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MSTN^(-/-)牛肌肉miRNA测序及生物信息学分析
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作者 王桥梦 强明威 +6 位作者 陈星宇 胡德宝 张林林 李新 丁向彬 郭宏 郭益文 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第14期49-55,124,125,共9页
为了探寻参与调控动物骨骼肌生长发育的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因的相关miRNA,试验活体采集了5头MSTN基因敲除(MSTN^(-/-))鲁西黄牛(试验组)和5头野生型鲁西黄牛(对照组)的腿臀肌肉,提取肌肉总RNA进行miRNA测序,筛选两组鲁西... 为了探寻参与调控动物骨骼肌生长发育的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因的相关miRNA,试验活体采集了5头MSTN基因敲除(MSTN^(-/-))鲁西黄牛(试验组)和5头野生型鲁西黄牛(对照组)的腿臀肌肉,提取肌肉总RNA进行miRNA测序,筛选两组鲁西黄牛肌肉样品间差异表达的miRNA,分析miRNA序列的碱基偏好性,并预测显著差异表达miRNA的靶基因,然后对靶基因进行GO功能和KEGG信号通路富集分析,最后利用实时荧光定量PCR在MSTN基因干扰牛骨骼肌卫星细胞模型上验证miRNA测序数据的准确性。结果表明:miRNA序列第一位碱基的偏好性因长度不同而不同,且不同位置碱基具有偏好性;试验组和对照组样品共鉴定到761个差异表达miRNA,其中有12个显著差异表达miRNA(miR-2285l、miR-496、miR-12006、miR-6533、miR-450b、miR-6524、miR-410、miR-335、miR-2447、miR-147、miR-33a、miR-654),其中试验组有9个较对照组高表达的miRNA(miR-2285l、miR-12006、miR-6533、miR-450b、miR-410、miR-335、miR-147、miR-33a、miR-654)和3个低表达miRNA(miR-496、miR-6524、miR-2447);预测到5969个显著差异表达miRNA的靶基因和9280个靶位点;靶基因主要富集在细胞内部、膜结合细胞器、蛋白结合、生物过程的正向调节等相关功能和卡波氏肉瘤病毒感染、胞吞作用、MAPK信号通路等代谢通路;验证试验中的6个miRNA(miR-6533、miR-450b、miR-2285l、miR-654、miR-12006、miR-496)的表达量变化均与测序结果的变化趋势一致。说明12个显著差异表达miRNA可能参与了MSTN基因调控牛骨骼肌生长发育过程。 展开更多
关键词 肌肉生长抑制素(mstn) 差异表达miRNA 靶基因 定量分析
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藏系绵羊MSTN基因在不同年龄不同组织的表达定量研究 被引量:18
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作者 梁婧娴 陈志成 +2 位作者 郑玉才 杨虎林 徐亚欧 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第17期10454-10457,10493,共5页
[目的]研究MSTN基因在藏系绵羊不同年龄、不同组织的表达差异。[方法]根据GenBank已发表序列(NM_001009428.1)设计1对引物,以藏系绵羊组织总RNA为模板,采用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR)分析了MSTN基因在不同年龄阶段的真胃、瘤胃、腿... [目的]研究MSTN基因在藏系绵羊不同年龄、不同组织的表达差异。[方法]根据GenBank已发表序列(NM_001009428.1)设计1对引物,以藏系绵羊组织总RNA为模板,采用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR)分析了MSTN基因在不同年龄阶段的真胃、瘤胃、腿肌和心肌中的基因表达量。[结果]经过内参基因校正后,综合4个组织分析,MSTN基因在6月龄藏系绵羊的相对表达量最高,是12月龄藏系绵羊的2.52倍,是羔羊的2.24倍,是9月龄的1.30倍(P<0.05)。且MSTN基因在腿肌中的表达量最高,在其他组织几乎未表达,在腿肌中的表达量是其瘤胃的3984.78倍,是心肌的602.69倍(P<0.01)。[结论]为MSTN蛋白抗体的正确利用奠定了基础。 展开更多
关键词 藏绵羊 肌肉生长抑制素 实时荧光定量PCR
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MSTN基因外显子3的多态性及其与边鸡生长性状的关联分析 被引量:8
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作者 张跟喜 丁馥香 +3 位作者 赵秀华 王金玉 金崇富 张丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第1期126-129,共4页
采用PCR-SSCP技术检测边鸡及2个对照鸡群体(京海黄鸡和尤溪麻鸡)肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子3的单核苷酸多态性,并与边鸡的生长性状进行相关性分析。结果表明,在MSTN基因外显子3的8527—8528 bp处检测到一个TC的插入... 采用PCR-SSCP技术检测边鸡及2个对照鸡群体(京海黄鸡和尤溪麻鸡)肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子3的单核苷酸多态性,并与边鸡的生长性状进行相关性分析。结果表明,在MSTN基因外显子3的8527—8528 bp处检测到一个TC的插入。在边鸡和京海黄鸡中只检测到2种基因型(AA和AB基因型),在尤溪麻鸡中检测到3种基因型(AA、AB和BB基因型)。在3个鸡品种中都以A等位基因为优势等位基因。最小二乘分析结果表明,边鸡2种基因型个体的6~16周龄体重均无显著差异(P〉0.05)。 展开更多
关键词 肌肉生长抑制素 边鸡 PCR-SSCP 生长性状
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泸宁鸡和米易鸡MSTN基因多态性及其与生长性状的关联性 被引量:5
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作者 左斌 任冰冰 +6 位作者 蒋小松 熊应龙 王康环 蒋利 刘光伟 王海 徐亚欧 《贵州农业科学》 CAS 2015年第7期26-30,共5页
为探明泸宁鸡、米易鸡肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因多态性与生长性状的关联性,采用PCR-SSCP法对MSTN基因的多态性进行检测,同时对泸宁鸡、米易鸡的主要生长性状进行测定,并对MSTN基因多态性与生长性状的关联性进行分析。结果表明... 为探明泸宁鸡、米易鸡肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因多态性与生长性状的关联性,采用PCR-SSCP法对MSTN基因的多态性进行检测,同时对泸宁鸡、米易鸡的主要生长性状进行测定,并对MSTN基因多态性与生长性状的关联性进行分析。结果表明:MSTN基因外显子1中有2 100bp(C/T)和2 109bp(C/T)2个SNPs位点,未引起氨基酸变异,为同义突变,表现出CT、TT(2 100bp)和CC、CT、TT(2 109bp)5种基因型,与心脏重、胫围和屠宰率有相关性;泸宁鸡存在CC、CT和TT 3种单倍型,米易鸡存在CC、TC和TT 3种单倍型。内含子1中有4 295bp(T/C)、4 359bp(T/C)和4 404bp(A/C)3个SNPs位点,表现出CT(4 295bp)、CT(4 359bp)、TT、CT和CC(4 404bp)5种基因型,与腺胃重有显著相关;泸宁鸡存在CCC和TTT 2种单倍型,米易鸡存在CCC、TTC和TTT 3种单倍型。3’非编码区有7 637bp(A/G)和7 725bp(A/G)2个SNPs位点,表现出AG(7 637bp)、AA、AG和GG(7 725bp)4种基因型,与腺胃重、腹脂重和半净膛率具有相关性;泸宁鸡存在AG、GA和GG 3种单倍型。MSTN基因是影响泸宁鸡、米易鸡主要生长性状的主效基因之一,可以作为地方鸡品种选育的候选基因。 展开更多
关键词 泸宁鸡 米易鸡 肌肉生长抑制素 PCR-SSCP 生长性状 单倍型
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牙鲆肌肉生长抑制素(MSTN)基因克隆 被引量:16
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作者 徐建勇 陈松林 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期497-506,共10页
采用同源克隆及基因组步移的方法,分离克隆了牙鲆肌肉生长抑制素(MSTN)基因。经过序列分析及cDNA验证,牙鲆MSTN基因具有3个外显子和2个内含子,编码377个氨基酸。5′侧翼区含有8个TATA框,一个CAAT框,6个E框;3′侧翼区含有加尾信号。通过... 采用同源克隆及基因组步移的方法,分离克隆了牙鲆肌肉生长抑制素(MSTN)基因。经过序列分析及cDNA验证,牙鲆MSTN基因具有3个外显子和2个内含子,编码377个氨基酸。5′侧翼区含有8个TATA框,一个CAAT框,6个E框;3′侧翼区含有加尾信号。通过同源分析,牙鲆MSTNC末端含有9个保守半胱氨酸残基和一个RVRR蛋白酶酶切位点;通过进化树分析,牙鲆MSTN与鱼类MSTN基因聚为一支。RT-PCR分析表明,牙鲆MSTN在胚胎发育中不表达或表达量较低,说明MSTN在牙鲆胚胎发育中并不起重要作用;其在各组织中的表达,随个体和环境的不同而有差异,暗示MSTN的表达受外界因素调控。 展开更多
关键词 牙鲆 肌肉生长抑制素 克隆
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真鲷肌肉生长抑素(MSTN)基因的克隆及表达分析 被引量:9
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作者 叶寒青 陈松林 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期718-724,共7页
采用同源克隆的策略,设计了3对引物,首次分离、克隆了2820bp的真鲷肌肉生长抑素(MSTN)基因组序列,该序列在GenBank上注册(注册登录号为AY965686).经过剪接、比较,分析了真鲷MSTN基因的序列和结构特征.真鲷的MSTN基因具有3个外显子、... 采用同源克隆的策略,设计了3对引物,首次分离、克隆了2820bp的真鲷肌肉生长抑素(MSTN)基因组序列,该序列在GenBank上注册(注册登录号为AY965686).经过剪接、比较,分析了真鲷MSTN基因的序列和结构特征.真鲷的MSTN基因具有3个外显子、2个内含子,整个开放阅读框编码着384个氨基酸,第1个外显子上有一个连续11个Q氨基酸的残基,C-末端具有9个保守的半胱氨基酸及一个RVRR的蛋白酶解加工位点.在第1、第2内含子和3'非翻译区上分别具有一个微卫星重复序列.RT-PCR分析表明,MSTN基因在真鲷不同组织中都有表达,但表达量具有明显的差异;MSTN在肌肉中表达量最高,其次是脑、小肠、头肾、鳃和性腺,心脏、眼睛、肝脏中只有极少量表达,脾脏中没有检测到MSTN的表达. 展开更多
关键词 真鲷 Chrysophrys MAJOR 肌肉生长抑素基因 CDNA 表达分析
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海子水牛MSTN基因多样性与系统分化研究 被引量:3
7
作者 冀德君 常洪 +2 位作者 常春芳 耿荣庆 李永红 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2008年第2期164-167,共4页
针对牛肌肉生长抑制素基因(MSTN)编码区设计引物,以PCR扩增及测序的方法,检测了19头海子水牛样本的MSTN基因多样性,并对其系统分化进行研究。结果显示:海子水牛群体内MSTN基因编码区含1 128个碱基对,所检样本中存在3个核苷酸多态位点,... 针对牛肌肉生长抑制素基因(MSTN)编码区设计引物,以PCR扩增及测序的方法,检测了19头海子水牛样本的MSTN基因多样性,并对其系统分化进行研究。结果显示:海子水牛群体内MSTN基因编码区含1 128个碱基对,所检样本中存在3个核苷酸多态位点,但仅含有2种基因单型。说明海子水牛MSTN基因分化水平较低。 展开更多
关键词 海子水牛 mstn基因 多态位点 基因分化
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渤海黑牛和日本和牛MSTN基因的比较分析 被引量:3
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作者 刘桂芬 万发春 +3 位作者 宋恩亮 刘晓牧 刘振山 游伟 《家畜生态学报》 2009年第2期7-9,共3页
利用PCR扩增及测序的方法,分别对渤海黑牛和日本和牛的MSTN基因编码序列进行分析。结果显示:与日本和牛相比,渤海黑牛MSTN基因外显子1的111 bp处存在一个突变位点,在其外显子2和外显子3处进行比较分析,发现与NCBI上牛的序列一致,没有发... 利用PCR扩增及测序的方法,分别对渤海黑牛和日本和牛的MSTN基因编码序列进行分析。结果显示:与日本和牛相比,渤海黑牛MSTN基因外显子1的111 bp处存在一个突变位点,在其外显子2和外显子3处进行比较分析,发现与NCBI上牛的序列一致,没有发生改变的位点。 展开更多
关键词 肌肉生长抑制素mstn 渤海黑牛 日本和牛 序列分析
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绵羊肌肉生长抑制素(MSTN)双价纳米抗体构建与表达 被引量:2
9
作者 吴鹏 黄美玲 +6 位作者 李尤简 张勋 梁田 肖媛媛 陈新凯 陈创夫 盛金良 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期42-45,共4页
为了研究如何提高纳米抗体颉颃肌肉生长抑制素(MSTN)作用,试验采用构建绵羊MSTN纳米抗体双价表达载体的方法,将免疫双峰驼构建的MSTN特异性纳米抗体噬菌体文库筛选得到的特异性抗MSTN纳米抗体,扩增目的序列,利用linker进行链接,将序列... 为了研究如何提高纳米抗体颉颃肌肉生长抑制素(MSTN)作用,试验采用构建绵羊MSTN纳米抗体双价表达载体的方法,将免疫双峰驼构建的MSTN特异性纳米抗体噬菌体文库筛选得到的特异性抗MSTN纳米抗体,扩增目的序列,利用linker进行链接,将序列构建到原核表达载体p ET-30a,转化进BL21(DE3),经过SDS-PAGE电泳以及Western-blot检测,利用Ni柱纯化双价抗MSTN蛋白纳米抗体。结果表明:经过诱导的表达菌,SDS-PAGE验证以及Western-blot检测,条带清晰。说明成功构建了颉颃MSTN的双价纳米抗体原核表达系统;通过纳米抗体技术制备MSTN的颉颃物,阻断其分子作用通路,可有效地促进绵羊肌肉的生长和发育。 展开更多
关键词 肌肉生长抑制素(mstn) 纳米抗体 噬菌体文库 原核表达 Western—blot 蛋白纯化
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滩羊肌肉抑制素(MSTN)基因TaqMan探针SNP分型及其与生长性状的关联研究 被引量:2
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作者 马丽娜 李颖康 +2 位作者 于洋 额尔和花 马青 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第2期4-6,共3页
为了建立一种基于TaqMan探针技术的快速、准确且经济的实时荧光PCR法用于检测滩羊肌肉抑制素(MSTN)基因单核苷酸多态性(SNP)分型,试验选择MSTN基因的多态位点设计1对TaqMan探针加入到PCR反应系统中对MSTN基因SNP进行分型,同时对MSTN基... 为了建立一种基于TaqMan探针技术的快速、准确且经济的实时荧光PCR法用于检测滩羊肌肉抑制素(MSTN)基因单核苷酸多态性(SNP)分型,试验选择MSTN基因的多态位点设计1对TaqMan探针加入到PCR反应系统中对MSTN基因SNP进行分型,同时对MSTN基因的不同基因型与生长性状(出生重、断奶体重、三月龄体重和六月龄体重)进行关联研究。结果表明:MSTN基因rs417816017位点在滩羊群体中具有两种基因型YY、XY;XY型个体具有生长优势。说明基于TaqMan探针技术的特异的实时荧光PCR方法可实现MSTN基因的分型检测,可为深入开展滩羊育种提供备选基因。 展开更多
关键词 滩羊 肌肉抑制素(mstn)基因 TAQMAN探针 单核苷酸多态性(SNP) 生长性状 关联
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Quantitative Study on Expression of MSTN Gene in Different Tissues of Tibetan Sheep at Different Ages 被引量:2
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作者 梁婧娴 陈志成 +2 位作者 郑玉才 杨虎林 徐亚欧 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第4期608-612,共5页
[Objective] The aim was to investigate the difference in MSTN gene expression in different tissues of Tibetan sheep at different ages.[Method] According to the sequence(NM_001009428.1)published in GenBank,a pair of ... [Objective] The aim was to investigate the difference in MSTN gene expression in different tissues of Tibetan sheep at different ages.[Method] According to the sequence(NM_001009428.1)published in GenBank,a pair of specific primers was designed to amplify part of cDNA sequence of MSTN by using QRT-PCR technique.The relative expression level of MSTN gene in rennet stomach,rumen,leg muscle and cardiac muscle of Tibetan sheep at different ages were analyzed.[Result] After normalization with β-actin gene,the relative expression level of MSTN gene in the 6-month-old Tibetan sheep was the highest and it was 2.52 times than that in 12-month-old Tibetan sheep(P0.05),the relative expression level of MSTN gene in leg muscle was the highest among all tissues and it was 3 984.78 times than that in rumen(P0.01).[Conclusion] The results established theoretical foundation for the correct use of MSTN antibody. 展开更多
关键词 Tibetan sheep myostatinmstn Real-time PCR
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7个品种鸭MSTN基因5'-调控区单核苷酸多态性研究 被引量:2
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作者 宋卫涛 朱文奇 +3 位作者 徐文娟 李慧芳 陈宽维 韩威 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期55-58,191,共5页
为了研究肌肉生长抑制素(MSTN)基因在鸭群体中的遗传变异情况,试验以莆田黑鸭、连城白鸭、绍兴鸭、攸县麻鸭、建昌鸭、高邮鸭及北京鸭为材料,采用连接酶检测反应(LDR)的方法对MSTN基因5'-调控区第1 024位点单核苷酸多态性(SNP)进行... 为了研究肌肉生长抑制素(MSTN)基因在鸭群体中的遗传变异情况,试验以莆田黑鸭、连城白鸭、绍兴鸭、攸县麻鸭、建昌鸭、高邮鸭及北京鸭为材料,采用连接酶检测反应(LDR)的方法对MSTN基因5'-调控区第1 024位点单核苷酸多态性(SNP)进行基因分析,并统计该位点在群体中的基因型频率、等位基因频率和Hardy-Weinberg平衡情况。结果表明:在7个品种鸭中,检测MSTN基因第1 024位点均含CC、CG和GG 3种基因型。在连城白鸭、攸县麻鸭和高邮鸭中,CC基因型占优势,且以连城白鸭最高(0.72);在高邮鸭和建昌鸭中,CG基因型占优势;在北京鸭中,GG基因型占优势;在绍兴鸭中,CC基因型、CG基因型出现的频率相同。建昌鸭和北京鸭等位基因G的频率高于等位基因C的频率,其他品种鸭均为等位基因C的频率大于等位基因G的频率。莆田黑鸭、连城白鸭、绍兴鸭、攸县麻鸭、北京鸭和高邮鸭MSTN基因在第1 024位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),仅有建昌鸭不符合Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05)。 展开更多
关键词 肌肉生长抑制素(mstn)基因 连接酶检测反应(LDR) 单核苷酸多态性(SNP)
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小鼠MSTN基因RNA干涉载体的构建及干涉效率的检测 被引量:2
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作者 安星兰 薛超 +4 位作者 朴善花 苗向阳 滕春波 安铁洙 王春生 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期44-48,174,共6页
为了筛选小鼠肌肉生长抑制素(MSTN)基因的干涉序列,根据GenBank中小鼠的MSTN基因序列,采用RT-PCR方法克隆获得MSTN基因序列,构建其真核表达载体pcDNA 3.1(+)-MSTN;根据MSTN基因序列设计合成3种MSTN基因干涉序列(M1、M2、M3),并构建相应... 为了筛选小鼠肌肉生长抑制素(MSTN)基因的干涉序列,根据GenBank中小鼠的MSTN基因序列,采用RT-PCR方法克隆获得MSTN基因序列,构建其真核表达载体pcDNA 3.1(+)-MSTN;根据MSTN基因序列设计合成3种MSTN基因干涉序列(M1、M2、M3),并构建相应的RNA干涉载体pRNAT-M1、pRNAT-M2、pRNAT-M3。将构建的真核表达载体pcDNA 3.1(+)-MSTN单独或分别与3种干涉载体共转染293GP细胞,检测干涉载体对MSTN基因的干涉效率。结果表明:试验成功克隆得到与GenBank中的序列同源性为99.91%的小鼠MSTN基因序列,并构建了真核表达载体pcDNA 3.1(+)-MSTN;与转染pcDNA 3.1(+)-MSTN后的293GP细胞中MSTN基因的相对表达量(1.000)相比,转染pRNAT-M1、pRNAT-M2、pRNAT-M3后MSTN基因相对表达量明显下降,pRNAT-M1的干涉效率最高。说明研究成功获得对MSTN基因表达具有明显干涉作用的干涉序列。 展开更多
关键词 小鼠 肌肉生长抑制素(mstn)基因 RNA干涉
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MSTN基因的研究进展 被引量:4
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作者 胡兰 胡锐 +1 位作者 王娜 崔明珠 《中国兽药杂志》 2004年第1期41-43,共3页
肌生成抑素 (MSTN)是 1 997年发现的一种新的生长因子 ,其基因产物对骨骼肌的生长具有负调控作用 ,该基因缺失会导致骨骼肌增生。本文综述了MSTN基因的结构、在畜禽中的表达情况、作用机理以及研究意义。
关键词 肌生成抑素 mstn 1997年 生长因子 基因产物 骨骼肌 负调控作用 作用机理 基因表达
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MSTN基因的研究进展 被引量:6
15
作者 张利媛 岳文斌 《草食家畜》 2006年第3期1-4,共4页
肌肉生长抑制素(MSTN)又称GDF-8,属TGF-β超家族,是1997年发现的一种骨骼肌生长发育的负调控因子。其活性的丧失或降低,会引起动物肌肉的过度发育,表现为双肌性状。本文综述了MSTN基因的发现、同源性分析、特点、作用机制及其在常见家... 肌肉生长抑制素(MSTN)又称GDF-8,属TGF-β超家族,是1997年发现的一种骨骼肌生长发育的负调控因子。其活性的丧失或降低,会引起动物肌肉的过度发育,表现为双肌性状。本文综述了MSTN基因的发现、同源性分析、特点、作用机制及其在常见家畜的研究进展及应用前景。 展开更多
关键词 肌生成抑制(mstn)基因 作用机制 研究进展
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MSTN在动物育种中的应用研究进展 被引量:2
16
作者 杜玮 夏俊 +5 位作者 李红波 李娜 闫向民 周振勇 张杨 谢伍忠 《现代农业科技》 2015年第11期274-276,共3页
肌肉生长抑制素(MSTN)作为转化生长因子β(TGF-β)超家族成员之一,具有抑制骨骼肌生长的功能,本文主要对MSTN基因的结构和特点、作用机制、生物学功能及在畜牧生产中的作用进行综述。
关键词 mstn 作用机制 生物学功能 动物育种 应用
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Split-GFP双分子荧光互补技术在鸡MSTN基因RNAi检测中的应用
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作者 杨磊 朱正 +4 位作者 王博永 梁谦学 吴文德 李恭贺 郑喜邦 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期2444-2453,共10页
【目的】以Split-GFP双荧光互补技术检测鸡肌肉生长抑制素基因(MSTN)RNA干涉(RNAi)效果,并与其他常用检测方法比较,以验证Split-GFP双分子荧光互补技术在RNAi效果评估中的有效性和可行性。【方法】将合成的3个shRNA慢病毒载体(shRNA-a、... 【目的】以Split-GFP双荧光互补技术检测鸡肌肉生长抑制素基因(MSTN)RNA干涉(RNAi)效果,并与其他常用检测方法比较,以验证Split-GFP双分子荧光互补技术在RNAi效果评估中的有效性和可行性。【方法】将合成的3个shRNA慢病毒载体(shRNA-a、shRNA-b和shRNA-c)分别转染稳定表达GFP11-MSTN融合蛋白的HEK 293TGFP11-MSTN细胞,经实时荧光定量PCR筛选出最佳shRNA慢病毒载体并包装为慢病毒,然后以慢病毒感染HEK 293TGFP11-MSTN细胞,采用潮霉素B筛选mCherry阳性(mCherry+)细胞,再以实时荧光定量PCR和Western blotting检测RNAi效果;得到的mCherry+细胞再转染pcDNA3.1(+)-GFP1-10质粒,通过荧光显微镜观察和流式细胞术评估RNAi效果。【结果】3个shRNA慢病毒载体对MSTN基因表达均有极显著的抑制作用(P<0.01,下同),其中又以Anti-MSTN shRNA-a慢病毒载体的干涉效果最佳。Anti-MSTN shRNA-a慢病毒感染HEK 293TGFP11-MSTN细胞的最适MOI=3,该条件下MSTN基因相对表达量及GFP11-MSTN融合蛋白表达量均受到抑制;得到的mCherry+细胞再转染pcDNA3.1(+)-GFP1-10质粒,荧光显微镜观察和流式细胞术检测结果表明,GFP+细胞数量明显减少,GFP+细胞百分率由31.1%降至11.5%。Split-GFP检测结果与实时荧光定量PCR及Western blotting检测结果相符,说明Anti-MSTN shRNA-a慢病毒能有效抑制GFP11-MSTN融合蛋白表达,发挥了RNAi作用。【结论】以Anti-MSTN shRNA-a慢病毒对MSTN基因的干涉效果最佳,其感染HEK 293TGFP11-MSTN细胞后MSTN基因表达极显著下调,且再转染pcDNA3.1(+)-GFP1-10质粒后细胞中的GFP+细胞百分率明显下降,与实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果相符,证实Slipt-GFP双分子荧光互补技术是一种可靠的可视化RNAi检测方法。 展开更多
关键词 肌肉生长抑制素(mstn) RNA干涉(RNAi) shRNA 慢病毒 Split-GFP双分子荧光互补技术
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转敲低MSTN基因绵羊重构胚的移植及鉴定
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作者 杜文敬 李昊 +3 位作者 薛超 朴善花 王春生 安铁洙 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期539-543,共5页
为培育肌肉丰满绵羊品系,以前期试验中获得的干涉MSTN基因的转基因细胞株为核供体,进行核移植,将获得的重构胚进行体外培养和胚胎移植。结果表明:所获得的重构胚与绵羊成纤维细胞为核供体时的重构胚分裂比率(分别为44.6%和24.1%)及其发... 为培育肌肉丰满绵羊品系,以前期试验中获得的干涉MSTN基因的转基因细胞株为核供体,进行核移植,将获得的重构胚进行体外培养和胚胎移植。结果表明:所获得的重构胚与绵羊成纤维细胞为核供体时的重构胚分裂比率(分别为44.6%和24.1%)及其发育至桑椹胚比率(分别为15.6%和33.0%)相比,差异无统计学意义;将重构胚移植23只受体后,获得1只流产胎儿,对其进行PCR鉴定,结果显示MSTN基因干涉序列已整合入流产胎儿的基因组中。 展开更多
关键词 绵羊 MSNT基因 RNA干涉 转基因 体细胞核移植
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岩原鲤MSTN基因克隆及饥饿对MSTN表达的影响 被引量:4
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作者 刘恩秀 朱仙珍 +5 位作者 李云 吴荣华 英士娟 杨帆 胡鑫 郭鹤 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2018年第4期16-22,共7页
运用同源克隆的方法获得岩原鲤(Procypris rabaudi(Tchang))肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)c DNA全长序列,并通过逆转录PCR(RT-PCR)检测MSTN基因的组织差异性表达以及饥饿胁迫对MSTN基因表达的影响。结果显示,岩原鲤MSTN基因1 547 bp的... 运用同源克隆的方法获得岩原鲤(Procypris rabaudi(Tchang))肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)c DNA全长序列,并通过逆转录PCR(RT-PCR)检测MSTN基因的组织差异性表达以及饥饿胁迫对MSTN基因表达的影响。结果显示,岩原鲤MSTN基因1 547 bp的c DNA序列,编码区为1 128 bp,编码375个氨基酸。PCR检测显示,该基因在肌肉和脑组织中大量表达,在眼、肠、心、鳃、肾和头肾组织中少量表达,在肝胰脏、脾脏组织中未见表达。饥饿再投喂实验表明肌肉组织中MSTN基因表达含量随着饥饿时间的延长逐渐升高,恢复投喂后3d表达含量急剧下降,投饵后6 d升至正常水平。结果表明,MSTN的表达对营养摄入敏感,在饥饿状态下岩原鲤通过上调MSTM表达来抑制肌肉生长,节约能量消耗。 展开更多
关键词 岩原鲤(Procypris rabaudi(Tchang)) 肌肉生长抑制素(mstn) CDNA克隆 饥饿 表达调控
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缩骨鲫MSTN基因的克隆与组织表达分析 被引量:4
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作者 杨扬 许炎坤 +3 位作者 舒琥 李强 蓝召军 刘丽 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2017年第2期23-29,共7页
采用同源克隆、生物信息学方法及荧光定量PCR(Real-time PCR)对缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.)肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因进行克隆,分析和组织表达状况研究。结果显示:缩骨鲫基因组MSTN基因全长4 737 bp,含有两个内含子... 采用同源克隆、生物信息学方法及荧光定量PCR(Real-time PCR)对缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.)肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因进行克隆,分析和组织表达状况研究。结果显示:缩骨鲫基因组MSTN基因全长4 737 bp,含有两个内含子和三个外显子;编码区长度为1 128 bp,编码375个氨基酸,包括信号肽(1aa^23aa),TGF-β前肽保守区域(34aa^256aa),TGF-β功能区(281aa^375aa),保守的RXXR蛋白酶酶切位点以及C-端活性区域9个保守的半胱氨酸残基,这与其他物种MSTN相似。此外,缩骨鲫与鲫鱼(Carassius auratus)的MSTN氨基酸序列同源性最高,达到96.1%。以β-actin为内参基因,荧光定量PCR分析表明,MSTN在肌肉中表达量最高;脑、眼、心脏中次之;在肝胰脏、卵巢、肠和肾脏中微量表达。 展开更多
关键词 缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.) 克隆 肌肉生长抑制素基因 组织表达分布
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