抑制肌球蛋白轻链激酶活性诱导细胞凋亡的研究

目的:探讨抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)活性诱导细胞凋亡。方法:应用尿素/甘油胶检测平滑肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平,流式细胞仪检测平滑肌细胞凋亡细胞比例。结果:ML-7处理后细胞具有剂量依赖的肌球蛋白轻链去磷酸化与细胞凋亡,肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡。结论:抑制MLCK活性足以引起细胞凋亡,且肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡。

肌球蛋白轻链激酶抑制剂的临床应用前景

目的：探索肌球蛋白轻链激酶（ ＭＬＣＫ） 抑制剂的作用机制及其与临床某些疾病的关系。方法：综述了国内外近年来对ＭＬＣＫ及其抑制剂的研究情况。结果：ＭＬＣＫ的活性与某些临床疾病的发生密切相关，而广泛存在多种植物中的ＭＬＣＫ抑制剂抑制ＭＬＣＫ的活性，具有抗癌，抗病等多种生理功能。结论：ＭＬＣＫ抑制剂的研究从一个方面揭示了某些药物的作用机理，将对体外筛选此类化合物提供一种有用的研究途径。

肌球蛋白轻链激酶抑制剂对急性肺损伤的保护作用

目的探讨肌球蛋白轻链激酶（MLCK）抑制剂ML-7对细菌脂多糖（LPS）诱导的人肺动脉内皮细胞（HPAEC）和急性肺损伤（ALI）的影响。方法体外培养HPAEC，待4～6代予ML-7（10μmol／L）孵育60min后，再给予LPS刺激60min，四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测HPAEC活性；荧光显微镜下观察磷酸化肌球蛋白轻链激酶（p-MLCK）免疫反应细胞。20只雌性BALB／c小鼠随机分组，LPS组鼻内注入LPS（1μg／g）；ML-7组在LPS滴鼻前进行ML-7干预。观察小鼠肺湿／干重（W／D）比值、支气管肺泡灌洗液（BALF）蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性和病理学改变；用免疫组化法检测肺组织MLCK和CD11b阳性免疫反应细胞，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺组织MLCK mRNA表达，蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测肺组织MLCK蛋白表达。结果与LPS组比较，HPAEC在ML-7孵育下吸光度（A）值增加（P〈0．01），P-MLCK免疫反应细胞明显减少（P〈0．05），肺W／D比值、肺组织MPO活性、BALF蛋白含量均明显降低（P〈0．05或P〈0．01）。病理结果显示，LPS组小鼠肺部炎症反应明显，以中性粒细胞浸润为主，肺泡充血、水肿；ML-7组肺部炎症及充血明显改善。免疫组化显示位于内皮的MLCK免疫反应细胞和位于炎性细胞的CD11b在ML-7组均较LPS组明显减少。ML-7组肺组织MLCK的mRNA和蛋白表达均较LPS组降低（P均〈0．05）。结论MLCK特异性抑制剂ML-7能提高LPS诱导的HPAEC生长活性，降低p-MLCK表达；减轻LPS诱导的中性粒细胞在肺内浸润、肺水肿及MLCK、CD11b蛋白和MLCK mRNA的表达。表明抑制MLCK活性可能通过减弱MLCK磷酸化而达到稳定血管屏障功能，防治ALI的作用。