糖尿病大鼠肾组织中AKT的表达及意义

目的观察Akt1和Akt2在糖尿病大鼠肾组织中的表达并探讨其是否参与糖尿病肾病(DN)发病过程。方法链脲佐菌素(STZ)诱发大鼠糖尿病(DM),分为2、4、8、12、16 w和24 w组,每一时点均设相应的正常对照组。测定各组血糖、24 h尿蛋白、血肌酐(Scr)、肾脏指数。HE和PAS染色光镜观察肾脏病理改变。免疫组化方法检测肾皮质Akt1、Akt2、TGF-β1、α-SMA和FN的表达,Western印迹和RT-PCR法检测Akt1、Akt2蛋白及mRNA表达水平。结果 DM各组大鼠的血糖、24 h尿蛋白、血肌酐、肾脏指数均较正常对照组明显升高(P<0.05,P<0.01),免疫组化显示DM各组TGF-β1、α-SMA和FN阳性染色较正常组明显增多(P<0.01),以12 w增多最为明显,分别为19.67±2.73、9.50±3.45、22.17±2.79,免疫组化、Western印迹及RT-PCR显示DM各组Akt1及Akt2蛋白和mRNA表达较正常组明显增多(P<0.01)。免疫组化显示Akt1与TGF-β1、FN蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.694,r=0.532,P<0.01),Akt2与TGF-β1、FN蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.789,r=0.743,P<0.01)。结论 Akt1、Akt2蛋白在DM大鼠肾组织过度表达,提示PI3K/Akt信号通路可能参与了DN的发病机制。

长链非编码RNA HOTAIR对非小细胞肺癌迁移与侵袭能力的影响

目的:探讨非小细胞肺癌组织中长链非编码RNA HOTAIR的表达情况及其对细胞侵袭与迁移水平的作用。方法:利用定量的反转录PCR技术检测50例非小细胞肺癌组织中LncRNA HOTAIR的表达,然后通过过表达技术与RNA干扰技术研究LncRNA HOTAIR的主要功能。再对其pcDNA-HOTAIR与si-HOTAIR进行转染调控LncRNA HOTAIR的表达,设置空白载体与阴性对照组,应用反转录PCR进行转染效率的定量检测。然后分别实施MTT与Transwell两种方法来判断LncRNA HOTAIR的异常表达对非小细胞肺癌细胞活性的干预作用。结果:在非小细胞肺癌组织中LncRNA HOTAIR的相对表达水平是(24.50±7.43)。LncRNA HOTAIR在SPC-A1和SK-MES-1两种细胞中的相对表达水平比在正常的支气管上皮细胞中更高,在A549细胞中的相对表达水平比在正常的支气管上皮细胞中更低。而经2d的转染siRNA后,LncRNA HOTAIR在A549与SPC-A1两种细胞中的表达水平降低;pcDNA3.1-HOTAIR后,LncRNA HOTAIR在A549细胞中的表达水平升高。利用RNA干扰技术阻碍HOTAIR的表达水平,不能抑制非小细胞肺癌细胞的增殖。而利用si-HOTAIR的转染降低LncRNA HOTAIR的表达水平能够阻碍癌细胞的迁移与侵袭作用(P<0.05);而LncRNA HOTAIR的过度表达能够明显推动癌细胞的迁移与侵袭作用(P<0.05)。结论:HOTAIR在非小细胞肺癌中的高水平异常表达,能够提高非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭水平,可能和患者的不良预后有联系。

乙酰半胱氨酸对特发性肺间质纤维化肺成纤维细胞增殖及胶原合成的影响及机制

目的探讨乙酰半胱氨酸(NAC)对特发性肺间质纤维化(IPF)肺成纤维细胞增殖及胶原合成的影响及其机制。方法分离培养IPF患者及正常对照肺成纤维细胞,MTT法检测NAC(5、10、20、40mmol/L)对细胞增殖的影响;再分为NAC(20mmol/L)、重组人转化生长因子-β1(TGF-β1组)单用及联用组和正常对照组,RT-PCR检测I型前胶原mRNA的表达变化,Western blotting检测α-肌动蛋白(α-SMA)及信号转导与转录激活因子-3(STAT3)的表达。结果 5、10、20、40mmol/L NAC对正常及IPF患者肺成纤维细胞增殖均具有抑制作用,且具有明显的剂量依赖性。与正常对照组相比,NAC组能够明显抑制正常及IPF肺成纤维细胞Ⅰ型前胶原mRNA的表达(分别为0.28±0.04vs.0.52±0.07,P=0.001;0.56±0.08 vs.0.74±0.03,P=0.017);NAC联用TGF-β则可以减弱其抑制作用(0.75±0.03 vs.0.28±0.04,P=0.012;0.71±0.03 vs.0.56±0.08,P=0.000)。正常肺成纤维细胞表达一定水平的α-SMA,而IPF肺成纤维细胞则表达水平明显增高(0.97±0.06 vs.0.63±0.04,P=0.001),NAC能够明显抑制IPF肺成纤维细胞α-SMA及STAT3表达(分别为0.48±0.02 vs.0.97±0.06,P=0.000及0.43±0.05 vs.0.76±0.02,P=0.000),NAC联用TGF-β则可以减弱其抑制作用(0.93±0.04 vs.0.48±0.02及0.89±0.03 vs.0.43±0.05,P均=0.000)。结论 NAC能够抑制正常及IPF肺成纤维细胞增殖及胶原合成,这可能与抑制α-SMA及STAT3的表达有关,但这种作用可被TGF-β所抑制。

上皮-间质转化在胰腺纤维化中的作用及大柴胡汤的干预机制

目的探索上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)与慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)胰腺纤维化的关系及大柴胡汤防治CP的机制。方法健康昆明小鼠78只,随机分为:空白组(n=18)、CP组(n=30)及大柴胡汤组(n=30)。CP组和大柴胡汤组腹腔注射20%左旋精氨酸(L-arginine,3 g/kg,每周1次),空白组腹腔注射等体积的生理盐水。大柴胡汤组在注射L-arginine 1周后,同时给予注射L-arginine和大柴胡汤灌胃治疗5周(14 g/kg,每日一次)。从给药开始计时,各组分别于第2,4,6周麻醉处死小鼠,摘取小鼠胰腺组织,通过HE染色观察胰腺组织的病理改变,免疫组化观察胰腺组织中E-cadherin、N-cadherin、α-SMA的表达变化,Western blotting检测胰腺组织中E-cadherin、N-cadherin蛋白含量的改变。结果与空白组相比,CP组小鼠胰腺组织中胶原纤维沉积随着造模时间延长不断增加,α-SMA表达逐渐增多,E-cadherin表达逐渐减少,在第4,6周时最为显著(P<0.01),而N-cadherin表达逐渐增多,在第6周最为显著(P<0.01)。与CP组相比,大柴胡汤组第4,6周仅见部分腺泡萎缩及少量炎细胞浸润,胶原纤维沉积明显减轻,α-SMA表达显著减少,E-cadherin在第6周显著升高(P<0.01),而N-cadherin在第6周显著下降(P<0.01)。结论在20%L-arginine刺激作用下,小鼠胰腺实质细胞转化为间质细胞,表明EMT参与CP胰腺纤维化的进展。大柴胡汤可通过抑制EMT转化,减轻胰腺纤维化,对CP有明显治疗作用。

艾迪注射液对N-亚硝基二乙胺(DEN)诱导的大鼠肝癌模型的干预作用

目的探讨艾迪注射液对N-亚硝基二乙胺(diethylnitrosamine,DEN)诱导的Wistar大鼠肝癌模型的干预作用。方法健康Wistar大鼠30只,随机分为对照组、模型组、艾迪注射液处理组,每组10只。对照组按0.1 mL/kg的剂量腹腔注射生理盐水,每周注射1次,共注射20 w。模型组大鼠给予一次性腹腔注射100 mg/kg体重的DEN,后给予0.05%DEN自由饮水。艾迪注射液处理组大鼠开始腹腔注射DEN时即给予艾迪注射液1 mL/kg,后每周注射1次,共注射20周,取血测定大鼠血清中天门冬氨酸转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)含量,取各组大鼠肝脏组织进行病理学检测。用免疫组织化学染色检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和CD34蛋白的表达。结果(1)与对照组比较,模型组大鼠血清中ALT、AST、ALP均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,艾迪注射液处理组ALT、ALP明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),AST差异无统计学意义。(2)病理结果显示:对照组肝组织结构及细胞形态正常;模型组肝组织结构破坏,肝细胞损伤严重,大量胶原纤维将癌变的肝细胞分隔呈灶状分布,Masson染色显示大量蓝色胶原纤维增生,包裹坏死区;艾迪注射液处理组可见假小叶增多,Masson染色可见大量胶原纤维分隔形成的假小叶,有大量炎细胞浸润,可见干酪样坏死。(3)与对照组比较,模型组、艾迪注射液处理组肝癌组织中α-SMA、CD34表达升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,艾迪注射液处理组的α-SMA、CD34明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论艾迪注射液对DEN所致肝癌大鼠有一定的疗效,艾迪注射液能缓解肝癌所致的肝组织损伤,艾迪注射液干预的大鼠α-SMA和CD34表达有降低趋势,艾迪注射液可能通过抑制α-SMA和CD34表达,抑制肿瘤的浸润转移,发挥抑癌的作用。

SMP-MAX和R-SMP-MAX转接器的设计及三阶互调性能比较

文章介绍了笔者所设计的SMP-Max、R-SMP-MAX转SMA和转N型转接器的规格及性能,并对其进行了三阶互调性能的测试和比较。

TGF-β1信号在成纤维细胞促血管生成中作用的研究

该研究旨在探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)信号在成纤维细胞促血管生成中的作用。实验通过ELISA检测了Hepa1-6细胞上清液中TGF-β1的含量。将胎鼠成纤维细胞分三组,分别用普通培养液(DMEM/F12组)、含Hepa1-6细胞上清液的条件培养液(Hepa1-6组)以及加入1μmol/L TGF-β1受体抑制剂(GW788388)的条件培养液(GWHepa1-6组)培养。采用免疫荧光双染法、q PCR检测培养的成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)的蛋白质及m RNA表达水平。采用基质胶(Matrigel)血管形成实验检测成纤维细胞上清液作用下EA.hy 926细胞的血管形成能力。ELISA结果显示,与DMEM/F12相比,Hepa1-6细胞上清液中TGF-β1表达量明显升高(P<0.01)。免疫荧光双染法和q PCR结果显示,与DMEM/F12组和GWHepa1-6组比较,Hepa1-6组成纤维细胞中α-SMA和VEGFA蛋白质及m RNA相对水平明显增加(P<0.01),且在第5 d时达最高,其上清液诱导EA.hy 926细胞的血管形成能力明显增强(P<0.01)。该研究表明,TGF-β1信号通路可以诱导成纤维细胞α-SMA和VEGFA的表达,进而促进EA.hy 926细胞形成小管样结构。

补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠A549/DDP细胞上皮-间质转化的影响

目的:探讨补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠肿瘤细胞A549/DDP上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:BALB/C裸鼠随机分为空载(A)组,模型(B)组,顺铂(C)组和补中益气汤低(D)、中(E)、高(F)剂量组。A组接种TGF-β1空载慢病毒转染的A549/DDP细胞,其余组接种TGF-β1稳定过表达的A549/DDP细胞。干预后处死裸鼠,取肿瘤组织。称量瘤重,计算抑瘤率;HE染色观察肿瘤细胞形态;免疫组化、Western Blot、Real-time PCR检测EMT分子标志物波形蛋白(Vim)、N-钙黏蛋白(N-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cad)、α-连环蛋白(α-CA)的表达情况。结果:与B组比较,D、E、F组瘤重减小,抑瘤率上升(P<0.05);B组细胞纺锤样改变,D、E、F组细胞圆形或椭圆形增多;与B组比较,E、F组Vim、N-cad、α-SMA蛋白及mRNA表达均下调(P<0.05),E-cad、α-CA蛋白及mRNA表达均上调(P<0.05);各中药组EMT不同程度改善。结论:补中益气汤对肺腺癌A549/DDP细胞EMT有明显的抑制作用,并具有一定的剂量依赖性。

黄芪甲苷对肝纤维化模型大鼠的改善作用机制研究

目的 观察黄芪甲苷对CCl4诱导的肝纤维化模型大鼠的改善作用及可能机制。方法 将SD大鼠随机分为正常组、模型组、水飞蓟宾组(30 mg·kg^(–1))、黄芪甲苷组(14 mg·kg^(–1))。采用50%CCl4橄榄油溶液(1.5 mL·kg^(–1))腹腔注射建立肝纤维化模型,每周2次,持续8周。然后各组大鼠按照每天10 mL·kg^(–1)灌胃相应药物,共4周。检测大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量;计算肝脏指数;苏木素-伊红(HE)及Masson染色观察肝组织病理变化;Western blotting检测转化生长因子(TGF-β1)、上皮间质转化标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测TGF-β1和E-cadherin的mRNA表达水平。结果 与正常组相比,模型组大鼠肝脏指数显著升高(P<0.01),血清中ALT、AST含量明显上升(P<0.01),胶原容积分数明显增加(P<0.01),肝组织内E-cadherin蛋白表达明显下降(P<0.01),α-SMA、N-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.01),TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平明显上升(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,黄芪甲苷组肝脏指数大幅下降(P<0.01),血清中ALT和AST含量明显降低(P<0.01),胶原容积分数明显下降(P<0.01),肝组织内E-cadherin蛋白表达上调(P<0.05),α-SMA、N-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.01),TGF-β1蛋白和mRNA表达下降(P<0.01或P<0.05)。结论 黄芪甲苷对CCl4诱导肝纤维化模型大鼠具有改善作用,其机制可能与下调N-cadherin、α-SMA、TGF-β1蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达有关。