银杏叶对脑梗死新西兰兔内质网应激-c-JunN末端激酶相关通路的影响

目的 探讨银杏叶提取物在兔脑梗死中的作用。方法 用血栓注入法建立兔脑梗死模型。将模型新西兰兔随机分为模型组和低、中、高剂量实验组,每组12只;另取12只正常新西兰兔只进行血管分离,作为假手术组。低、中、高剂量实验组分别按25,50和100 mg·kg^(-1)·d^(-1)的剂量灌胃给予银杏叶提取物溶液;假手术组和模型组均灌胃给予等量0.9%NaCl。5组新西兰兔每天给药1次,连续给药4周。干预4周后,用改良Zea Longa法进行神经功能缺陷评分,用蛋白质印迹法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、增强子结合蛋白(CHOP)和c-Jun N末端激酶(JNK)的表达水平。结果 干预4周后,低、高剂量实验组和模型组、假手术组的神经功能缺陷评分分别为(3.42±0.59),(2.75±0.48),(3.97±0.64)和0分,GRP78蛋白相对表达量分别为1.57±0.10,1.13±0.07,1.95±0.08和0.95±0.12,CHOP蛋白相对表达量分别为1.88±0.14,1.20±0.08,2.52±0.49和1.02±0.11,JNK蛋白相对表达量分别为3.82±1.12,1.64±0.10,4.45±1.03和1.07±0.11。与模型组比较,低、高剂量实验组的上述指标均显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 银杏叶提取物能显著改善脑梗死新西兰兔的神经功能损伤,其机制可能与抑制JNK相关通路有关。

异氟醚通过TLR4/JNK信号通路干预心肌梗死大鼠室性心律失常的作用机制研究

目的:探讨异氟醚对心肌梗死大鼠室性心律失常的影响以及对Toll样受体4(TLR4)/c-Jun N末端激酶(JNK)通路的调控作用。方法:将120只无特定病原体(SPF)级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、异氟醚组、ad-TLR4组、ad-NC组、异氟醚+ad-TLR4组,每组20只。采用结扎左前降支血管法建立心肌梗死模型。体表心电图检测心电图参数;灌流体外心脏法检测心律失常相关指标;四氮唑红染色法(TTC)检测心肌梗死面积;自动生化分析仪联合试剂盒检测血清磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、儿茶酚抑素(CST)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平;苏木素-伊红(HE)及Masson染色检测左心室心肌组织病理变化;免疫组化法检测TLR4、JNK2阳性表达水平;免疫荧光法检测Ca^(2+)水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-β(IL-β)、核转录因子-κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达。结果:模型组大鼠死亡2只,心肌内纤维组织增生、胶原沉积及炎性浸润等病理损伤严重,心肌梗死面积增加,血清心肌损伤标志物升高、QT间期延长、APD电交替、心室有效不应期(ERP)、室性心律失常诱发率等均升高,Ca^(2+)水平及TLR4/JNK2/NF-κB/CaMKⅡ通路蛋白表达升高(P<0.05)。异氟醚处理可缓解大鼠心肌损伤,缩短QT间期、ERP,降低室性心律失常诱发率,抑制Ca^(2+)水平及TLR4/JNK2/NF-κB/CaMKⅡ通路蛋白表达(P<0.05)。ad-TLR4可逆转异氟醚上述作用(P<0.05)。结论:异氟醚可能通过抑制TLR4/JNK通路激活,降低炎症水平及细胞内Ca^(2+)释放水平,降低心律失常诱发率,缓解心肌梗死大鼠心肌损伤。

黄芪注射液对脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及JNK3表达的影响

目的:观察黄芪注射液对脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及c-Jun N末端激酶3(JNK3)表达的影响。方法:四血管阻断法制备脑缺血再灌注大鼠模型。设假手术组、脑缺血再灌注模型组(模型组)、脑缺血再灌注模型+黄芪注射液组(黄芪注射液组)和脑缺血再灌注模型+黄芪注射液溶剂对照组(溶剂对照组)。除假手术组外其余3组根据再灌注时间不同又分为0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、72 h和120 h 7个亚组。采用TUNEL法检测海马神经元凋亡,Western blotting法检测海马组织JNK3蛋白变化,real-time PCR法检测海马组织JNK3 mRNA的表达变化。结果:与假手术组比,模型组大鼠各个时点凋亡细胞数均增多(P<0.05);与模型组比,黄芪注射液组各个时点的细胞凋亡数明显减少(P<0.05),而黄芪注射液溶剂对照组各个时点的细胞凋亡数无明显变化(P>0.05)。除120 h外,模型组各时点海马组织JNK3蛋白及mRNA表达均较假手术组增加(P<0.05);与模型组相比,黄芪注射液可减弱除120 h之外的各时点JNK3蛋白及mRNA的表达(P<0.05),而黄芪注射液溶剂对照组则无明显变化(P>0.05)。结论:黄芪注射液可抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡,其抗凋亡机制可能与下调JNK3 mRNA及蛋白表达有关。

基于TLR4/JNK信号通路探讨木犀草素对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的改善作用

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/c-Jun N末端激酶(JNK)信号通路探讨木犀草素对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的改善作用。方法:100只SD大鼠随机分为5组:正常对照组、模型组、吡咯列酮组(10.0 mg·kg^-1)、木犀草素低、高剂量组(20.0,40.0 mg·kg^-1),每组20只。除正常对照组外,其余各组建立2型糖尿病大鼠模型,并于建模成功后第1天开始灌胃给予相应药物,持续4周,正常对照组和模型组给予等体积生理盐水。给药结束后,测定空腹血糖(FPG)、血清胰岛素水平(INS)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感性检测指数(QUICKI),同时测定胰腺TLR4、JNK mRNA和蛋白水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠FPG、INS、HOMA-IR水平、胰腺TLR4、JNK mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05),HOMA-β、QUICKI水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,木犀草素低、高剂量组和吡咯列酮组FPG、INS、HOMA-IR水平、胰腺TLR4、JNK mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05),HOMA-β、QUICKI水平显著升高(P<0.05),且随着木犀草素给药剂量的增加,FPG、INS、HOMA-IR水平、胰腺TLR4、JNK mRNA和蛋白水平逐渐降低(P<0.05),HOMA-β、QUICKI水平逐渐升高(P<0.05);与吡咯列酮组比较,木犀草素低、高剂量组FPG、INS、HOMA-IR水平、胰腺TLR4、JNK mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05),HOMA-β、QUICKI水平显著降低(P<0.05)。模型组胰岛边界模糊,体积缩小,胰岛细胞减少,胰岛细胞核固缩,可见明显炎症细胞浸润;木犀草素低、高剂量组和吡咯列酮组胰腺组织较模型组有不同程度地改善。结论:木犀草素能明显改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗作用,减轻2型糖尿病大鼠胰腺炎症反应;其机制可能与木犀草素能抑制2型糖尿病大鼠胰腺TLR4、JNK mRNA和蛋白表达水平有关。

阿霉素对心肌肌醇依赖酶l-JNK通路的影响

目的探讨肌醇依赖酶l(IRE1)-JNK通路是否参与阿霉素致心力衰竭(HF)效应的作用。方法阿霉素(adriamycin,Adr)致HF大鼠作为Adr组(n=15),同龄健康大鼠作为对照组(n=10);将乳鼠心肌细胞随机分为对照组和Adr组(1umol/L)。心脏超声后,流式细胞仪和蛋白印迹等分别检测细胞凋亡率(AR)、IRE 1、X盒结合蛋白1(XBP l)、TNF受体相关因子2(TRAF 2)、c-Jun凋亡信号调节激酶(ASK1)和JNK等的表达。结果 1.Adr在体成功构建HF模型,而体外干预显著增加心肌细胞AR(P<0.001);2.不管在体内抑或在体外,Adr组IRE1α和p-IRE1α水平均显著高于相应对照组(P<0.001);3.与相应对照组相比,Adr组XBP l蛋白均显著上调(P<0.001);4.体内和体外Adr组TRAF 2蛋白的表达显著高于相应对照组(P<0.001);5.Adr组ASK1、p-ASK1和磷酸化水平(即p-ASK1与总ASK1比值)显著高于相应对照组(P<0.001);6.不管在体内抑或在体外,Adr组JNK1/2、p-JNK1/2蛋白和其磷酸化水平(p-JNK1/2与总JNK1/2比值)均显著高于相应对照组(P<0.001)。结论 Adr通过肌醇依赖酶l(IRE1)-ASK-JNK内质网通路介导其致心肌毒性并进而促发HF。

糖尿病小鼠视网膜中JNK3 mRNA表达的动态变化

背景 糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病常见的眼部并发症,其发病机制与多种因素有关,c-jun N末端激酶（JNK）作为一种凋亡基因,在糖尿病的病理过程中发挥着重要作用,其研究已成为近些年的热点之一,而JNK3作为JNK的亚基因之一,在DR中的研究目前较少.目的 定量检测JNK3在糖尿病小鼠视网膜中的表达,探讨JNK3在DR中的作用.方法 选取SPF级6～8周龄C57BL/6雄性小鼠48只,适应性喂养1周后按照随机数字表法分为糖尿病组和正常对照组.30只糖尿病组小鼠用一次性腹腔内注射柠檬酸钠缓冲液溶解的质量分数1％链脲佐菌素（STZ）的方法诱导糖尿病模型,18只对照组小鼠腹腔内注射等容量柠檬酸钠缓冲液.分别于造模后2、4、8周摘除小鼠左眼眼球,提取视网膜组织,采用实时定量PCR法检测JNK3 mRNA在小鼠视网膜中表达的动态变化.结果 造模后2、4、8周,糖尿病组小鼠血糖水平明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（t=-5.675、-5.498、-5.347,P＜0.01）.糖尿病组和正常对照组在造模后不同时间点小鼠视网膜中JNK3 mRNA相对表达量（A值）的差异均有统计学意义（F分组=102.345,P＜0.05;F时间 =131.679,P＜0.05）;其中造模后4周和8周糖尿病组小鼠视网膜中JNK3 mRNA相对表达量分别为3.21±0.14和5.43±0.37,均明显高于正常对照组的2.54 ±0.42和2.26±0.67,差异均有统计学意义（t=4.073、23.399,P＜0.05）;糖尿病组内比较可见,造模后8周小鼠视网膜中JNK3 mRNA相对表达量明显高于2周和4周值,差异均有统计学意义（t=10.756、16.857,P＜0.05）.结论 JNK3在糖尿病小鼠视网膜中表达量上调,其早期表达量随时间延长而增加.JNK3可能参与早期DR的发生和发展.

酒精饮料对小鼠认知功能的影响及其机制

目的探讨长时间大量饮用不同乙醇含量的饮料对小鼠海马内参与自噬的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)及c-Jun N末端激酶(JNK)通路的影响,揭示含乙醇饮料对认知功能的影响及机制。方法将40只成年雌性小鼠随机分为对照(蒸馏水)组及不同浓度(2.5%vol、11%vol及52%vol)乙醇组。利用Morris水迷宫检测小鼠认知功能,通过HE染色观察小鼠锥体细胞形态变化,用免疫印迹及免疫荧光法检测小鼠海马内相关蛋白的表达情况。结果2.5%vol、52%vol乙醇组小鼠出现认知障碍。2.5%vol、52%vol乙醇组小鼠mTOR-4EBP1通路相关蛋白表达高于对照组(P<0.05),自噬及JNK通路相关蛋白表达低于对照组(P<0.05)。11%vol乙醇组p-4EBP1表达低于2.5%vol、52%vol乙醇组(P<0.05),p-JNK及Beclin1蛋白表达高于2.5%vol、52%vol乙醇组(P<0.01)。结论长期过量饮用含2.5%vol、52%vol乙醇饮料对小鼠认知功能的损害比含11%vol乙醇的饮料更重,海马内与mTOR和JNK通路相关的自噬抑制可能参与此过程。

去氢骆驼蓬碱诱导HepG2细胞凋亡并增强其对5-氟尿嘧啶和顺铂的敏感性

目的:研究去氢骆驼蓬碱体外诱导HepG2细胞凋亡过程中c-Jun N末端激酶(JNK)途径的作用,并观察其联合化疗药物对HepG2细胞的影响。方法:CCK-8法检测联合或不联合使用JNK特异性抑制剂SP600125对细胞增殖的抑制作用;克隆形成实验观察不同浓度药物对细胞克隆形成的影响;Hoechst 33258染色法观察细胞形态变化;PI单染检测细胞亚二倍体率;Annexin V-PI双染测定细胞早期凋亡水平;Western blotting检测细胞聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)、JNK和p-JNK蛋白表达的改变;联合5-氟尿嘧啶(5-FU)或顺铂(DDP)观察细胞对化疗药物的敏感性。结果:去氢骆驼蓬碱随药物浓度的升高而抑制作用增强,48 h后IC50为9.80 mg/L;去氢骆驼蓬碱能显著抑制细胞克隆形成,并且导致细胞凋亡形态学变化;PI单染检测发现细胞周期的G1期前有亚二倍体凋亡峰,Annexin V-PI双染检测细胞出现明显的早期凋亡细胞群;Western blotting检测到随着去氢骆驼蓬碱浓度增加PARP及p-JNK蛋白表达增加,JNK蛋白表达减少;联合使用SP600125对细胞增殖的抑制作用减弱;联合5-FU或顺铂明显增强化疗药物对肿瘤细胞的抑制作用,增敏倍数分别为1.47和5.78倍。结论:去氢骆驼蓬碱对HepG2细胞有增殖抑制作用,并诱导其凋亡,激活JNK信号通路可能是其主要机制之一;同时去氢骆驼蓬碱可以增强HepG2细胞对5-FU和顺铂的敏感性。

JIP影响鼻咽癌细胞增殖和凋亡的生物学效应研究

背景与目的:研究表明LMP1激活c-JunN末端激酶(c-JunN-ternimalkinase,JNK)介导的信号途径在促进鼻咽癌的发生发展有重要作用,并且发现JNK相互作用蛋白(JNKinteractingprotein,JIP)在鼻咽癌细胞中能够有效抑制JNK信号途径。本实验在此基础上进一步研究JIP对鼻咽癌细胞增殖和凋亡生物学效应的影响。方法:采用MTT法观察不同剂量的JIP及相同剂量JIP作用不同时间后鼻咽癌细胞生长情况;并用集落形成率确定单个鼻咽癌细胞的增殖能力;同时用流式细胞术分析JIP作用前后细胞周期时相的变化;最后通过流式细胞术检测JIP作用后鼻咽癌细胞凋亡百分率的改变。结果:①随着转染JIP量的增加,细胞的存活率逐渐下降,存在剂量依赖效应;1μg/mlJIP作用24、48、72h后,细胞存活率分别为77.8%、59.2%、61.8%。②转染JIP后鼻咽癌细胞形成的集落明显减少,且集落体积变小。③转染JIP使鼻咽癌细胞周期G0/G1期细胞百分率由66.24%上升到71.89%,S期细胞百分率由25.87%下降到19.96%。④与对照组相比,转染JIP后细胞的24h凋亡百分率由1.25%上升到8.25%,上升约6.6倍,48h由1.04%上升到31.45%,上升约30倍。结论:JIP能够有效抑制鼻咽癌细胞生长增殖,引起鼻咽癌细胞周期G1/S期延长,并明显促进鼻咽癌细胞凋亡,提示JIP是治疗鼻咽癌潜在的分子药物。

高压氧治疗对小鼠慢性炎症性疼痛和组织水肿的影响

目的:研究连续高压氧(repetitive hyperbaric oxygen,HBO)处理对完全弗氏佐剂(complete Freund′s adjuvant,CFA)诱导的小鼠慢性炎症性疼痛和足底水肿的影响。方法:采用小鼠足底注射CFA诱导小鼠慢性炎症性疼痛。在注射CFA后1 h或3 d每天将小鼠置于高压氧舱中(纯氧,2个大气压,持续5~8 d)1 h,3 h后行为学检测小鼠热痛觉过敏和炎症爪体积;分别在CFA注射后的1、3、7 d取足底皮肤,用Western Blot检测p-c-Jun N末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p-细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)、瞬时受体电位通道(transient receptor potential channels,TRPV1)的表达。结果:CFA诱导小鼠产生慢性炎症性疼痛和注射爪的水肿;高压氧处理显著缓解热痛觉过敏,并减轻了CFA引起的足部肿胀。而且,CFA诱导足底皮肤中p-ERK、p-JNK和TRPV1在1、3、7 d均显著升高;高压氧处理后的3 d和7 d有效抑制了pERK、pJNK和TRPV1的表达。结论:重复高压氧处理可能通过抑制ERK和JNK的激活以及TRPV1的表达有效缓解慢性炎症性疼痛和局部组织水肿,为临床上采用高压氧镇痛提供了依据。

SP600125对蛛网膜下腔出血大鼠海马区神经细胞自噬及神经细胞丢失的影响

目的适度自噬有利于提高神经细胞的存活率;而自噬过度又会引起细胞的调亡。文中旨在探讨SP600125对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠海马区神经细胞自噬及神经细胞丢失的影响。方法将健康雄性清洁级SD大鼠40只按随机化数字表法分为假手术组、模型组、二甲基亚砜(DMSO组)、SP600125组,每组10只。模型组、DMSO组和SP600125组应用血管内穿刺法制成大鼠SAH模型。采用3-0缝合线引入到右颈外动脉,通过颈内动脉推进刺破大脑前动脉和大脑中动脉分叉处,建SAH模型。假手术组除不刺破血管,其余操作均与模型组一致。SP600125组于造模前30 min,利用脑立体定位仪行侧脑室注射3μg/μL SP600125溶液10μL。假手术组和模型组均注射等体积等渗盐水,DMSO组注射等量的DMSO。24 h处死,HE染色观察各组海马区神经元形态及数量;免疫组化染色及Western blot法对p-JNK蛋白以及自噬标志物Beclin-1和LC3-Ⅱ进行定性定量检测。结果 HE结果显示,与假手术组比较,模型组海马区神经元排列紊乱、细胞多呈多边形、数量明显减少;与模型组比较,SP600125组海马区神经元损伤程度有所减轻、细胞明显增多。与假手术组大鼠海马区Beclin-1、LC3-Ⅱ、p-JNK蛋白平均光密度值(1.56±0.28、1.60±0.30、1.58±0.32)比较,模型组(14.66±4.40、12.62±3.46、12.82±3.68)、DMSO组(13.85±3.85、11.59±4.52、13.03±3.53)和SP600125组(9.86±3.14、6.78±2.56、5.60±2.42)明显升高(P<0.05);SP600125组较模型组明显降低(P<0.05)。与假手术组大鼠海马区Beclin-1、LC3-Ⅱ、p-JNK蛋白表达(0.136±0.014、0.126±0.012、0.102±0.009)比较,模型组(0.474±0.122、0.668±0.130、0.496±0.124)、DMSO组(0.432±0.102、0.628±0.113、0.416±0.094)和SP600125组(0.264±0.106、0.332±0.113、0.219±0.104)明显升高(P<0.05);而SP600125组较模型组明显降低(P<0.05)。结论SP600125对SAH后神经元细胞具有保护作用,其机制可能与SP600125通过抑制JNK信号通路的活性使自噬适度激活有关。

常用英语缩略语名词解释

P13K／Akt：磷脂酰肌醇-3-羟基酶／苏氨酸激酶phosphatidylinositol 3-kinase／proteinkinase BRPE：视网膜色素上皮 retinal pigment epithelium JNK：c—jun N末端激酶 c—jun N terminal kinase。

JNK1基因多态性与中耳炎听力损失的关联

目的探讨C-JUN n末端激酶1(JNK1)基因多态性与中耳炎听力的关联。方法选择武汉理工大学医院耳鼻喉科2018年1月-2021年5月因感染所致中耳炎入院接受治疗患者66例为研究对象,根据听力计检测患者听阈中位数,分为听力损失较轻组33例和听力损失较重组33例。收集两组患者性别、年龄、体质量指数、发病部位、合并耳鸣和合并眩晕情况,检测所有患者气导听阈、骨导听阈、气骨导差、咽鼓管功能不良、鼓室病变和听骨链病变情况,采用聚合酶链式扩增反应(PCR)扩增目的基因序列片段。结果听力损失较重组Rs9284位点携带GG基因型和G等位基因频率高于听力损失较轻组(P<0.05),两组rs9284位点TT、TG基因型、Rs11598320位点AA、AT和TT基因型和A/T等位基因频率比较,无统计学差异;Rs9284位点携带GG型患者气导听阈高于TT/TG型,气骨导差低于TT/TG型(P<0.05);两组咽鼓管功能不良、鼓室病变和听骨链病变比较,无统计学差异。结论JNK1基因rs9284位GG携带者感染所致听力损失较为严重,听力学表现较差,筛查该位点对于指导临床干预有一定意义。

MAPK信号通路在自然流产中机制研究进展

自然流产是病理妊娠中的一种,病因和发病机理复杂,其中一部分病因已被普遍接受,然而还有50%不明原因的自然流产,其发病机制尚不清楚。近年研究发现,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路在胚胎发育、滋养层细胞入侵、蜕膜免疫微环境中发挥重要作用,病理妊娠的发生可能与MAPK通路异常有极大关系。本文对MAPK信号通路与自然流产的关系进行综述,为临床上防治自然流产提供理论参考。

大鼠JNK3超表达细胞模型的建立及特性研究

目的构建大鼠c-JunN末端激酶3（JNK3）在SH-SY5Y细胞的超表达模型，从而研究帕金森病（PD）和阿尔茨海默病（AD）等神经退行性疾病的发生机制与JNK3的相互关系以及建立新的PD和AD治疗药物筛选平台。方法RT-PCR获得大鼠JNK3（rJNK3）基因片段．连人真核表达载体pcDNA3．1／hisC构建真核表达质粒pcDNA3．1／hisC-rJNK3。脂染法把质粒转染到SHSY5Y细胞内，经过G418筛选出稳定表达rJNK3的单克隆细胞系。Western blot检测其蛋白表达量。通过观察细胞形态、测定细胞生长率、MPP诱导的细胞凋亡以及细胞免疫荧光定位等实验对细胞系SHSY5Y-rJNK3进行细胞株特性研究。结果重组质粒pcDNA3．1／hisC-rJNK3转染SHSY5Y细胞构建成稳定表达rJNK3蛋白的细胞系SHSY5Y-rJNK3。SHSY5Y-rJNK3和SHSY5Y细胞形态上差异显著，MTT结果显示生长率也不相同，SHSY5Y-rJNK3比SHSY5Y细胞对MPP的刺激更敏感。结论JNK3蛋白在细胞内的过量表达会导致细胞形态发生一定程度的改变，同时导致细胞对外界因素诱导的凋亡更加敏感，因此在细胞内过表达rJNK3的SHSY5Y-rJNK3更能客观准确的反映JNK3作用下的神经细胞凋亡现象和本质。