录活性；γ基因近端两个Ｅ盒子（ＣＡＮＮＴＧ）与生肌调节因子（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）的相互作用及转录激活分析表明，近端两个Ｅ盒于是γ启动子活性必不可少的，但却是不充分的。利用胶阻滞和ＤＮａｓｅⅠ足纹试验观察了鸡ｎＡｃｂＲγ基因远端Ｅ盒子与ＧＳＴ－ｍｙｏｇｅｎｉｎ融合蛋白的相互作用。胶阻滞试验证明，－５３８／－２８８片段可与ｍｙｏｇｅｎｉｎ相互结合，引起（３２）￣ｐ标记的ＤＮＡ片段在ＰＡＧＥ中迁移率减慢，这种胶阻滞现象可被含Ｅ盒子的未标记片段消除，并被抗鸡ｍｙｏｇｅｎｉｎ单克隆抗体或抗血清所改变。ＤＮａｓｅⅠ足纹试验证明，ｍｙｏｇｅｎｉｎ系通过γ基因转录起始点上游－４２９／－４２４及－４６３／－４５８两个Ｅ盒子与γ基因５＇连接区－５３８／－２８８相互作用。

Myogenin蛋白在五指山猪和长白猪骨骼肌中的表达

本研究采用免疫荧光及免疫组化DAB显色技术来检测Myogenin蛋白在五指山猪和长白猪胎儿和成年猪的骨骼肌中的定位和表达情况,并通过平均光密度统计分析Myogenin蛋白在五指山猪和长白猪胎儿和成年猪骨骼肌中表达水平。结果表明:Myogenin蛋白表达定位于骨骼肌细胞核表达;在五指山猪和长白猪胎儿和成年猪的腿部骨骼肌和背部骨骼肌中均检测到阳性产物,在猪胎儿期间骨骼肌中Myogenin蛋白的表达水平高于其在成熟猪骨骼肌中的表达;且在同种猪腿部骨骼肌中的表达水平显著高于其在背部骨骼肌中的表达;此外还检测到Myogenin蛋白在五指山猪骨骼肌中表达均显著高于其在长白猪骨骼肌中的表达(p<0.05)。本研究得到的Myogenin蛋白在五指山猪和长白猪骨骼肌中存在显著的表达差异结果,为今后研究不同猪种间骨骼肌发育差异及探讨五指山猪矮小机制和发育机理提供了理论基础。

伴有下斜肌功能亢进外斜V征眼外肌myogenin的研究

目的:观察伴有下斜肌功能亢进的外斜V征患者下斜肌和内直肌中myogenin活性卫星细胞数量的变化,探讨伴有下斜肌功能亢进的外斜V征的可能发病原因。方法:将伴有下斜肌功能亢进外斜V征患者6例中切除的下斜肌及内直肌作为斜视组,行myogenin免疫组织化学染色,统计myogenin阳性染色的卫星细胞核数;角膜移植供体的下斜肌及内直肌(6例)作为对照组。结果:斜视组和对照组下斜肌中myogenin免疫染色阳性肌卫星细胞数占总细胞数比例分别为(22.7±7.03)%和(4.2±0.75)%,具有统计学差异(P<0.05)。斜视组和对照组内直肌中myogenin免疫染色阳性的肌卫星细胞数分别为(2.2±0.75)%和(4.5±1.05)%,具有统计学差异(P<0.05)。结论:首次报道伴有下斜肌功能亢进外斜V征患者眼外肌中表达myogenin免疫染色阳性肌卫星细胞的变化。myogenin可能是伴有下斜肌功能亢进外斜V征的致病因素。