Preliminary research on myosin light chain kinase in rabbit liver

AIM: To study preliminarily the properties of myosin light chain kinase (MLCK) in rabbit liver. METHODS: The expression of MLCK was detected by reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR); the MLCK was obtained from rabbit liver, and its activity was analyzed by gamma-(32)P incorporation technique to detect the phosphorylation of myosin light chain. RESULTS: MLCK was expressed in rabbit liver, and the activity of the enzyme was similar to rabbit smooth muscle MLCK, and calmodulin-dependent. When the concentration was 0.65 mg x L(-1), the activity was at the highest level. CONCLUSION: MLCK expressed in rabbit liver may catalyze the phosphorylation of myosin light chain, which may play important roles in the regulation of hepatic cell functions.

柴胡皂苷A调节MLCK/MLC2信号通路对SAP大鼠肠损伤的影响

目的探讨柴胡皂苷A调节肌球蛋白轻链激酶(MLCK)/肌球蛋白轻链2(MLC2)信号通路对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠损伤的影响。方法随机选择10只大鼠作为假手术组,其余大鼠注射牛磺胆酸钠溶液构建SAP大鼠模型。将造模成功的SAP大鼠模型随机平分为SAP组、柴胡皂苷A组(腹腔注射10.0 mg/kg的柴胡皂苷A)、iE-DAP组(腹腔注射3.5 mg/kg MLCK/MLC2通路激活剂iE-DAP)、柴胡皂苷A+iE-DAP组(腹腔注射10.0 mg/kg柴胡皂苷A+3.5 mg/kg iE-DAP),每组均10只大鼠,每天1次,连续注射1周,假手术组和SAP组注射等量生理盐水。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIP)、二胺氧化酶(DAO)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;HE染色检测各组大鼠回肠组织病理形态变化。ELISA检测各组大鼠回肠组织中氧化应激指标水平。蛋白质免疫印迹检测肠道屏障相关蛋白及MLCK/MLC2通路相关蛋白表达。结果与SAP组相比,柴胡皂苷A组AMY、LIP、DAO、IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著降低,而iE-DAP组AMY、LIP、DAO、IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与SAP组相比,柴胡皂苷A组大鼠回肠组织结构得到改善,回肠组织病理评分显著降低(P<0.05)。与SAP组相比,柴胡皂苷A组谷胱甘肽、超氧化物歧化酶水平显著升高,丙二醛水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与SAP组相比,柴胡皂苷A组MLCK、p-MLC2/MLC2蛋白水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论柴胡皂苷A可能通过下调MLCK/MLC2信号通路对SAP大鼠肠损伤起到改善作用。

生血通便颗粒对血虚肠燥型慢传输型便秘大鼠结肠肌电及Ca^(2+)/CaM/MLCK信号通路的影响

目的观察生血通便颗粒对血虚肠燥型慢传输型便秘(STC)大鼠结肠肌电及Ca^(2+)/CaM/MLCK信号通路的影响,探讨其治疗STC的作用机制。方法采用洛哌丁胺灌胃结合尾部放血法建立血虚肠燥型STC大鼠模型。将大鼠分为对照组、模型组、枸橼酸莫沙必利组和生血通便颗粒组,每组8只,给药组分别予相应药物灌胃,连续14 d。观察大鼠治疗前后一般状况,检测大鼠粪便含水量,生物机能实验系统检测结肠肌电慢波频率、振幅及变异系数,测定肠道推进率,HE染色观察结肠组织病理变化,比色法检测结肠平滑肌细胞Ca^(2+)浓度,Western blot检测结肠平滑肌组织缝隙连接蛋白43(Cx43)、钙调蛋白(CaM)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、磷酸化肌球蛋白轻链20(p-MLC20)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠体质量、粪便含水量和肠道推进率显著降低(P<0.01),结肠肌电慢波频率减慢、频率变异系数增加(P<0.01),慢波振幅和振幅变异系数增加(P<0.01);结肠黏膜结构受损,可见炎性改变,糜烂明显,结肠平滑肌细胞内Ca^(2+)浓度及Cx43、CaM、MLCK、p-MLC20蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,枸橼酸莫沙必利组和生血通便颗粒组大鼠体质量、粪便含水量和肠道推进率显著升高(P<0.05,P<0.01),结肠肌电慢波频率加快、频率变异系数减小(P<0.01),慢波振幅和振幅变异系数减小(P<0.05,P<0.01);结肠黏膜结构较完整,糜烂情况改善,结肠平滑肌细胞内Ca^(2+)浓度及Cx43、CaM、MLCK、p-MLC20蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论生血通便颗粒可改善血虚肠燥型STC大鼠症状,恢复结肠动力,其机制可能与调节结肠肌电节律性、激活Ca^(2+)/CaM/MLCK信号通路相关。

补中益气方通过MLCK/p-MLC_(20)通路调节慢性腹泻大鼠结肠动力的机制研究

目的探讨补中益气方对慢性腹泻大鼠MLCK/p-MLC_(20)通路介导的结肠动力的影响。方法大鼠随机分为正常组,模型组和补中益气低、中、高剂量组。模型组及补中益气方组应用大黄灌胃的方法建立慢性腹泻大鼠模型。慢性腹泻模型建立成功后,补中益气汤颗粒低剂量:0.4725 g/(kg·d),中剂量:0.945 g/(kg·d),高剂量:1.89 g/(kg·d),正常组和模型组则每天给予等体积的生理盐水灌胃。在治疗结束时,检测各组大鼠一般情况如体质量、饮食量、悬空拉尾抵抗实验、免疫指标(胸腺指数、脾脏指数)变化和24小时粪便含水量。进一步探讨机制,采用离体张力测定灌流系统,测定各组大鼠结肠纵行平滑肌肌条收缩力(colonic longitudinal smooth muscle strips,CLSMs)和结肠环型平滑肌肌条(colonic circular smooth muscle strips,CCSMs)的变化,并蛋白印迹法测定磷酸化肌球蛋白轻链(phosphorylation level of myosin light chain,p-MLC_(20))水平及实时荧光定量PCR法检测大鼠结肠组织肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)的表达。结果各组大鼠一般情况比较有统计学意义(P<0.05),与正常组比较,模型组一般情况表现为(体质量下降:P<0.01;饮食量减少:P<0.01;悬空拉尾抵抗实验时间缩短:P<0.01;胸腺指数降低:P<0.01;脾脏指数降低:P<0.01),与模型组比较,补中益气低、中、高剂量组一般情况明显改善(体质量增加:低剂量:P<0.05,中、高剂量:P<0.01;饮食量增多:低剂量:P<0.05,中、高剂量:P<0.01;悬空拉尾抵抗实验时间延长:低剂量:P<0.05,中、高剂量:P<0.01;胸腺指数升高:P<0.01;脾脏指数升高:P<0.01)。各组大鼠粪便含水量差异有统计学意义(P<0.01),与正常组比较,模型组粪便含水量明显增加(P<0.01),与模型组比较,补中益气中、高剂量组粪便含水量明显下降(P<0.01)。同时,正常组、模型组和补中益气中剂量组大鼠结肠CLSMs和CCSMs收缩差异有统计学意义(P<0.05),与正常组比较,模型组大鼠CLSMs和CCSMs收缩张力、振幅、速率明显增加(P<0.01),与模型组比较,补中益气中剂量组大鼠CLSMs和CCSMs收缩张力、振幅、速率有所下降(P<0.05);三组大鼠结肠p-MLC_(20)含量差异有统计学意义(P<0.05),与正常组比较,模型组大鼠p-MLC_(20)含量明显增加(P<0.01),与模型组比较,补中益气中剂量组大鼠p-MLC_(20)含量明显下降(P<0.01);三组大鼠结肠MLCK的表达差异有统计学意义(P<0.01),与正常组比较,模型组大鼠MLCK的表达升高(P<0.01),与模型组比较,补中益气中剂量组MLCK的表达降低(P<0.01)。结论补中益气方对慢性腹泻大鼠治疗作用可能是通过调节MLCK/p-MLC20通路抑制结肠动力来实现的。

子宫肌瘤组织中MMP-2、MLCK、SULT1A3表达及与子宫肌瘤发生的相关性

目的:分析基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和硫酸基转移酶1A3(SULT1A3)在子宫肌瘤组织中的表达及与子宫肌瘤发生发展的可能关系。方法:收集2019年1月-2021年6月在本院行手术切除治疗的子宫肌瘤患者60例子宫肌瘤组织和正常子宫组织,分别采用RT-PCR技术和免疫组化法测定MMP-2、MLCK、SULT1A3的mRNA及蛋白表达,分析各指标表达与子宫肌瘤发生的相关性。结果:子宫肌瘤组织MMP-2(1.61±0.23)、MLCK(11.87±1.60)的mRNA相对表达量均高于正常子宫组织(1.05±0.09、6.14±1.02),SULT1A3的mRNA相对表达量(0.69±0.11)低于正常子宫组织(1.65±0.44);子宫肌瘤组织中MMP-2蛋白阳性率(68.3%)、MLCK蛋白阳性率(76.7%)均高于正常子宫组织(25.0%、26.7%),子宫肌瘤组织SULT1A3蛋白阳性率(61.7%)低于正常子宫组织(100.0%)(均P<0.05)。mRNA表达,MMP-2与MLCK呈正相关,MMP-2、MLCK与SULT1A3均呈负相关性;蛋白表达,MMP-2与MLCK蛋白表达呈正相关,MMP-2、MLCK与SULT1A3蛋白表达均呈负相关性(均P<0.05)。结论:子宫肌瘤组织中MMP-2、MLCK呈高表达,SULT1A3呈低表达,且各指标具有相关性,这种异常表达可能与子宫肌瘤的发生有关。

MLCK敲除对FaDu细胞凋亡的影响

目的构建肌球蛋白轻链激酶(MLCK)敲除的下咽癌FaDu细胞株,并探讨敲除MLCK对FaDu细胞凋亡的影响。方法脂质体转染sgRNA和Cas92NLS Nuclease构建MLCK敲除的FaDu细胞株,提DNA测序确定敲除细胞株,分为对照组、MLCK KO 1组、MLCK KO 2组;采用RT-qPCR、Western blot检测MLCK敲除效率;流式细胞术检测MLCK敲除对细胞周期和凋亡的影响;Western blot检测MLCK敲除对细胞凋亡的影响。结果DNA测序显示在sgRNA序列识别处,MLCK碱基序列发生了缺失或替换;RT-qPCR和Western blot显示MLCK敲除细胞株mRNA和蛋白质水平低于对照组(P<0.0001);流式细胞术实验显示敲除MLCK对FaDu细胞的周期无明显变化,但凋亡率增加(P<0.0001);Western blot检测显示,MLCK敲除组Bax/Bcl-2(P<0.0001)和Cleaved Caspase-3/Caspase-3(P=0.0007)增加。结论敲除MLCK诱导细胞凋亡,但具体机制需进一步研究。

从CaM-MLCK信号通路探究不同频率摩腹对脾虚家兔的手法效应

【目的】通过观察不同频率摩腹对脾虚家兔胃组织钙调蛋白(CaM)-肌球蛋白轻链激酶(MLCK)信号通路的影响,探析摩腹的手法效应。【方法】将72只家兔随机分为空白组、模型组、低频摩腹组(机械臂摩腹101~150次/min)、高频摩腹组(机械臂摩腹201~250次/min)、低频摩腹+抑制剂组[机械臂摩腹101~150次/min+腹腔注射MLCK抑制剂ML-92.0 mg·kg^(-1)]、高频摩腹+抑制剂组(机械臂摩腹201~250次/min+腹腔注射ML-92.0 mg·kg^(-1))。除空白组外,其余各组采用苦寒泻下法联合饥饱失常法构建脾虚家兔模型。干预结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察胃黏膜病理变化,实时定量聚合酶链反应(qPCR)法、Western Blot法分别对应检测胃小弯组织CaM、MLCK的mRNA、蛋白表达水平。【结果】(1)模型组出现明显脾虚症状,低频摩腹组、低频摩腹+抑制剂组、高频摩腹+抑制剂组家兔脾虚症状较模型组改善,而高频摩腹组脾虚症状较模型组加重。(2)与模型组比较,低频摩腹组、低频摩腹+抑制剂组、高频摩腹+抑制剂组家兔胃黏膜组织结构和形态均有所恢复,而高频摩腹组家兔胃黏膜组织结构和形态损伤均有所加重。(3)与空白组比较,模型组家兔胃小弯组织CaM、MLCK的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,低频摩腹组CaM、MLCK的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),高频摩腹组、低频摩腹+抑制剂组与高频摩腹+抑制剂组CaM、MLCK的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。【结论】低频率(101~150次/min)摩腹可通过上调CaM、MLCK mRNA和蛋白表达,促进脾虚家兔胃肠消化功能恢复,具有补的良性效应;相反,高频率(201~250次/min)摩腹一定程度上阻碍了脾虚家兔胃肠消化功能的恢复,具有泻的损益效应,其作用可能与抑制CaM、MLCK mRNA和蛋白表达有关。

地塞米松对哮喘动物模型支气管平滑肌MLCK表达的影响

目的观察地塞米松(DXM)对哮喘动物模型支气管平滑肌肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达的影响,探讨MLCK在哮喘发病中的作用。方法24只♂SD大鼠,随机等分为正常对照组、哮喘模型组和地塞米松组。以卵蛋白(OVA)诱发大鼠支气管哮喘模型。地塞米松组大鼠于每次激发前1h给予腹腔注射地塞米松0.5mg·kg-1。用免疫组织化学法和免疫印迹法分析三组大鼠支气管平滑肌中MLCK表达。结果免疫组织化学法分析显示DXM组大鼠支气管平滑肌MLCK的表达低于哮喘模型组(P<0.05),但与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。同时,免疫印迹法检测也表明哮喘模型组大鼠smMLCK表达高于正常对照组及地塞米松组。结论MLCK参与支气管哮喘的发病,地塞米松通过下调哮喘大鼠支气管平滑肌MLCK表达,可能是糖皮质激素治疗哮喘的一种机制。

通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠c-kit和MLCK表达的影响

目的 探讨通便汤对慢传输型便秘(STC)大鼠结肠组织c-kit、MLCK蛋白及其他细胞因子的影响。方法 采用洛哌丁胺混悬液灌胃法复制STC大鼠模型,随机分为正常组、模型组、通便汤低、中、高剂量组和莫沙必利组。各组予以不同药物干预2周后,检测各组大鼠粪便含水率、小肠活性炭推进率;HE染色观察大鼠结肠病理学特征;酶联免疫法检测结肠一氧化氮(NO)、一氧化氮酶(NOS)的含量;免疫组化法检测结肠c-kit、MLCK的表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠粪便质地干硬,含水率明显下降,小肠活性炭推进率显著下降(P<0.05),结肠组织正常结构被破坏,炎性细胞浸润,结肠组织NO和NOS含量明显上升, c-kit和MLCK蛋白表达明显下降(P<0.05);与模型组比较,通便汤各剂量组增加粪便含水率以及结肠肌层厚度和绒毛高度(P<0.05),提高小肠活性炭推进率,显著上调结肠组织c-kit和MLCK蛋白表达,同时降低结肠组织NO和NOS含量(P<0.05)。结论 通便汤能提高STC大鼠小肠活性炭推进率,增加粪便含水率,改善结肠病理形态,其作用机制可能与调节NO、NOS水平,上调结肠c-kit、MLCK蛋白表达有关。

柴胡疏肝散对胃肠功能紊乱大鼠模型胃肠平滑肌细胞MLCK表达的影响

目的:研究柴胡疏肝散汤剂对胃肠功能紊乱大鼠胃肠平滑肌细胞肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达的影响。方法:将8周龄SD大鼠按随机数字表法分为sham组(对照组)、FGID组(模型组)、sham+柴胡疏肝散组、FGID+柴胡疏肝散组4组各20只。利用腹腔注射利血平建立大鼠胃肠功能紊乱动物模型,利用Real-Time PCR、western Blot和组织免疫荧光技术检测柴胡疏肝散汤剂对胃肠功能紊乱大鼠胃肠平滑肌细胞MLCK表达的影响。结果:Real-Time PCR、Westeron Blot和组织免疫荧光显示FGID组大鼠胃肠平滑肌细胞内MLCK表达量显著减少,经柴胡疏肝散干预后MLCK表达显著上升。结论:柴胡疏肝散汤剂能提高胃肠功能紊乱大鼠胃肠平滑肌细胞内MLCK的表达。

肌球蛋白轻链激酶在恶性肿瘤中的研究进展

近年来,肌球蛋白轻链激酶(MLCK)作为细胞骨架和细胞运动的重要调节因子,在多种肿瘤的发生发展中发挥着关键作用。MLCK通过细胞信号转导,参与调控肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡等生物过程。鉴于MLCK在肿瘤发展中的关键作用,其作为肿瘤治疗的潜在靶点被广泛研究,旨在开发针对MLCK的治疗策略,以提高治疗效率和患者生存质量。本文综述了MLCK在不同类型肿瘤中的表达模式、功能机制及其潜在的临床应用价值,同时探讨了MLCK作为潜在治疗靶点的研究现状及未来发展方向,为临床治疗提供新的思路和策略。

circRNA MYLK基因干扰对胰腺癌PANC-1细胞线粒体膜电位、氧化损伤和微管形成的影响

目的探讨circRNA肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MYLK)基因干扰对胰腺癌PANC-1细胞线粒体膜电位、氧化损伤和微管形成的影响。方法将对数生长期PANC-1细胞分为空白对照组、shRNA-NC组和circMYLK-shRNA组。转染后,采用细胞克隆形成实验检测各组PANC-1细胞的生长。试剂盒检测各组细胞上清液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平。流式细胞仪分析细胞线粒体膜电位。显微镜下观察各组细胞微管结节数。Western blot检测各组细胞Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)/B细胞淋巴瘤2基因(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、原癌基因c-Myc、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和波形蛋白(Vimentin)表达。结果与shRNA-NC组相比,circMYLK-shRNA1组PANC-1细胞的克隆形成率、JC-1红色荧光所占百分比、微管结节数明显降低(P均<0.05);细胞上清中SOD水平明显降低,MDA水平明显升高(P均<0.05);细胞内Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05),c-Myc、VEGF和Vimentin蛋白表达明显降低(P均<0.05)。结论circRNA MYLK基因沉默可以抑制PANC-1细胞增殖能力,降低PANC-1细胞的线粒体膜电位,诱导细胞氧化损伤,抑制微管的形成。

褪黑素通过p38／MAPK信号通路调控oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞MLCK的表达

目的探讨褪黑素(MLT)通过p38/MAPK信号通路调控oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HU-VEC),分空白对照组、DMSO对照组、DMSO+oxLDL组、DM-SO+oxLDL+SB203580组、DMSO+oxLDL+MLT组、DMSO+oxLDL+MLT+SB203580组。RT-PCR、Western blot、γ-32P-ATP掺入法分别检测各组HUVEC MLCK转录、表达和活性及MLT对p38磷酸化的影响。结果RT-PCR显示oxLDL组MLCK转录增强,MLT组与SB203580组均抑制MLCK的转录;Western blot结果表明oxLDL组MLCK表达、p38磷酸化增强,MLT组与SB203580组均抑制MLCK的表达及p38磷酸化;γ-32P-ATP掺入法检测MLCK活性提示oxLDL组MLCK活性增强,MLT与SB203580降低MLCK活性。结论MLT可能通过p38/MAPK通路调控MLCK的转录、表达和活性。

梗阻性黄疸大鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白和MLCK的研究

目的探讨梗阻性黄疸肠黏膜屏障破坏的机制。方法建立梗阻性黄疸大鼠的动物模型,分别于胆管结扎10 d和20 d后,采用免疫组化、Western blot方法检测末端回肠黏膜的紧密连接蛋白成员ZO-1和Occludin与肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的分布和表达。结果正常回肠黏膜层ZO-1和Occludin的分布相似,主要位于上皮细胞的边缘,细胞膜顶端,沿绒毛下方均匀连续分布;MLCK主要分布在细胞浆内。梗阻性黄疸时ZO-1和Occludin分布不均,染色变淡,线条模糊,边缘粗糙有毛刺状突起;MLCK分布散乱,染色稀疏。与对照组相比20 d组和10 d组的ZO-1,Occludin,MLCK数量明显减少,强阳性表达率分别从70.0%,80.0%,70.0%降至10 d组的28.6%,28.6%,28.6%(均P<0.05)和20 d组的ZO-1从10 d组的28.6%降至14.3%,35.7%,21.4%(均P<0.05)。20 d组的ZO-1下降较10 d组更为明显(P<0.05),而Occludin和MLCK变化不明显。Western blot检测的结果与之相似。结论梗阻性黄疸时大鼠小肠黏膜上皮ZO-1,Occludin,MLCK分布紊乱,表达下降,小肠黏膜上皮屏障的完整性破坏。

健脾理气方对功能性消化不良大鼠十二指肠MLCK和PGE2-cAMP通路的影响

目的观察健脾理气方对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)模型大鼠十二指肠肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)和前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)-环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)通路的影响。方法18只SD雄性大鼠采用数字表法随机分为正常组、模型组及中药治疗组(每组6只),以夹尾应激法建立功能性消化不良动物模型,正常组及模型组大鼠均给予0.9%(质量分数)氯化钠注射液灌胃,中药治疗组给予健脾理气方水煎剂灌胃。取大鼠十二指肠组织进行HE染色,观察组织形态,同时应用定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测MLCK和PGE2受体EP1、EP4 mRNA含量,酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法测定PGE2和cAMP的表达。结果模型组大鼠十二指肠MLCK表达升高,PGE2、EP4、cAMP表达下降,EP1未见明显异常,健脾理气方治疗后可明显抑制MLCK表达,升高PGE2、EP4和cAMP表达。结论健脾理气方可以抑制MLCK mRNA表达,同时上调PGE2-EP4-cAMP信号通路表达,这可能是健脾理气方治疗FD的机制之一。

非肌型肌球蛋白轻链激酶的结构、功能及其生理与病理学意义

肌球蛋白轻链激酶(myosin light-chain kinase,MYLK)在哺乳动物中由MYLK基因编码,编码的产物主要包括长链非肌型肌球蛋白轻链激酶(non-muscle myosin light-chain kinase,nm MYLK,220 kDa),短链平滑肌型肌球蛋白轻链激酶(smooth muscle myosin light-chain kinase,sm MYLK,130 kDa)及端蛋白(telokin)(17 kDa)。其中nm MYLK的特殊N端结构域赋予其参与更多病理生理学过程的特性,包括炎症、细胞黏附、肿瘤细胞浸润、动脉粥样斑块形成等。本文综述nmMYLK的结构、功能研究进展,梳理nmMYLK与炎症、癌症及其他疾病间的关系。

细菌脂多糖诱导人肺动脉内皮细胞表达P-MLCK

目的探讨细菌脂多糖(LPS)对人肺动脉内皮细胞(HPAEC)表达磷酸化肌球蛋白轻链激酶(phosphorylated myosin lightchain kinase,P-MLCK)的诱导作用。方法体外培养HPAEC,分别给予生理盐水和2μg/mL LPS孵育1 h,经免疫荧光显微镜和Western blotting检测P-MLCK。结果与生理盐水组比较,LPS刺激HPAEC后较生理盐水组细胞数量减少,细胞形态无明显改变。HPAEC在LPS刺激30、60 min后,P-MLCK表达由0.41±0.05分别增加至0.82±0.43和1.56±0.07(P<0.05,P<0.01),同时LPS 30 min组和60 min组比较有显著性差异(P<0.05);LPS刺激60 min后P-MLCK免疫反应细胞由1.25±2.1增加至16.4±4.8(P<0.01)。结论P-MLCK可能与LPS诱导的急性肺损伤所致的内皮细胞屏障功能障碍有关。

MLCK和CX32在不同结肠癌组织中的表达及与临床病理的关系

目的探究肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、间隙连接蛋白32(CX32)在不同结肠癌组织中的表达及与临床病理的关系。方法采用前瞻性研究方法,选取2016年1月至2019年12月西安医学院第二附属医院收治的122例结肠癌患者的癌组织作为观察组,另选取其癌旁正常组织作为对照组。对比两组、不同临床病理特征患者MLCK、CX32的阳性表达率,分析MLCK、CX32与临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier曲线分析中位生存期(MST),比较不同MLCK、CX32表达患者的MST情况。结果观察组MLCK阳性表达率82.79%(101/122)高于对照组44.26%(54/122),CX32阳性表达率20.49%(25/122)低于对照组66.39%(81/122),差异均具有统计学意义(P<0.05);不同分化程度、TNM分期、远处转移、淋巴结转移、结肠癌患者MLCK、CX32阳性表达率差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析显示,MLCK阳性表达率(r=0.368、0.374、0.401、-0.482)与TNM分期、淋巴结转移、远处转移呈正相关,与分化程度呈负相关;CX32阳性表达率(r=-0.459、-0.516、-0.643、0.611)与TNM分期、淋巴结转移、远处转移呈负相关,与分化程度呈正相关(P<0.05);随访5年,脱落6例,Kaplan-Meier曲线分析显示,116例结肠癌患者MST为48.46个月,MLCK阳性表达患者MST 47.74个月短于阴性表达患者52.65个月,CX32阳性表达患者MST 53.67个月长于阴性表达患者47.31个月,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论MLCK、CX32在结肠癌组织异常表达,与临床病理因素密切相关,观察上述指标有助于预测结肠癌患者生存状况。

地衣芽孢杆菌制剂对非酒精性脂肪性肝病大鼠模型肝脂肪变性及肠黏膜屏障功能的影响

目的通过建立非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型,探讨地衣芽孢杆菌制剂对大鼠肝组织病理学及肠黏膜屏障功能的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(Control组,n=5)、模型组(Mod组,n=15)、地衣芽孢杆菌低剂量组(BLL组,n=5)和地衣芽孢杆菌高剂量组(BLH组,n=5)。Control组给予普通饲料喂养,Mod组、BLL组、BLH组给予高脂饲料喂养16周,其中BLL组、BLH组在高脂饲料喂养8周后,分别予地衣芽孢杆菌制剂灌胃2.5×10^(7)CFU/kg、5.0×10^(7)CFU/kg,每天1次,持续8周。8周干预结束后,检测大鼠血清ALT、AST、TC、TG、空腹血糖(FPG)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、IL-6、IL-1β和TNF-α水平。HE染色观察肝组织病理学改变并根据NAFLD活动度积分(NAS)评分。透射电镜下观察肠黏膜紧密连接结构。免疫组化染色观察肠黏膜肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达。实时定量PCR检测肠黏膜MLCK的mRNA水平。高通量16S rRNA测序法分析肠道菌群组成。采用单因素方差分析进行多组间比较,多重比较采用Bonferroni法。结果与Mod组相比,BLH组和BLL组大鼠血清ALT、AST、TC、TG、FPG、IL-1β及TNF-α水平降低,SOD水平升高,肝细胞脂肪变减轻,NAS评分降低,肠黏膜紧密连接结构恢复,MLCK蛋白及mRNA表达水平降低,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。此外,BLH组较Mod组CAT水平升高,MDA及IL-6水平下降,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。与BLL组相比,BLH组大鼠血清MDA、IL-6、TNF-α水平降低,CAT水平升高,肠黏膜MLCK蛋白及mRNA表达水平降低,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。肠道菌群示BLH组和BLL组厚壁菌门和拟杆菌门的相对丰度均较Mod组有所恢复,且BLH组厚壁菌门和拟杆菌门的相对丰度更接近Control组。结论地衣芽孢杆菌制剂可有效减轻NAFLD大鼠的肝脂肪变性,其作用机制可能与下调肠黏膜MLCK蛋白的表达水平、改善肠黏膜紧密连接结构有关。

LncRNA MYLK-AS1调节miR-141-3p/STMN1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)肌球蛋白轻链激酶反义RNA1(myosin light chain kinase antisense RNA1,MYLK-AS1)调节miR-141-3p/微管不稳定蛋白1(stathmin 1,STMN1)轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:将HGC27细胞分为NC组、si-NC组、si-MYLK-AS1组、si-MYLK-AS1+inhibitor NC组、si-MYLK-AS1+miR-141-3p inhibitor组。双萤光素酶报告基因实验检测LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p、STMN1的关系;qRT-PCR检测HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p表达;CCK-8法检测HGC27细胞增殖情况;流式细胞术检测HGC27细胞凋亡;使用Transwell实验评估了HGC27细胞的侵袭和迁移能力,并统计了穿透基质膜的细胞数量;同时采用Western blot技术检测了HGC27细胞中STMN1、E-cadherin、Vimentin及N-cadherin这几种蛋白表达量的变化。结果:HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、STMN1水平高于GES-1细胞(P<0.05),miR-141-3p水平低于GES-1细胞(P<0.05)。si-MYLK-AS1组HGC27细胞A_(450 nm)值、迁移、侵袭细胞数量、LncRNA MYLK-AS1表达量、STMN1、N-cadherin、Vimentin蛋白水平低于NC组、si-NC组(P<0.05),HGC27细胞凋亡率、miR-141-3p表达量、E-cadherin蛋白水平高于NC组、si-NC组(P<0.05);而miR-141-3p低表达减弱了沉默LncRNA MYLK-AS1抑制HGC27细胞发展的作用;LncRNA MYLK-AS1靶向调节miR-141-3p/STMN1轴。结论:LncRNA MYLK-AS1可能通过上调microRNA-141-3p的表达水平,间接导致STMN1基因表达受到抑制,这一过程可能对胃癌细胞的增殖、凋亡及侵袭特性产生明显影响。