脑缺血后N-乙基马来酰亚胺敏感因子ATP酶失活致神经元自噬流障碍的病理机制

缺血性脑卒中是由脑血管梗塞引起的急性脑血管病,具有较高的发病率、致残率和致死率。研究发现,过度自噬或自噬不足均可导致细胞损伤。自噬包括自噬体的形成和成熟、自噬体与溶酶体融合、自噬底物在自噬溶酶体内的降解和清除,这些过程呈连续状态则称为自噬流。研究发现,脑缺血可导致自噬体与溶酶体间发生融合障碍,从而引发自噬流损伤。细胞内膜融合由3种核心组分介导,即N-乙基马来酰亚胺敏感因子(N-ethylmaleimide sensitive factor,NSF)ATP酶、可溶性NSF黏附蛋白(soluble NSF attachment protein,SNAP)及可溶性NSF黏附蛋白受体(soluble NSF attachment protein receptors,SNAREs)。当SNAREs介导自噬体与溶酶体融合后以非活性的复合体形式存留于自噬溶酶体膜,须被NSF再激活为单体后方可发挥新一轮的膜融合介导作用,而NSF是唯一可再激活SNAREs的ATP酶。新近研究表明,脑缺血可显著抑制NSF ATP酶活性,导致其对SNAREs再激活减少,这可能是自噬体与溶酶体间发生融合障碍并导致神经元自噬流损伤的病理机制。本文就NSF ATP酶失活导致SNAREs互作失调、自噬体与溶酶体融合障碍,以及蛋白水解酶向溶酶体的转运不足引发神经元自噬流障碍的病理机制进行阐述,并针对NSF ATP酶失活改善神经元自噬流的方法进行探讨,为提高脑卒中治疗提供参考并指明深入研究方向。

一种新型N-型电压敏感性钙通道拮抗剂虎纹蜘蛛毒素-I对大鼠内脏痛模型镇痛作用的研究

目的研究一种新型N-型电压敏感性钙通道拮抗剂虎纹蜘蛛毒素-Ⅰ(HWAP-I)经蛛网膜下腔用药对福尔马林诱导的大鼠急性炎性内脏疼痛的抑制作用.方法福尔马林快速注入SD大鼠乙状结肠壁粘膜下层作为疼痛模型,以数种可评估的反映内脏疼痛的固定性行为作为疼痛评分指标(疼痛分数).此前30 min经留置的导管注射各待测试剂于蛛网膜下腔内,以观察其对该模型疼痛行为的作用.结果以生理盐水阴性对照组和美国同类镇痛新药SNX-111(0.2,0.5和0.75μg/kg·b.w.)和盐酸吗啡(0.05,0.1和0.2μg/kg·b.w.)两个阳性对照组比较,HWAP-I(0.1～1.0μg/kg·b.w.)均能以剂量依赖方式明显抑制福尔马林结肠壁粘膜下注射所诱导的大鼠急性伤害性行为反应.HWAP-I和SNX-111在0.2μg/kg·b.w.时即有稳定和明显的疼痛抑制作用.虽然在同等剂量时SNX-111镇痛效果略大于HWAP-I,但在≥0.5μg/kg·b.w.的较高剂量时SNX-111会引起大鼠产生明显的运动能力障碍,而HWAP-I在此剂量范围内则未见明显的这类毒副作用.盐酸吗啡镇痛作用起效快于HWAP-I和SNX-111,但维持时间较后二者短.结论作为一种新型的多肽类N-型电压敏感性钙通道拮抗剂,HWAP-I和其类似物SNX-111经蛛网膜下腔用药后,对结肠壁粘膜下注射福尔马林引起的大鼠急性炎性内脏疼痛具有和盐酸吗啡类似的、剂量依赖性抑制作用,且维持时间更长.

N-乙基马来酰亚胺敏感因子NSF与食管鳞癌细胞分化有关

目的 :克隆食管鳞癌细胞EC8712分化过程中受ATRA调控的靶基因。方法 :采用AP PCR技术从食管鳞癌细胞EC8712中克隆受ATRA调控的差异表达基因片段 ,并测序及作同源分析 ,采用Northern杂交进行验证。结果 :分离到在食管癌细胞分化过程中表达下调的一基因片段。该基因从ATRA处理一天开始表达被明显抑制 ,这种抑制持续整个诱导过程。该片段被克隆于 pGEM T载体并测序。同源分析结果表明 ,该基因片段与人N 乙基马来酰亚胺敏感因子 (NSF)基因高度同源 (IDENTITY :99% ) ,为人NSF基因片段。NSF基因在真核细胞囊泡转运系统中发挥着重要作用。结论 :参与囊泡转运的NSF基因在食管癌细胞分化过程中发挥着重要作用 ,NSF表达的抑制是囊泡转运系统转运活性下降的分子机制。

可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子结合蛋白受体与巨噬细胞的免疫学功能

背景:巨噬细胞进行抗原吞噬、分泌细胞因子以及迁移,均需囊泡转运,而可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子结合蛋白受体家族在囊泡转运过程中发挥重要作用。目的:全面了解可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子结合蛋白受体在巨噬细胞免疫活动中的功能和作用机制。方法:以"snare proteins,macrophages,SNARE蛋白,巨噬细胞"为检索词检索PubMed、Embase和维普数据库(2011-11),语言限定为英文或中文。经阅读题目和摘要进行初筛,排除研究方向与本文无关、内容重复性研究。另补充必要的对理解其作用机制有帮助的文献。结果与结论:最终纳入27篇文献。可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子结合蛋白受体家族是保证囊泡物质定向运输和准确卸载的分子基础,在巨噬细胞抗原吞噬、细胞因子分泌、以及移行过程中发挥作用。以可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子结合蛋白受体家族为切入点对巨噬细胞免疫活动进行研究是一种合理的策略。

腺病毒介导N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感因子小干扰RNA对心肌梗死大鼠心功能的影响

目的探索腺病毒介导的N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感因子小干扰RNA(NSF-siRNA)对急性心肌梗死大鼠模型心功能的影响。方法 36只成年SD大鼠,随机分为实验组、对照组和生理盐水组,每组12只。实验组经结扎左冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型,模型成功后,大鼠心脏左心室壁梗死区周围局部注射NSF-siRNA重组腺病毒载体。2周后,通过无创超声心动图测定心脏LVEF;用BL-420生物功能实验系统测定左心室舒张末压(LVEDP)及左心室压力最大上升速率(+dp/dtmax);随后取心脏,连续切片行TTC染色,沿分界线剪下梗死区,测量心肌梗死区质量占全部心脏组织质量的比例,观察心肌梗死范围。结果 2周时,实验组LVEF较对照组及生理盐水组明显增加[(46.0±7.5)%vs(34.0±9.0)%和(27.5±4.5)%,P<0.05];LVEDP较对照组及生理盐水组显著降低[(18.5±5.9)mm Hg vs(39.5±24.0)mm Hg和(26.6±24.0)mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),P<0.05];+dp/dtmax较对照组及生理盐水组明显增加[(9.7±1.2)mm Hg/s×103 vs(4.3±2.2)mm Hg/s×103和(5.2±2.5)mm Hg/s×103,P<0.05];与生理盐水组和对照组比较,实验组心肌梗死范围虽降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论心肌梗死周围注射NSF-siRNA腺病毒表达载体,能显著改善大鼠急性心肌梗死后2周心功能,但对心肌梗死范围无明显影响。

海马N-乙基马来酰亚胺敏感因子在肠易激综合征大鼠中的作用

目的:探究海马N-乙基马来酰亚胺敏感因子(N-ethylmaleimide sensitive factor,NSF)在慢性功能性内脏痛大鼠中枢敏化中的作用及机制。方法:(1)建立肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)模型大鼠:新生SD乳鼠出生第3天至第21天,每日固定时间给予3小时的母婴分离。对照组乳鼠不做任何处理,正常饲养。待大鼠生长至8周,检测大鼠腹外斜肌对40 mmHg和60 mmHg结直肠扩张引起的放电反应,评估大鼠的内脏痛觉敏感性;(2)免疫印迹法检测大鼠海马NSF的表达;(3)大鼠行海马脑立体定位置管,双侧海马CA1微量注射不同剂量NSF的特异性抑制剂pep2m,比较给药前后腹外斜肌放电反应的差异;(4)用含有pep2m的人工脑脊液灌流脑片60 min,取海马组织,免疫印迹法检测α-氨基-3-羟基-5-甲基异恶唑-4-丙酸(alpha-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic acid,AMPA)受体亚型谷氨酸受体2(glutamate receptor2,GluR2)的表达。结果:与正常大鼠相比,IBS模型大鼠海马NSF表达显著增高;海马双侧微量注射pep2m可剂量依赖性抑制IBS模型大鼠内脏痛觉敏感性;用含有pep2m的人工脑脊液灌流脑片后,IBS模型大鼠海马Glu R2表达显著降低。结论:海马NSF可通过增强AMPARs-Glu R2的功能,诱导慢性功能性内脏超敏反应。

可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体蛋白在肿瘤发生和发展中的作用机制研究进展

可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(SNARE)蛋白的主要生理功能是介导囊泡转运和膜融合,已被证明与多种神经系统以及内分泌系统疾病密切相关。近年来,越来越多的研究表明SNARE蛋白可能参与肿瘤的发生与发展,在肿瘤细胞侵袭转移、自噬以及化疗耐药等相关机制中扮演重要角色,有望成为一种新的肿瘤标志物与治疗靶点。本文就SNARE蛋白在肿瘤侵袭转移、自噬、化疗耐药中的相关作用机制进行综述,并探讨其作为肿瘤标志物和治疗靶点的潜在应用价值。

有向部分半群作用下的敏感性

在有向部分半群作用下,研究了动力系统的初值敏感性和n-敏感性,得到了初值敏感性和n-敏感性的若干结论:(1)对于紧致度量空间(X,d)上可交换的Λ-拓扑动力系统(X,{T}Λ),如果(X,{T}Λ)是传递的C系统,那么这个系统是几乎等度连续的当且仅当它不是敏感的.(2)对于Λ-拓扑动力系统(X,{T}Λ),如果X是局部连通空间,那么对于任意n≥2,(X,{T}Λ)是敏感的当且仅当它是n-敏感的.

拓扑空间的敏感性

文章研究了一致空间、Hausdorff空间和度量空间上的一些敏感性质。分别用Hausdorff空间中的有限开覆盖和一致空间中的“从”介绍了n-敏感、敏感串和局部proximal串等概念,证明了这3个概念两种版本的定义在紧致的Hausdorff空间上分别是互相等价的。更进一步地,如果在一个紧致的度量空间上,那么这3个概念两种版本的定义与它们的标准定义也分别是互相等价的。

有关初值敏感集的几点注记

用族的语言探讨n初值敏感与相对于集合初值敏感,提出了F-n-初值敏感与相对于集合为F初值敏感的概念,得到了一些基本结论.

Synthesis and Characterization of Poly(N-Vinyl-2-Pyrrolidone/Itaconic Acid) Hydrogel

With N-vinyl-2-pyrrolidone (NVP) and itaconic acid(IA), poly(N-vinyl-2-pyrrolidone/itaconic acid)[P(NVP/IA)] hydrogel was synthesized by free radical solution polymerization. The structure of this (P(NVP/IA)) was characterized by IR. Effects of concentration of itaconic acid, amount of cross-link agent, N,N′-methylene-bis-acrylamide, reaction temperature, and time on properties of swelling ratio(SR) of the hydrogel were investigated.The results show that the best swelling property of the hydrogel is obtained at 50 ℃ and 1.5 h. pH sensitivity increases as the concentration of itaconic acid in the hydrogel system increases. Swelling ratio of the hydrogel decreases as the amount of cross-link agent increases.

胶质细胞内SNARE复合体功能及其与抑郁障碍发生的关系

抑郁障碍是现代人类致残和死亡的一个常见原因,部分患者对现有的抗抑郁障碍药物并不敏感,复发率极高。现有的抗抑郁障碍药物存在许多问题,迫切需要找到一种针对多个靶点的新型抗抑郁药。近年来的研究发现,可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor,SNARE)复合体与抑郁障碍发生及进展密切相关。该文总结和归纳了胶质细胞内SNARE复合体在抑郁障碍发生过程中的潜在作用机制,并对相关研究进行综述,以期为临床上开发新型的抗抑郁障碍药物提供新的思路。

虎纹蜘蛛毒素-Ⅰ对大鼠急性内脏疼痛的抑制性效应及与ω-芋螺毒素的比较研究(英文)

研究一种新型的N型电压敏感性钙通道阻断剂虎纹蜘蛛毒素 Ⅰ (HWTX Ⅰ ) ,硬脊膜外腔用药对福尔马林结肠壁粘膜下注射诱导的大鼠急性炎性内脏疼痛的抑制性效应 .5 %福尔马林溶液15 0 μl快速注入SD大鼠乙状结肠壁粘膜下层 ,可产生几种可评估的反映内脏疼痛的固定性行为 .在此伤害性刺激反应前 30min ,经留置的导管向大鼠硬脊膜外腔分别注入各待测药品和试剂 ,观察其对该模型疼痛行为的影响 .与生理盐水阴性对照组 ,美国同类镇痛新药ω 芋螺毒素 (ω CTX MVIIA)和吗啡两个阳性对照组比较 ,HWTX Ⅰ五个剂量组 ,进行大鼠硬脊膜外腔注药 ,均能以剂量依赖方式明显抑制福尔马林结肠壁注射诱导的伤害性行为反应 .HWTX Ⅰ和ω CTX MVIIA在 2 0μg kg体重剂量时 ,其抑制效果是稳定和明显的 ;在 5 0 70 μg kg体重剂量下 ,抑制效果更为显著 .HWTX Ⅰ量 效实验发现 ,在等剂量下 ,ω CTX MVIIA镇痛效果略高于HWTX Ⅰ .但在 5 0～ 75 μg kg较高剂量下 ,ω CTX MVIIA可能引起大鼠产生明显的运动能力障碍 ,而HWTX Ⅰ在该剂量范围内则未见类似的毒副作用 .盐酸吗啡镇痛作用起效快于HWTX Ⅰ和ω CTX MVIIA ,但维持时间较后二者短 .实验结果表明 :同为多肽类N型电压敏感性钙通道拮抗剂 ,HWTX Ⅰ和ω CTX MVIIA大鼠硬脊?

虎纹捕鸟蛛毒素-X的化学合成及其鉴定

应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了虎纹捕鸟蛛毒素-X(huwentoxin-X,HWTX-X),并在含5mmol/L GSH和0.5mmol/L GSSG的0.1mol/L Tris-HCl溶液(pH8.0)中氧化复性;复性产物与天然多肽具有相同的分子质量,在反相HPLC上共洗脱,其一维核磁共振谱规则分散,表明合成多肽形成了3对二硫键和稳定的空间结构,并与天然多肽相同;此合成的多肽能专一性抑制大鼠背根神经节细胞上N-型电压敏感钙离子通道,其IC50约40nmol/L.HWTX-X的成功合成和鉴定为进一步研究HWTX-X的结构与功能关系、药理学性质以及新型镇痛药物研发奠定了基础.

神经末梢突触囊泡相关的调节蛋白

神经末梢突触囊泡释放神经递质是一个受到精细调控的过程,涉及多种蛋白质间的网络状相互作用,包括蛋白复合物的组装和构象调节、突触囊泡的定向性运输、囊泡入坞、膜融合、递质释放以及囊泡膜和蛋白的重摄取等,这一大循环里的每一步都离不开各种相关蛋白的相互作用。该文围绕这些调控蛋白的分子结构、生理功能以及蛋白间的相互作用作一综述。

芋螺毒素MⅦA研究进展

来自芋螺(Conus)的芋螺毒素(conotoxin)是一类具有独特神经药理活性作用的多肽,它们能够高特异选择性识别、作用其受体,这是在五千万年进化史中与其受体相互作用形成的。其中,ω-芋螺毒素MⅦA来自致幻芋螺(Conusmagus),是一种高选择性的N-型电压敏感型Ca2+通道阻断剂。研究表明它具有强大的镇痛活性,并对脑缺血所造成的神经损伤具有保护作用。本文综述芋螺毒素MⅦA的相关基础、临床前及临床研究。

束缚应激大鼠中枢AMPA受体和相关蛋白mRNA表达的变化及逍遥散对其调节作用

目的观察海马及杏仁核α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体各亚基和相关调节蛋白在束缚应激状态下的mRNA表达变化及逍遥散的作用。方法使用捆绑的方法制作束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7天后和21天后检测模型大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回(DG)、杏仁核AMPA受体亚基GluR1-4、N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性融合蛋白(NSF)、PKC作用蛋白1(PICK1)mRNA表达的情况。结果7天束缚应激状态下,GluR1 mRNA在海马CA1区表达显著下降(P<0.05),在CA3区和杏仁核表达显著上升(均P<0.05),GluR2、GluR3 mRNA在杏仁核(均P<0.05),GluR4 mRNA在CA1区(P<0.01)表达显著增高,NSF、PICK1 mRNA表达在杏仁核有明显增高趋势;逍遥散对CA1区GluR4及杏仁核GluR1、GluR2、GluR3 mRNA表达变化有显著调节作用(P<0.05,P<0.01)。21天束缚应激状态下,CA1区GluR4、DG的GluR2 mRNA表达显著下降(均P<0.05),杏仁核GluR1 mRNA表达显著增强(P<0.01);逍遥散对CA1区GluR1、GluR4 mRNA表达变化有显著调节作用(均P<0.05)。结论短期重复应激对于AMPA受体各亚基mRNA表达的影响较强,逍遥散对AMPA受体各亚基mRNA表达的调节在海马CA1区和杏仁核较明显。

二甲双胍作用于3T3-L1前脂肪细胞诱导阶段对v-SNAREs蛋白家族mRNA表达的影响

目的 观察3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中二甲双胍对囊泡相关膜蛋白(VAMPs)mRNA表达变化,探讨二甲双胍促进葡萄糖转运子4(GLUT4)转运中的作用机制。方法 在3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中,分别持续给予不同浓度的二甲双胍(0、0.5mmol/L、1mmol/L、2mmol/L)干预12d后,比较不同浓度的二甲双胍对AMPK、GLUT4及VAMP2、VAMP3、VAMP4、VAMP5、VAMP7、VAMP8的mRNA水平。结果 与0mmol/L组相比,0.5mmol/L组GLUT4、VAMP2、VAMP3、VAMP8mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与0mmol/L组相比,1mmol/L组上调GLUT4、VAMP2、VAMP3、VAMP8mRNA水平升高(P<0.05);与1mmol/L组相比,2mmol/L组下调GLUT4及VAMP2、VAMP3、VAMP5、VAMP8mRNA表达水平(P<0.05)。各组间AMPK1、VAMP4、VAMP7的mRNA表达水平比较差异无统计学意义。结论 二甲双胍可以作用于前脂肪细胞的诱导分化过程,且呈剂量依赖性地上调脂肪细胞中GLUT4及VAMP2、VAMP3、VAMP8mRNA的表达。

MPTP致空间学习记忆障碍小鼠脑内NSF表达变化

目的:观察1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致空间学习记忆障碍小鼠脑内N-乙基马来酰亚胺敏感融合蛋白(NSF)表达变化。方法:C57BL/6J小鼠随机分为2组(n=24),包括对照组和MPTP处理组,雌雄各半。MPTP处理组给予C57BL/6J小鼠MPTP(20 mg/0.2 ml/(kg·d),s.c.)连续8 d,每天一次,对照组给予等量的生理盐水用同样方法处理。第9天起采用水迷宫实验,连续4 d检测C57BL/6J小鼠空间学习记忆的改变,水迷宫实验测试结束后,采用免疫组化和Western blot方法检测小鼠脑内NSF表达改变。结果:每组选取小鼠24只进行水迷宫测试,与对照组相比,MPTP处理组小鼠出现空间学习记忆障碍;每组选取小鼠5只进行免疫组化检测,同时每组选取5只小鼠进行Western blot检测,海马CA1区NSF免疫反应活性明显减弱(P<0.01),前额叶皮层NSF的免疫反应活性(P<0.01)和蛋白表达(P<0.05)都明显增高。结论:MPTP致空间学习记忆障碍小鼠脑内NSF表达出现异常,可能参与MPTP致空间学习记忆障碍的发病机制。